本文關(guān)鍵詞：慢性肉芽腫病及慢性皮膚粘膜念珠菌病臨床與分子特征研究

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【摘要】：第一部分慢性肉芽腫病臨床與分子特征研究 目的： 1．分析本組CGD患兒的臨床及實驗室特征。 2.基因診斷X-CGD及AR-CGD患兒，指導(dǎo)臨床治療。 3.檢測CGD患兒中Th17、nTreg、iTreg細胞亞群變化規(guī)律。 方法： 1.分析10例CGD患兒臨床及實驗室檢查資料。 2.運用DHR123流式細胞術(shù)中性粒細胞呼吸爆發(fā)試驗，檢測10例CGD患兒（包括2例移植患兒移植前后）及家系成員中性粒細胞氧化功能。 3.用RT-PCR及DNA-PCR直接測序法分析10例CGD患兒（包括1例移植患兒移植前后）及家系成員CYBB、CYBA、NCF1、NCF2、NCF4基因。 4.運用流式細胞術(shù)檢測6例CGD患兒（包括2例移植患兒移植前后）外周血PBMC CD4+T細胞中Th17、nTreg、iTreg細胞數(shù)量。 結(jié)果： 1.臨床特征及實驗室檢查 10例CGD患兒均為男性，平均起病年齡4月，平均診斷年齡3歲�；純河蟹磸�(fù)發(fā)作的肺炎（100%），肺或淋巴結(jié)結(jié)核8例（80%），皮膚及肛周膿腫8例（80%），淋巴結(jié)及肝脾腫大8例（80%），敗血癥6例（60%），真菌感染6例（60%），反復(fù)腹瀉5例（50%），顱內(nèi)感染4例（40%），播散性BCG感染1例（10%），骨髓炎1例（10%），中耳炎1例（10%）。10例患兒均表現(xiàn)出營養(yǎng)不良及生長發(fā)育遲滯。2例有家族史，2例死亡。2例患兒行造血干細胞移植治療。 10例CGD患兒均有白細胞明顯增高，中性為主；IgG均增高，部分有IgE增高；淋巴細胞分類無明顯異常；NBT為0%，中性粒細胞呼吸爆發(fā)功能均異常低下。例2與例4造血干細胞移植成功后24天，檢測白細胞及IgG較移植前降低，NBT、中性粒細胞呼吸爆發(fā)功能轉(zhuǎn)為正常。病原學(xué)主要發(fā)現(xiàn)白色假絲酵母菌及金黃色葡萄球菌。胸部CT檢查8例有高密度結(jié)節(jié)及條絮影，1例出現(xiàn)支氣管擴張及肺纖維化。腹部超聲提示8例患兒有肝脾腫大。 2.基因分析 10例臨床診斷的CGD患兒中8例有CYBB基因突變，為X-CGD患兒；1例有CYBA基因突變，為AR-CGD；1例患兒經(jīng)分析已報道的CGD致病基因（包括CYBB、CYBA、NCF1、NCF2、NCF4基因）均未發(fā)現(xiàn)突變。明確的CYBB基因突變包括：缺失突變3例（2種）（c.1122delG，XK、CYBB、DYNLT3基因大片段缺失）；錯義突變1例（c.1082GT）；拼接錯誤4例（c.46-2AG，c.674+1delG，c.338_674del、c.484_674del， c.484_804del）。明確CYBA基因錯義突變1例（c.152TG）。所有突變中僅1種（c.1082GT）已報道，其余均為新型突變。 3. Th17、nTreg、iTreg分析 6例CGD患兒PBMC CD4+T細胞中Th17細胞比例（0.22±0.15%）較6名正常對照（1.02±0.20%）降低，P2、P4移植前與移植半年后無明顯變化。6例CGD患兒PBMC CD4+T細胞中nTreg、iTreg細胞比例（3.48±2.53%、7.46±6.02%）與6名正常對照（3.17±0.96%、8.96±3.19%）無明顯差異，P2、P4移植前（nTreg：6.83%、5.99%，iTreg：4.00%、4.38%）與移植半年后（nTreg：3.31%、4.94%，iTreg：9.29%、12.68%）比較，nTreg稍有下降，但iTreg明顯增高。 結(jié)論：CGD患兒起病早，病情重，表現(xiàn)為反復(fù)嚴重細菌及真菌感染，結(jié)核感染率高。外周血白細胞增高，以中性為主，均有高免疫球蛋白血癥。中性粒細胞呼吸爆發(fā)試驗可臨床診斷CGD患者，以便早期診斷、正確治療；基因分析可確診CGD患者，本組患者中發(fā)現(xiàn)7例（6種）CYBB基因、1例CYBA基因新型突變。CGD患者CD4+T細胞中Th17細胞比例較正常對照降低，nTreg、iTreg細胞比例與正常對照無明顯差異。 第二部分慢性肉芽腫病高危兒產(chǎn)前診斷 目的： 1．探討羊水脫落細胞基因分析在CGD高危兒產(chǎn)前診斷中的意義。 2.探討宮內(nèi)胎兒臍血中性粒細胞呼吸爆發(fā)試驗及基因分析在CGD高危兒產(chǎn)前診斷中的意義。 方法： 1.用RT-PCR及DNA-PCR直接測序法分析4例X-CGD家系、1例AR-CGD家系中6例CGD高危兒羊水脫落細胞CYBB或CYBA基因，及2例CGD高危兒宮內(nèi)臍血CYBB或CYBA基因。 2.運用DHR123流式細胞術(shù)中性粒細胞呼吸爆發(fā)試驗，檢測X-CGD家系和AR-CGD家系中各1例CGD高危兒中性粒細胞氧化功能。 結(jié)果： 1.羊水脫落細胞CYBB、CYBA基因分析顯示：在4例X-CGD患兒家系的5例高危兒中有1例正常女性胎兒，1例女性胎兒突變基因攜帶情況不明確，2例X-CGD男性胎兒，1例可疑X-CGD男性胎兒；1例AR-CGD患兒家系中的高危兒為可疑AR-CGD女性胎兒。 2.上述2例可疑CGD胎兒臍血中性粒細胞呼吸爆發(fā)功能均異常低下，臍血基因分析驗證1例為X-CGD男性胎兒，1例為AR-CGD女性胎兒。 結(jié)論：羊水脫落細胞基因分析與宮內(nèi)胎兒臍血中性粒細胞呼吸爆發(fā)試驗及基因分析相結(jié)合，可為CGD高危兒提供可靠的產(chǎn)前診斷。 第三部分慢性皮膚粘膜念珠菌病臨床與分子特征研究 目的： 探討1例CMC患兒的臨床特征、STAT1基因突變、及Th17細胞數(shù)量變化和TCRVβ基因重排多樣性，提高兒科臨床醫(yī)生對本病的認識。 方法： 1．分析1例CMC患兒的臨床及實驗室特征。 2.用RT-PCR及DNA-PCR直接測序法分析CMC患兒及家系成員STAT1基因。 3.運用流式細胞術(shù)檢測CMC患兒外周血PBMC CD4+T細胞中Th17細胞數(shù)量。 4.掃描譜型檢測CMC患兒TCRVβ基因重排多樣性。 結(jié)果： 1.臨床特征：患兒，男，6歲10月，反復(fù)發(fā)熱、咳嗽、咳痰6年。自幼出現(xiàn)反復(fù)頑固的口腔、指甲、外生殖器及皮膚真菌感染�；純荷聿陌�。口腔廣泛白膜，耳內(nèi)窺鏡見大量白色分泌物，口腔真菌鏡檢及耳拭子真菌鏡檢見菌絲。痰培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)金葡菌和鏈球菌。胸部X片及CT見雙肺內(nèi)多發(fā)大小不等結(jié)節(jié)狀、斑片狀密度增高影，，邊緣模糊。臨床疑診CMC。 2.基因分析發(fā)現(xiàn)STAT1第四外顯子雜合錯義突變g.5280AT，p.N89Y；為STAT1基因新型突變，其父母該基因正常。 3.患兒PBMC CD4+T細胞中Th17細胞比例（0.05%）較正常對照（0.87%）顯著降低。 4.患兒TCRVβ基因亞家族基因克隆譜型顯示部分受限。 結(jié)論：全身多部位慢性真菌感染是CMC的主要臨床表現(xiàn)；本例患兒為STAT1基因突變致AD-CMC，為一新型錯義突變；Th17細胞數(shù)量降低可能是CMC患兒真菌感染易感性增高的原因之一； TCRVβ亞家族多樣性部分受限提示T細胞發(fā)育存在異常。
【關(guān)鍵詞】：慢性肉芽腫病 呼吸爆發(fā)試驗 基因分析 Th17 nTreg iTreg 羊水脫落細胞 胎兒臍血 基因分析 呼吸爆發(fā)試驗 慢性肉芽腫病 慢性皮膚黏膜念珠菌病 STAT1基因 突變 Th17 TCRVβ
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R725.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-13
• ABSTRACT13-21
• 第一部分 慢性肉芽腫病臨床與分子特征研究21-43
• 前言21
• 1 材料和方法21-32
• 2 結(jié)果32-37
• 3 討論37-42
• 4 結(jié)論42-43
• 第二部分 慢性肉芽腫病高危兒產(chǎn)前診斷43-48
• 前言43
• 1 材料和方法43-45
• 2 結(jié)果45-46
• 3 討論46-47
• 4 結(jié)論47-48
• 第三部分 慢性皮膚粘膜念珠菌病臨床與分子特征研究48-57
• 前言48
• 1 材料和方法48-51
• 2 結(jié)果51-55
• 3 討論55-56
• 4 結(jié)論56-57
• 全文總結(jié)57-58
• 參考文獻58-63
• 文獻綜述63-70
• 參考文獻66-70
• 致謝70-71
• 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果及發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄71-72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 李淑娟;蔣利萍;劉瑋;趙耀;王墨;唐雪梅;朱朝敏;李欣;趙曉東;楊錫強;;X連鎖慢性肉芽腫病12例臨床分析[J];臨床兒科雜志;2011年01期

2 李淑娟;蔣利萍;劉瑋;趙耀;李欣;王墨;唐雪梅;朱朝敏;趙曉東;楊錫強;;12例X連鎖慢性肉芽腫病的基因診斷[J];免疫學(xué)雜志;2010年06期

3 蔣利萍;田雯;;慢性肉芽腫病研究進展[J];實用兒科臨床雜志;2012年21期

4 唐湘鳳;欒佐;吳南海;徐世俠;王凱;龔小軍;;非血緣臍帶造血干細胞移植治療慢性肉芽腫1例[J];實用兒科臨床雜志;2010年15期

本文編號：574614