本文關(guān)鍵詞：兒童化膿性腦膜炎臨床分析及發(fā)病機(jī)制初步探討

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【摘要】：研究背景與目的 化膿性腦膜炎(purulent meningitis),簡稱化腦,是小兒時(shí)期較為常見的神經(jīng)系統(tǒng)感染,在抗生素應(yīng)用于臨床以前,本病大多為致死性的。隨著以抗生素為主的綜合治療措施的臨床應(yīng)用,化腦的預(yù)后已大為改觀,但仍有較高的死亡率,神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥也較為常見。早期診斷和適當(dāng)干預(yù),是降低本病死亡率和后遺癥發(fā)生率的關(guān)鍵。 腦膜炎癥的刺激和血管炎均可引起腦實(shí)質(zhì)的水腫、壞死,促使細(xì)胞因子釋放和毛細(xì)血管通透性增加,加上廣泛炎癥性病變使腦脊液循環(huán)發(fā)生障礙,這些因素均可引起腦水腫和顱壓增高,重者可發(fā)生腦疝。 國外有文獻(xiàn)提到,化膿性腦膜炎的實(shí)質(zhì)是強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng),在化膿性腦膜炎炎癥過程中,炎性細(xì)胞釋放出大量細(xì)胞因子,如腫瘤壞死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-a)等,其可以使炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加劇,由細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在腦脊液細(xì)菌已清除后仍可繼續(xù)存在,這可能是化腦發(fā)生慢性炎癥后遺癥的原因之一。那么TNF-a又是怎么參與化膿性腦膜炎的炎癥過程的呢? 血腦屏障是一層連續(xù)覆蓋99%腦毛細(xì)血管腔表面的內(nèi)皮細(xì)胞膜,對于維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要的意義。腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(BMECs)之間的緊密連接是血腦屏障的結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ),各種內(nèi)、外源的信號通路通過調(diào)節(jié)這些蛋白達(dá)到對血腦屏障通透性的調(diào)節(jié)。研究表明外傷、缺血缺氧、感染、免疫及理化因素等均可能引起緊密連接結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生改變,造成BBB損害,從而導(dǎo)致BBB通透性升高引起腦水腫。血腦屏障(Blood-brain barrier, BBB)通透性增加致血管源性腦水腫在其發(fā)病中起關(guān)鍵作用,有文獻(xiàn)報(bào)道,前炎性腫瘤壞死因子α (TNF-α)可以引起腸上皮細(xì)胞的通透性增高,那么,其是否也能引起腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加呢?本研究通過分析化膿性腦膜炎的臨床特征,及化膿性腦膜炎患兒腦脊液中TNF-α的變化,而后利用永生化小鼠Bend.3細(xì)胞建立腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障模型,用TNF-α處理后,觀察其對血腦屏障通透性的影響,初步探討了化膿性腦膜炎的發(fā)病機(jī)制。 研究方法 1對30例化膿性腦膜炎患兒及對照組進(jìn)行臨床資料及診治分析確立診斷標(biāo)準(zhǔn)(入組條件),并根據(jù)患兒臨床資料總結(jié)分析患兒臨床表現(xiàn)、體征及神經(jīng)系統(tǒng)受累征象、腦脊液改變、影像學(xué)資料、腦電、易感因素、對治療的反應(yīng)等臨床特征。 2對所有患兒及對照組腦脊液中的TNF-α進(jìn)行測定病例組30名患兒,對照組10名,年齡性別差無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,分別以雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)來測定實(shí)驗(yàn)對象腦脊液標(biāo)本中TNF-α含量,嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。記錄數(shù)值。 3Bend.3細(xì)胞培養(yǎng) 用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)Bend.3細(xì)胞,在5%C02,37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),約3d細(xì)胞基本融合。以1X10cells/L的密度將Bend.3細(xì)胞懸液0.3mL接種于細(xì)胞培養(yǎng)插入皿內(nèi)池,并于外池加入完全培養(yǎng)基1.2mL,保證內(nèi)外池兩側(cè)液面相等,倒置相差顯微鏡下每日觀察bEnd.3細(xì)胞形態(tài)變化。 4腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(BMECs)屏障模型的建立 Bend.3細(xì)胞的TEER隨培養(yǎng)時(shí)間的延長逐漸升高,在培養(yǎng)10d后,穩(wěn)定于一個(gè)較高的水平。細(xì)胞培養(yǎng)3d時(shí),鏡下見細(xì)胞基本匯合,TEER值為37.33±3.05,繼續(xù)培養(yǎng)到第10d,細(xì)胞TEER值增加至82.33±6.03Ω·cm2,培養(yǎng)10d后,細(xì)胞TEER維持在與10d相近的讀數(shù),提示(BMECs)屏障模型的建立。 5TNF-α處理后對Bend.3細(xì)胞的通透性影響用TNF-α處理分別3、6、12、24h,觀察各組Bend.3細(xì)胞(BMECs屏障)TEER值的改變。 研究結(jié)果 1所選取的30例患兒均符合化膿性腦膜炎診斷 所選取的30例患兒均符合細(xì)菌性腦膜炎診斷標(biāo)準(zhǔn),所有30例患兒病原學(xué)確診3例,占10.0%,臨床符合診斷23例,占76.6%,臨床可疑診斷4例,占13.3%,均符合化膿性腦膜炎診斷。 2化膿性腦膜炎患兒腦脊液TNF-α顯著升高,且與并發(fā)癥相關(guān)�；撔阅X膜炎患兒腦脊液中TNF-α較對照組病例顯著升高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。且化膿性腦膜炎病例組兩組患兒之間TNF-α水平比較,出現(xiàn)并發(fā)癥組較之未出現(xiàn)并發(fā)癥組也有明顯升高,兩者差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3TNF-α導(dǎo)致Bend.3細(xì)胞的TEER降低,且具有時(shí)間依賴性加入10μg/L TNF-a作用3h后,Bend.3細(xì)胞TEER值下降至(68士1.5Ω·cm2),與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),隨著TNF-a作用時(shí)間的延長,TEER值進(jìn)一步下降,6h為(501.3Ω·cm2),12h為(41士0.3Ω·cm2),24h達(dá)到最低(36士2.0Ω·cm2),與對照組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 研究結(jié)論 1.化膿性腦膜炎是重要的CNS感染性疾病,易導(dǎo)致并發(fā)癥。在抗生素為主的綜合臨床治療后,后遺癥的發(fā)生率仍高,本研究中并發(fā)癥率達(dá)30%。 2.TNF-a參與的炎癥瀑布性級聯(lián)反應(yīng),是化膿性腦膜炎患兒出現(xiàn)并發(fā)癥的主要原因之一。 3.TNF-a可以引起血腦屏障通透性增高,可能是化膿性腦膜炎的瀑布性炎癥反應(yīng)的啟動機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：化膿性腦膜炎 腫瘤壞死因子-α 血腦屏障 Bend.3細(xì)胞 BMECs 通透性
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R725.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• ~.略詞簡表13-14
• 第一部分 長沙地區(qū)30例兒童化膿性腦膜炎臨床分析14-23
• 第一章 前言14-16
• 第二章 研究對象及臨床資料及分析16-18
• 第三章 結(jié)果18-20
• 第四章 討論20-22
• 第五章 結(jié)論22-23
• 第二部分 兒童化膿性腦膜炎發(fā)病機(jī)制的初步探討23-36
• 第一章 前言23-25
• 第二章 材料與方法25-30
• 1 主要試劑25
• 2 主要儀器25-26
• 3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟26-30
• 第三章 結(jié)果30-32
• 1 化膿性腦膜炎患兒腦脊液中TNF-α顯著升高30
• 2 TNF-α能降低Bend.3細(xì)胞屏障的TEER30-32
• 第四章 討論32-35
• 第五章 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 綜述39-54
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 致謝54-55
• 攻讀學(xué)位期間已發(fā)表的論文55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 何芳;尹飛;彭鏡;李孔昭;吳麗文;鄧小鹿;;永生化小鼠Bend.3細(xì)胞株具有腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的屏障特性[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2010年06期

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本文編號：839356