【摘要】：目的:甲狀腺是人體重要的內(nèi)分泌腺體,甲狀腺激素對調(diào)節(jié)身體代謝的整個過程十分重要,尤其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)成熟期間甲狀腺激素在調(diào)節(jié)神經(jīng)生長和突觸形成上起著關(guān)鍵作用。人類胚胎或新生兒如若缺乏會導(dǎo)致先天性甲減,致使患兒出現(xiàn)神經(jīng)精神損傷及發(fā)育障礙,因此應(yīng)對先天性甲減進(jìn)行篩查,以便早期診斷和治療。研究發(fā)現(xiàn)來自胎兒流往母親血清和尿中的3,3′-T_2S與一種相關(guān)的W物質(zhì)(3,3′-T_2S的類似物,其化學(xué)和免疫學(xué)性質(zhì)類似于3,3′-T_2S,對其抗體有明顯的交叉反應(yīng),但不是一種物質(zhì))可反應(yīng)胎兒甲狀腺功能。因此我們首先制備3,3′-T_2的~(125)Ⅰ標(biāo)記物并摸索酸化3,3′-T_2的最佳純化條件,為進(jìn)一步放免方法的建立及臨床應(yīng)用打下良好的基礎(chǔ)。 方法:本研究采用氯胺T法以~(125)碘化鈉標(biāo)記3,3′-T_2;然后將標(biāo)記反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行柱層析(Sephadex LH-20,柱床1.5ml),以0.4mol/L pH6.2的磷酸緩沖液1ml、蒸餾水4ml、洗脫液Ⅰ(2mol/L氨水:甲醇=1:99,vol/vol)5ml洗脫收集所需產(chǎn)物;將收集產(chǎn)物于3cm×40cm Whatman Ⅰ濾紙條上點(diǎn)樣并在37℃恒溫、密閉15小時條件下進(jìn)行下行紙層析分離;以3,3′-T_2純品作為標(biāo)準(zhǔn),通過下行紙層析、放射自顯影、茚三酮顯色等方法對標(biāo)記產(chǎn)物進(jìn)行鑒定,以確認(rèn)是否是~(125)Ⅰ標(biāo)記的3,3′-T_2;在通風(fēng)櫥中冰浴條件下將氯磺酸與二甲基甲酰胺按體積1:4緩慢混合后,取200μl加入氮?dú)獯蹈傻膥(125)Ⅰ-3,3′-T_2試管內(nèi),室溫避光過夜進(jìn)行磺酸化后加入800μl冰水混勻;將磺酸化產(chǎn)物進(jìn)行柱層析(Sephadex LH-20,柱床分別為1.5ml、5ml、30ml、60m1),先以0.1mol/L鹽酸平衡柱子,上樣后相繼以0.1 mol/L鹽酸、蒸餾水、洗脫液Ⅱ(1mol/L氨水:乙醇=1:99,vol/vol)進(jìn)行洗脫,收集各管并進(jìn)行放射性計(jì)數(shù)、作圖。結(jié)果:3,3′-T_2的~(125)Ⅰ標(biāo)記率為26.57%,放化純度為95.24%,比放射性為116μCi/μg,經(jīng)Sephadex LH-20柱分離出現(xiàn)2個峰;標(biāo)記產(chǎn)物下行紙層析分離后經(jīng)放射自顯影鑒定可見~(125)Ⅰ-rT_3、~(125)Ⅰ-3,3′-T_2、游離~(125)Ⅰ,計(jì)算其Rf值分別為0.33、0.46、0.74;經(jīng)下行紙層析、放射自顯影、茚三酮顯色的聯(lián)合應(yīng)用及標(biāo)準(zhǔn)品的對照證明Rf值0.46位置的物質(zhì)就是~(125)Ⅰ-3,3′-T_2;酸化產(chǎn)物進(jìn)行柱層
【圖文】：

3’一TZ圖83，3’一T:紙層析后茹三酮顯色結(jié)果、‘2，，I一3，3，一T:的酸化產(chǎn)物(’251一3，3’一TZS)純化最佳條件結(jié)果‘251一3，3’一T:磺酸化產(chǎn)物經(jīng)不同長度sPehdaxeLH一20層析柱純化，伴洗脫液分別洗脫出游離’251、’25工一3，3’一TZs、3，3’一TZ，它們分別對應(yīng)圖9、、圖11、圖12的三個峰，四種方案回收率均在90%以上。八曰n甘八

本文編號：2615452