本文關(guān)鍵詞：肺炎支原體耐藥機制和控制策略的探究

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【摘要】：背景與目的肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae,M.pneumoniae)是引起社區(qū)獲得性呼吸道感染的常見病原體之一,可導致支氣管炎和非典型肺炎,并可引起多種肺外并發(fā)癥。近年來,多個國家和地區(qū)報道肺炎支原體的感染率和耐藥率都有所升高,嚴重危害兒童和青少年的健康。以往研究顯示肺炎支原體對大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥嚴重,目前還未有報道對四環(huán)素類和喹諾酮類抗生素耐藥的臨床分離株,但隨著喹諾酮類及四環(huán)素類抗生素的應(yīng)用,肺炎支原體耐藥株可能也會出現(xiàn)。本研究1、擬通過檢測2014年1月至2014年12月間北京地區(qū)收集的兒童咽拭子標本,了解2014年度北京地區(qū)兒童肺炎支原體流行及耐藥情況及特點;2、擬通過實時定量PCR技術(shù)(SYBR Green染料法)建立一種快速、特異、敏感、經(jīng)濟、準確檢測肺炎支原體的方法,并評價其在臨床上的應(yīng)用價值。方法1、兒童肺炎支原體流行及耐藥監(jiān)測2014年1月至2014年12月間,從北京地區(qū)十一家醫(yī)院收集呼吸道感染患兒咽拭子標本,進行接種培養(yǎng)和測定最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC),并提取DNA,檢測耐藥相關(guān)基因,監(jiān)測M.pneumoniae感染及耐藥情況。2、實時定量PCR方法的建立及臨床應(yīng)用選擇肺炎支原體的23S rRNA耐藥相關(guān)基因作為擴增區(qū),設(shè)計特異性引物,然后提取相應(yīng)質(zhì)粒作為標準品,建立絕對定量的標準曲線。比較熒光定量PCR方法與傳統(tǒng)巢式PCR方法和市售試劑盒的特異性和靈敏度;分別利用上述三種方法和培養(yǎng)法檢測臨床咽拭子樣本,進行相關(guān)系數(shù)、符合率及kappa系數(shù)的分析。結(jié)果1、兒童肺炎支原體流行及耐藥監(jiān)測(1)2014年共收集北京地區(qū)呼吸道感染患兒咽拭子標本827份,有效標本822份。23srrnav區(qū)巢式pcr擴增陽性標本341例,陽性率為41.48%。其中,敏感株105株(30.79%),耐藥株236株(69.21%),包括a2063g位點突變199株(58.36%),a2064g位點突變25株(7.33%),同時發(fā)生a2063g、a2064g位點突變12株(3.52%)。分離培養(yǎng)陽性標本共99株,培養(yǎng)陽性率29.03%。(2)2014年肺炎支原體感染率呈下降趨勢,耐藥率仍以春冬季最高;感染率隨年齡增長呈上升趨勢,以學齡期最高;不同性別肺炎支原體陽性率及耐藥率均無統(tǒng)計學差異。(3)不同診斷中,肺炎患兒肺炎支原體檢出率和耐藥率均明顯高于上感、支氣管炎患兒;支氣管炎和肺炎患兒中肺炎支原體培養(yǎng)陽性率均明顯高于上感,但支氣管炎和肺炎患兒間未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學差異。(4)測定臨床分離株mic顯示,8株測序敏感株對大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類和喹諾酮類抗生素均敏感,57株測序耐藥株對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素敏感,對四環(huán)素類和喹諾酮類抗生素均敏感。2、實時定量pcr方法的建立及臨床應(yīng)用(1)構(gòu)建標準品得標準曲線,其線性方程表達式為:y=-3.5692x+40.786,r2=0.998。(2)在靈敏度檢驗中,實時定量pcr和巢式pcr均為10拷貝,市售試劑盒為100拷貝;在特異性檢驗中,m.pneumoniae檢測為陽性,人型支原體和其他4種細菌均檢測為陰性。(3)臨床樣本檢測中,經(jīng)統(tǒng)計學分析,實時定量pcr和巢式pcr、市售試劑盒、分離培養(yǎng)法的總符合率均80%,kappa系數(shù)均0.65;實時定量pcr方法與市售試劑盒檢測結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r=0.923,p0.001。結(jié)論1、兒童肺炎支原體流行及耐藥監(jiān)測(1)2014年北京地區(qū)兒童肺炎支原體感染率和23srrnav區(qū)突變率有所降低,感染率隨年齡增長呈上升趨勢,以學齡期最高,但無明顯性別差異,與國內(nèi)外報道相符。(2)肺炎支原體臨床分離株對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥嚴重,耐藥機制仍以23S rRNA V區(qū)位點突變?yōu)橹?包括A2063G、A2064G、兩個位點同時突變?nèi)N情況,而對四環(huán)素類、喹諾酮類抗生素敏感。2、實時定量PCR方法的建立及臨床應(yīng)用實時定量PCR方法檢測肺炎支原體,靈敏度高,特異性強,與巢式PCR、市售試劑盒、分離培養(yǎng)法比較,快速經(jīng)濟,污染少,不受患兒年齡、疾病病程和機體免疫功能等的限制,具有很大的科研和臨床實用價值。
【關(guān)鍵詞】：肺炎支原體 大環(huán)內(nèi)酯類 四環(huán)素類 喹諾酮類 實時定量PCR
【學位授予單位】：首都醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R725.6
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 第一部分 兒童肺炎支原體流行及耐藥監(jiān)測13-30
• 研究內(nèi)容13-18
• 研究結(jié)果18-27
• 討論27-29
• 結(jié)論29-30
• 第二部分 實時定量PCR方法的建立及臨床應(yīng)用30-41
• 研究內(nèi)容30-34
• 研究結(jié)果34-38
• 討論38-40
• 結(jié)論40-41
• 文獻綜述41-60
• 參考文獻60-72
• 附錄72-74
• 攻讀學位期間發(fā)表論文情況74-75
• 致謝75-76
• 個人簡歷76

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本文編號：560916