本文關(guān)鍵詞：普萘洛爾治療嬰兒血管瘤分子機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:血管瘤是嬰兒最常見(jiàn)的良性腫瘤。2008年發(fā)現(xiàn)普萘洛爾治療血管瘤以來(lái),已成為血管瘤的一線治療藥物,但其作用的機(jī)制仍然不清楚。本課題主要通過(guò)研究普萘洛爾對(duì)體外培養(yǎng)的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞(Hem EC)增殖及凋亡的影響;同時(shí)采用人表達(dá)譜芯片研究普萘洛爾干預(yù)前后血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)差異,尋找普萘洛爾的作用靶點(diǎn),從而探討普萘洛爾治療血管瘤的分子機(jī)制。方法:1、普萘洛爾的藥物作用效果實(shí)驗(yàn):體外培養(yǎng)嬰幼兒的Hem EC,同時(shí)培養(yǎng)臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)作為對(duì)照,以不同濃度的普萘洛爾處理兩種細(xì)胞(0 umol/L、25 umol/L、50umol/L、75umol/L、100umol/L、125umol/L),24、48、72h后以MTT細(xì)胞增殖試劑盒檢查兩種細(xì)胞的存活率。同時(shí)以同樣方法處理Hem EC后采用Annexin V法用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率;2、c DNA芯片實(shí)驗(yàn):提取普萘洛爾干預(yù)組及空白對(duì)照組Hem EC的總RNA,安捷倫c DNA微陣列掃描儀掃描芯片收集數(shù)據(jù),經(jīng)分析得出藥物作用后差異表達(dá)的基因。挑選部分差異顯著的基因,用Real-time PCR進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:1、普萘洛爾濃度為25umol/L,作用24h、48h,可引起Hem EC輕微增殖(p0.05);普萘洛爾濃度≥100umol/L,作用時(shí)間≥24h可引起Hem EC存活率下降,且在一定范圍內(nèi)藥效與藥物濃度、作用時(shí)間呈正相關(guān)(p0.05)。普萘洛爾濃度≥100umol/L,作用時(shí)間≥48h可引起HUVEC存活率下降,且在一定范圍內(nèi)藥效與藥物濃度、作用時(shí)間呈正相關(guān)(p0.05);普萘洛爾濃度≥100umol/L,Hem EC與HUVEC相比對(duì)藥物的抑制作用更加敏感,存活率更低(p0.05);2、普萘洛爾濃度≥100 umol/L,能引起Hem EC的凋亡,且隨著藥物濃度增高及干預(yù)時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞凋亡率越高(p0.05);3、c DNA芯片篩選普萘洛爾干預(yù)Hem EC前后基因表達(dá)差異倍數(shù)≥1.5倍的共有186個(gè),其中表達(dá)明顯上調(diào)的基因有128個(gè),表達(dá)明顯下調(diào)的基因58個(gè);其中PCSK9、FABP3基因表達(dá)顯著上調(diào),分別達(dá)到3.22倍與10.54倍;經(jīng)Real-time PCR驗(yàn)證,普萘洛爾干預(yù)后,Hem EC的PCSK9、FABP3m RNA表達(dá)顯著提高,分別達(dá)到干預(yù)前的9.88土2.19倍,21.9土8.18倍;結(jié)論:1、低濃度普萘洛爾對(duì)Hem EC的增殖有促進(jìn)作用;高濃度普萘洛對(duì)Hem EC及HUVEC的增殖有抑制作用,且呈一定的濃度與時(shí)間依賴性;Hem EC與HUVEC相比對(duì)普萘洛爾抑制作用更加敏感。2、普萘洛爾抑制血管瘤的增長(zhǎng)可能與抑制Hem EC增殖及促進(jìn)其凋亡有關(guān)。3、普萘洛爾干預(yù)Hem EC前后存在明顯的差異基因表達(dá),這些基因與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)調(diào)控、信號(hào)傳導(dǎo)、類固醇合成、脂類生物合成等有關(guān)。4、普萘洛爾引起Hem EC凋亡可能與上調(diào)PCSK9、FABP3m RNA的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：嬰兒血管瘤 普萘洛爾 基因芯片 PCSK9 FABP3
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R732.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮略詞表11-12
• 前言12-16
• 第一章 普萘洛爾對(duì)體外培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖和凋亡的影響16-42
• 1.1 實(shí)驗(yàn)一、體外血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定16-24
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器、材料16-17
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑17-18
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法18-21
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-24
• 1.2 實(shí)驗(yàn)二、普萘洛爾干預(yù)后血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的存活率24-31
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器24
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑24
• 1.2.3 實(shí)驗(yàn)方法24-25
• 1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析25
• 1.2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-31
• 1.3 實(shí)驗(yàn)三、普萘洛爾干預(yù)后血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡率31-37
• 1.3.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器31
• 1.3.2 實(shí)驗(yàn)試劑31
• 1.3.3 實(shí)驗(yàn)方法31-32
• 1.3.4 統(tǒng)計(jì)分析32
• 1.3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-37
• 1.4 討論37-40
• 1.4.1 血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)37-38
• 1.4.2 普萘洛爾抑制血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡38-40
• 1.5 結(jié)論40-42
• 第二章 采用基因芯片技術(shù)研究普萘洛爾治療血管瘤機(jī)制42-66
• 2.1 實(shí)驗(yàn)一、普萘洛爾干預(yù)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞后的cDNA芯片檢測(cè)42-54
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器42
• 2.1.2 主要試劑42-43
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法43-47
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-54
• 2.2 實(shí)驗(yàn)二普萘洛爾干預(yù)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞前后PCSK9、FABP3 mRNA的表達(dá)差異54-61
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器54
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法54-57
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-61
• 2.3 討論61-64
• 2.4 結(jié)論64-66
• 參考文獻(xiàn)66-72
• 綜述72-80
• 參考文獻(xiàn)77-80
• 攻讀碩士期間的主要研究成果80-82
• 致謝82

【相似文獻(xiàn)】

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