本文關鍵詞：兒茶酚胺通過調控β2-AR-SIRT1-p53信號通路誘導宮頸癌細胞化療藥物抵抗

  更多相關文章： β2-AR SIRT1 P53 阿霉素 宮頸癌

【摘要】：背景:宮頸癌是最常見的女性惡性腫瘤之一，它的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中僅次于乳腺癌居于第二位。目前，我國每年新確診的宮頸癌病例及其死亡率呈逐年上升趨勢，而且發(fā)病年齡日趨年輕化，宮頸癌已成為危害我國女性健康的一種重要疾病。手術治療和化療仍是目前宮頸癌的重要治療手段。宮頸癌細胞對化療藥物的抵抗是阻礙化療藥物臨床治療有效性以及造成患者不良預后的重要原因，但是宮頸癌對化療藥物耐藥的機制尚完全不清楚。 包括阿霉素在內的部分臨床常用化療藥物可以通過誘導抑癌基因P53的表達以及活化，激活P53下游靶基因的表達，從而誘導抑制腫瘤細胞增殖或誘導腫瘤細胞凋亡。磷酸化、泛素化等多種翻譯后修飾對于p53發(fā)揮其生物學活性至關重要。乙�；揎椏稍鰪妏53的穩(wěn)定性并促進p53的轉錄活性。P53的乙�；揎検且环N可逆性反應。去乙酰化酶SIRT1可以使P53去乙�；�，抑制P53介導的轉錄活性，抑制下游靶基因的表達，從而促進腫瘤發(fā)生，發(fā)展。 腫瘤患者普遍存在不同程度的心理壓力，這會誘導機體產生慢性應激反應。大量事實表明，慢性應激反應可顯著影響腫瘤的進程及患者的預后。本實驗室在前期工作中發(fā)現(xiàn)應激反應相關激素-糖皮質激素可通過增強宮頸癌細胞中HPV（人乳頭瘤狀病毒）基因編碼的E6蛋白的表達，后者抑制p53以及miR145的表達，從而抑制化療藥物對宮頸癌細胞的殺傷。這一結果提示應激反應相關激素可能在慢性應激反應調控腫瘤惡性演進的過程中發(fā)揮重要作用。 兒茶酚胺（腎上腺素和去甲腎上腺素）是另一類重要的應激反應相關激素，機體在經歷慢性心理應激反應的過程中，體內兒茶酚胺的水平顯著升高。我們實驗室的前期工作已證明，兒茶酚胺在腫瘤細胞的生物學行為調控中具有重要作用。然而兒茶酚胺能否影響宮頸癌對化療藥物的敏感性以及相關的分子機制均不清楚。 目的:探索兒茶酚胺調控宮頸癌細胞對化療藥物的敏感性，，以及此過程的精確分子機制。 方法:（1）Western-Blot分析兒茶酚胺刺激宮頸癌細胞對SIRT1的表達影響；（2）實時定量RT-PCR檢測兒茶酚胺刺激宮頸癌細胞刺激后SIRT1轉錄水平的影響；（3）Western-Blot和免疫熒光法檢測兒茶酚對化療藥物誘導P53乙�；挠绊懀唬�4）雙熒光素酶法檢測兒茶酚胺對阿霉素誘導的P53轉錄活性增強的影響；（5）TUNEL染色和Annexin V-FITC染色測定兒茶酚胺是否影響阿霉素誘導的細胞凋亡；（6）通過細胞增殖實驗檢測兒茶酚胺能否誘導宮頸癌細胞的化療藥物抵抗（7）Western-Blot和雙熒光素酶實驗檢測SIRT1在兒茶酚胺抑制阿霉素誘導的P53乙酰化水平以及P53轉錄活性中的作用；（9）通過動物模型評價兒茶酚胺在體內能否拮抗化療藥物阿霉素的抑瘤效應（10）免疫組化檢測β2-AR在宮頸癌臨床組織標本中表達模式。 結果:（1）Western-Blot分析結果顯示兒茶酚胺刺激宮頸癌細胞可以上調SIRT1的表達，并具有時間和劑量依賴性。（2）兒茶酚胺刺激后可以在轉錄水平，顯著上調SIRT1的表達。（3）兒茶酚胺可抑制化療藥物誘導的P53乙酰化增強。（4）兒茶酚胺能夠顯著抑制阿霉素誘導的P53轉錄活性。（5）兒茶酚胺能夠抑制阿霉素誘導的細胞凋亡。（6）兒茶酚胺能夠明顯拮抗阿霉素對細胞的增殖抑制效應。（7）SIRT1在兒茶酚胺抑制阿霉素誘導的P53乙酰化水平以及P53轉錄活性中起到了關鍵作用。（8）兒茶酚胺能夠在移植瘤小鼠體內抑制化療藥物阿霉素的療效。（9）β2-AR在宮頸癌臨床組織中高表達。 結論:在本研究中，我們首次發(fā)現(xiàn)兒茶酚胺通過誘導β2-AR活化，激活SIRT1表達上調，抑制P53乙�；蚉53的轉錄活性，拮抗化療藥物阿霉素的抗癌效應。并首次報道，兒茶酚胺能夠在動物體內抑制化療藥物阿霉素對宮頸癌的治療效果。此外，本研究亦首次發(fā)現(xiàn)β2-AR在宮頸癌臨床組織中高表達。本研究的進一步深入可能為臨床提高化療藥物療效提供理論依據(jù)。
【關鍵詞】：β2-AR SIRT1 P53 阿霉素 宮頸癌
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 縮略詞表10-11
• 引言11-13
• 1 材料13-15
• 1.1 細胞系13
• 1.2 實驗動物13
• 1.3 實驗試劑13-14
• 1.4 實驗儀器14-15
• 2 方法15-23
• 2.1 蛋白免疫印跡分析15
• 2.2 細胞轉染15-16
• 2.3 免疫熒光16
• 2.4 P53 啟動子轉錄活性分析16-17
• 2.5 REAL-TIME RT-PCR17-19
• 2.6 流式細胞術19
• 2.7 細胞增殖檢測19
• 2.8 TUNEL 細胞凋亡19-20
• 2.9 動物模型建立20-21
• 2.10 免疫組化21-23
• 3 結果23-35
• 3.1 兒茶酚胺刺激宮頸癌細胞可以上調 SIRT1 的表達23-24
• 3.2 兒茶酚胺可以在轉錄水平上調 SIRT1 的表達24-25
• 3.3 兒茶酚胺主要通過誘導 2-AR 活化上調 SIRT1 表達25
• 3.4 兒茶酚胺通過增強 SIRT1 表達從而抑制阿霉素誘導的 P53 乙�；�25-27
• 3.5 兒茶酚胺能夠抑制阿霉素誘導的 P53 轉錄活性增強27-28
• 3.6 兒茶酚胺能夠明顯抑制阿霉素誘導的細胞凋亡28-29
• 3.7 兒茶酚胺能夠明顯誘導化療藥物的抵抗29-31
• 3.8 SIRT1 在兒茶酚胺抑制阿霉素誘導的 P53 乙�；约� P53 轉錄活性中，起到了關鍵作用31-32
• 3.9 兒茶酚胺能夠在體內拮抗化療藥物阿霉素的抑瘤效應32-33
• 3.10 2-AR 在宮頸癌組織中高表達33-35
• 4 結論35-37
• 參考文獻37-39
• 文獻綜述39-47
• 參考文獻44-47
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄47-49
• 致謝49-50

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姜潤亭;;NAD~+對X-射線照射后L02細胞的影響[J];遼東學院學報(自然科學版);2011年01期

2 秦燁;張偌瑜;繆朝玉;;煙酰胺磷酸核糖轉移酶抑制劑在腫瘤治療方面的研究進展[J];第二軍醫(yī)大學學報;2012年07期

3 譚宇靜;尤瑋;李民英;張俊德;張積仁;;氧化型輔酶NAD+對輻射損傷小鼠造血功能影響[J];廣東醫(yī)學;2010年08期

4 姚魁武;劉張靜;;SIRT1信號通路對缺血性心臟病的作用機制及中醫(yī)藥對其影響的研究進展[J];北京中醫(yī)藥;2013年09期

5 王夢婕;李新葉;藍丹;;煙酰胺磷酸核糖轉移酶與炎癥、腫瘤的關系[J];臨床兒科雜志;2013年10期

6 尤瑋;譚宇靜;孟輝;陳俊;李民英;張積仁;;初探NAD~+對X射線誘導正常肝細胞凋亡的影響及其機制[J];山東醫(yī)藥;2010年20期

7 王鑫鑫;吳夢;周思欣;盧燦榮;王華;王立生;陳凜;;SIRT1與代謝及腫瘤的關系[J];山東醫(yī)藥;2013年08期

8 李民英;陳龍華;雷風;尤瑋;白玉海;陸小軍;;氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸抗輻射損傷作用及其機制[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報;2010年04期

9 林萍萍;白雪佳;岳志霞;閆韶飛;李宗文;高超;梅妍妍;王凱玲;李偉京;丁衛(wèi);李志剛;;抑制NAMPT表達增強K562細胞對伊馬替尼的敏感性及相關機制研究[J];中國實驗血液學雜志;2012年02期

10 向儀;楊慧齡;;SIRT1的生理功能及其與腫瘤相關性的研究進展[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2011年05期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 龐婧;多聚ADP核糖聚合酶1在HepG2肝細胞內葡萄糖毒性中的作用及機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2010年

2 王鑫鑫;SIRT1對胃癌惡性生物學行為的影響及作用機制研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2013年

3 崔英華;心肌梗死患者SIRT1基因啟動子基因分析及功能測定[D];天津醫(yī)科大學;2013年

4 張群芳;賴氨酸乙酰化調節(jié)大腸桿菌NhoA蛋白活性的研究[D];華中農業(yè)大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王峰;老年小鼠腦和血清NAMPT變化及重組人的NAMPT的制備和鑒定[D];浙江大學;2011年

2 秦燁;以Visfatin/Nampt為靶標的活性化合物篩選[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

3 向儀;丹磺酰白藜蘆醇抑制乳腺癌MCF-7細胞增殖的初步研究[D];南華大學;2011年

4 張麗媛;Nampt抑制劑FK866抗星形細胞膠質瘤作用及機制研究[D];浙江大學;2010年

5 尤瑋;NAD對抗X射線誘導L02細胞損傷的初步研究[D];南方醫(yī)科大學;2010年

6 譚宇靜;氧化型輔酶NAD+對小鼠抗輻射損傷的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學;2010年

7 劉張靜;缺血性心肌細胞凋亡與血府逐瘀口服液干預SIRT1信號轉導機制調控研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2013年

8 馬明華;曼氏無針烏賊SCD基因克隆與生物信息學分析[D];浙江海洋學院;2013年

9 馮曉雯;白藜蘆醇在β-淀粉樣蛋白誘導PC12細胞損傷中的保護作用及其機制的實驗研究[D];山東大學;2013年

10 王夢婕;維生素B3促進大鼠中性粒細胞生成作用的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

本文編號：592930