本文關(guān)鍵詞：胰高血糖素樣肽-2對新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎保護(hù)作用機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 胰高血糖素樣肽-2 新生大鼠 壞死性小腸結(jié)腸炎 Caspase-3 細(xì)胞凋亡

【摘要】：目的:建立新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)模型,研究胰高血糖素樣肽-2(GLP-2)對NEC新生大鼠腸組織病理損傷和腸組織內(nèi)Caspase-3蛋白表達(dá)的影響,探討GLP-2對NEC的保護(hù)作用及其機(jī)制,為GLP-2應(yīng)用于人類NEC的防治提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)對象與方法:1.實(shí)驗(yàn)動物:24只3日齡新生SD大鼠,雌雄不限,隨機(jī)分為正常對照組、NEC模型組、GLP-2干預(yù)組,每組8只。2.NEC模型的建立:新生SD大鼠3日齡時置于自制保暖箱內(nèi),給予鼠乳代乳品人工喂養(yǎng),每4小時1次,脂多糖(LPS)溶液灌胃一日1次,建立NEC大鼠模型。3.實(shí)驗(yàn)方案:正常對照組:出生3日后繼續(xù)與母鼠同籠,鼠乳喂養(yǎng),自由采食,不做干預(yù)。NEC模型組:建立NEC模型,同時每天給予生理鹽水5ml/Kg皮下注射,每12小時1次。GLP-2干預(yù)組:建立NEC模型,同時給予GLP-2 250ug/Kg次皮下注射,每12小時1次。4.標(biāo)本采集及處理:所有大鼠最后一次喂養(yǎng)后禁食12小時,斷頸處死,取十二指腸至肛門的所有腸組織,觀察腸組織大體形態(tài)。取回腸末段腸組織,磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗干凈后,于4%多聚甲醛溶液固定,石蠟包埋,制備3μm的連續(xù)切片,HE染色進(jìn)行腸組織病理評分;免疫組織化學(xué)染色檢測腸道內(nèi)Caspase-3蛋白的表達(dá)情況,并測量其累積光密度值(IOD)。5.觀察指標(biāo):每天定時稱量各只大鼠體重,觀察一般情況如皮膚顏色、體溫、對刺激反應(yīng)、活動度、有無吐奶及腹脹等,并記錄。6.統(tǒng)計(jì)分析:使用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.一般情況正常對照組大鼠皮膚顏色粉紅,每天進(jìn)食正常,無吐奶、腹脹,活動度良好,對刺激反應(yīng)好;NEC模型組大鼠造模24小時即出現(xiàn)皮膚顏色變白,吐奶、胃潴留、腹脹,精神萎靡,活動減少,對刺激反應(yīng)差,嚴(yán)重者可出現(xiàn)青紫、低體溫等;GLP-2干預(yù)組大鼠上述癥狀于24小時至48小時出現(xiàn),且相對輕。2.體重變化正常對照組、NEC模型組、GLP-2干預(yù)組新生大鼠實(shí)驗(yàn)前后的體重變化(g)分別為1.63±0.34、-0.75±0.10、-0.30±0.08。NEC模型組及GLP-2干預(yù)組大鼠體重變化均為負(fù)值,提示體重呈負(fù)增長。NEC模型組、GLP-2干預(yù)組與正常對照組實(shí)驗(yàn)前后的體重變化比較,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),NEC模型組與GLP-2干預(yù)組實(shí)驗(yàn)前后的體重變化比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.腸組織大體形態(tài)正常對照組:腸管呈淡黃色,光澤度好,彈性好,無積氣;腸壁無充血或/和出血。NEC模型組:腸管呈黃紅色,光澤度差,彈性差,積氣明顯;腸壁充血、出血。GLP-2干預(yù)組:腸道顏色介于兩組之間,充血和積氣程度較模型組輕。4.腸組織病理評分結(jié)果正常對照組、NEC模型組、GLP-2干預(yù)組大鼠腸組織病理評分(單位:分)分別為0.25±0.80、2.87±0.92、1.57±0.53。正常對照組與GLP-2干預(yù)組相比,腸組織病理學(xué)評分的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㧐0.05),NEC模型組與正常對照組及NEC模型組與GLP-2干預(yù)組比較,腸組織病理學(xué)評分的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.NEC的發(fā)生率NEC的發(fā)生率依次為:NEC模型組(75.00%)㧐GLP-2干預(yù)組(37.5%)㧐正常對照組(0.00%)。6.Caspase-3蛋白的IOD值結(jié)果正常對照組、NEC模型組、GLP-2干預(yù)組大鼠的IOD值分別為21057.00±1417.64、83730.00±2330.22、42360.00±1835.15。NEC模型組與正常對照組、GLP-2干預(yù)組IOD值分別比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。GLP-2干預(yù)組與正常對照組IOD值比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.人工喂養(yǎng)+LPS灌胃可以成功建立新生SD大鼠NEC模型,方法簡單易行。2.細(xì)胞凋亡在NEC發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。3.GLP-2能夠減輕NEC新生大鼠的臨床表現(xiàn)和腸道病理損傷程度。4.通過減少Caspase-3蛋白的表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡可能是GLP-2對新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎保護(hù)機(jī)制之一。5.GLP-2可能在新生兒NEC防治中具有臨床應(yīng)用價值,尚需進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：胰高血糖素樣肽-2 新生大鼠 壞死性小腸結(jié)腸炎 Caspase-3 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R722.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 引言12-14
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法14-19
• 統(tǒng)計(jì)分析19
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-26
• 討論26-29
• 結(jié)論29-30
• 本研究的局限性及展望30-31
• 參考文獻(xiàn)31-36
• 附錄36-37
• 致謝37-38
• 綜述38-46
• 參考文獻(xiàn)43-46

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本文編號：878841