【摘要】：目的探討anti-EGFR-PEG-SPIO納米分子探針對表皮生長因子受體(EGFR)高表達肺腺癌細胞的靶向性及利用MRI對其監(jiān)測的可行性。方法制備anti-EGFR靶向納米分子探針(anti-EGFR-PEG-SPIO)及非靶向納米分子探針(PEG-SPIO),行電鏡(TEM)觀察,并測量水合粒徑及弛豫率等表征。之后將不同Fe濃度(0、10、20、40、60、80μg/ml)的anti-EGFR-PEG-SPIO和PEG-SPIO分別與H460細胞孵育2 h后,進行體外MR成像,觀察其T2WI信號強度及信號強度變化率。行H460細胞普魯士藍染色和電鏡觀察細胞攝取Fe情況。結果不同Fe濃度anti-EGFR-PEG-SPIO及PEG-SPIO探針分別與H460細胞孵育2 h后,前者顯示H460細胞的信號強度隨Fe濃度的升高而明顯減低,Fe濃度為60μg/ml時,相對于0、10、20、40、80μg/ml,信號強度變化率約為-58.2%、-82.7%、-94.4%和-98.3%;而后者顯示H460細胞信號強度減低相對不明顯。普魯士藍染色及TEM結果顯示anti-EGFR-PEG-SPIO的H460細胞內可見大量鐵顆粒沉積,而PEG-SPIO的腫瘤細胞內僅可見少量鐵顆粒沉積。結論自行制備的anti-EGFR-PEG-SPIO分子探針對H460肺腺癌細胞具有靶向效應,采用3.0T MR掃描儀可對其進行監(jiān)測。
【圖文】：

O和PEG-SPIO的T2WI信號差異無統(tǒng)計學意義(t=0.41，P＞0.05)，Fe濃度為10、20、40、80μg/ml時，anti-EGFＲ-PEG-SPIO和PEG-SPIO的T2WI信號差異有統(tǒng)計學意義(t=6.94、10.40、13.98、7.71，P均＜0.01)。表1不同Fe濃度anti-EGFＲ-PEG-SPIO及PEG-SPIO分子探針與H460細胞孵育后T2WI信號強度(－x±s)Fe濃度(μg/ml)anti-EGFＲ-PEG-SPIOPEG-SPIO01441．50±43．121424．33±58．6410603．00±26．14831．83±38．1920246．33±29．15526．33±28．604081．17±7．55287．00±34．098025．17±3．19198．33±18．14圖4T2WI信號強度A．anti-EGFＲ-PEG-SPIO(下排)和PEG-SPIO(上排)的T2WI信號;B．anti-EGFＲ-PEG-SPIO和PEG-SPIO探針T2WI信號強化趨勢圖3討論EGFＲ在多種上皮性腫瘤中呈高度表達或過表達，如非小細胞型肺癌、乳腺癌、胃癌、宮頸癌及頭頸部腫瘤，而在正常表皮細胞常不表達，具有較高的組織特異性。研究［3-5］表明anti-EGFＲ單克隆抗體與肺腺癌腫瘤細胞有很強的結合能力。SPIO具有良好的水溶性及超順磁效應，常被用作MＲIT2負順磁效應對比劑、藥物傳遞的載體及腫瘤的熱療［6-8］。利用anti-EG-FＲ單克隆抗體作為載體，可將SPIO攜帶至腫瘤細胞表面，通過EGFＲ配體介導細胞內化并將其攝入細胞漿，降低腫瘤T2值，對藥物的釋放監(jiān)測及提高腫瘤診斷敏感性具有重要價值，可實現MＲI對腫瘤治療監(jiān)測的可視化。本研究采用anti-EGFＲ抗體修飾PEG包裹的SPIO，構建anti-EGFＲ-PEG-SPIO靶向MＲI分子探針，利用不同Fe濃度的分子探針與H460細胞孵育，根據腫瘤細胞攝取不同Fe含量的對比劑而形成細胞T2信號強度差異，從細胞水平探討腫瘤的監(jiān)測可視化以及細胞靶向成像在臨床診療中的應用。TEM顯示磁性納米粒子具有良好分散?

中，分別將Fe濃度為0、10、20、40、80μg/ml的anti-EGFＲ-PEG-SPIO和PEG-SPIO探針與1×106的H460細胞孵育2h，PBS溶液沖洗3次，經胰蛋白酶消化后重懸于0.5ml1%瓊脂糖的EP管。采用3.0TMＲ掃描儀、動物小線圈對懸浮細胞進行成像。采用T2WI快速自旋轉回波序列:TＲ3000ms，TE90.4ms，層厚1mm，層間距1mm，矩陣256×256，FOV8cm×8cm信號強度分析:分別選擇每各樣本大小一致、同一橫截面的ＲOI(面積＞30mm2)測量T2WI信號強度，同一樣品測量6次，計算平均值及標準差。1.4統(tǒng)計學分析采用SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件。符合正態(tài)分布的計量資料以－x±s表示。不同Fe濃度anti-EGFＲ-PEG-SPIO及PEG-SPIO探針與H460細胞孵育后T2WI信號強度比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK及LSD檢驗;相同Fe濃度下，anti-EGFＲ-PEG-SPIO與PEG-SPIO探針的T2WI信號差異采用配對t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結果2.1Anti-EGFＲ靶向與非靶向納米聚合物的表征TEM所測SPIO的粒徑為9.2nm，納米粒子分布均勻，無粘連(圖1A、B)。耦聯anti-EGFＲ前后納米聚合物水合粒徑約38.5nm和45.7nm(圖1C)。MＲI所圖1anti-EGFＲ靶向與非靶向納米聚合物的表征A、B．SPIO的電鏡圖及粒徑直徑分布圖;C．耦聯anti-EGFＲ前后納米聚合物水合粒徑;D．anti-EGFＲ-PEG-SPIO和PEG-SPIO的Ｒ2值圖2anti-EGFＲ-PEG-SPIO和PEG-SPIO的MTT圖3體內H460細胞攝取實驗an-ti-EGFＲ-PEG-SPIO(A)和PEG-SPIO(B)的普魯士藍染色(×200);anti-EGFＲ-PEG-SPIO(C)和PEG-SPIO(D)的細胞攝取電鏡表現(×20000)箭示Fe顆粒染色聚積中國醫(yī)學影像技術2017年第33卷第12期ChinJMedImagingTechnol，，2017，Vol33，No12·1799·

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