本文關鍵詞：P47phox介導氧暴露后單個核細胞內活性氧簇產生的機制

  更多相關文章： 早產兒 外周血單個核細胞 高氧暴露 p47phox 二苯基碘 夾竹桃麻素

【摘要】：目的:觀察32周以下早產兒不同濃度氧暴露后,外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)內p47phox與活性氧簇產生的變化;以及運用NADPH氧化酶抑制劑二苯基碘(DPI)和夾竹桃麻素(apocynin)聯合高濃度氧處理PBMCs后,p47phox與活性氧簇水平的改變,來探討NADPH氧化酶亞單位p47phox調節(jié)PBMCs內活性氧簇升高的機制,為臨床中減輕早產兒氧化應激損傷尋找新的靶點。方法:實驗分兩部分進行。第一,以臨床中32周以下早產兒為對象,將其中入院時診斷為新生兒呼吸窘迫綜合征(Neonatal respiratory distress syndrom,NRDS)且需要吸氧的患兒作為氧暴露組,根據吸氧濃度不同分為三組:FiO230%為低濃度吸氧組、FiO2在(30-40)%為中濃度吸氧組、FiO240%為高濃度吸氧組,每組患兒各10例,其中男18例,女12例。胎齡(28-32)周,體重(1350±138)g,組間患兒胎齡、出生體重無顯著性差異。同期選擇10例32周以下暫未吸氧的早產兒作為空氣組,其中男5例,女5例。胎齡(30-32)周,體重(1347±116)g。氧暴露組與空氣組間患兒胎齡、出生體重無顯著性差異,具有可比性。該實驗通過四川醫(yī)科大學附屬醫(yī)院倫理委員會的批準,所有患兒進行實驗前均征得家屬同意并簽署知情同意書�？諝饨M及氧暴露組患兒不同濃度氧療48小時后,均經橈動脈采血3ml。分離取得PBMCs及血清標本用于檢測。實驗第二部分,出生后即入我科的32周以下早產兒,尚未吸氧前,征得家屬同意并簽署知情同意書后經橈動脈采血2 ml,經Ficoll密度梯度離心法,分離純化PBMCs,以PBMCs為對象,將其分為以下四組:常規(guī)培養(yǎng)組,置于37℃、50ml/l的co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h;高氧處理組,按3l/min通入950ml/l的o2與50ml/l的co2混合氣體,10min后,立即用封口膠密封培養(yǎng)瓶,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h;高氧聯合dpi處理組與高氧聯合夾竹桃麻素(apocynin)處理組根據文獻報道和預實驗結果,分別選擇5μmol/l、100μmol/l處理細胞后再按上述方法建立高氧損傷模型并培養(yǎng)48h;高氧及相應處理組培養(yǎng)48h后,均用cys-1數字式測氧儀檢測培養(yǎng)瓶中o2的濃度,將低于900ml/lo2的標本棄去。離心采集pbmcs和培養(yǎng)液作為標本。將兩部分實驗中所獲得的標本,均采用mitosoxred標記結合激光共聚焦顯微鏡檢測pbmcs內ros的生成量、硫代巴比妥酸比色法檢測血清/培養(yǎng)液中丙二醛含量、免疫熒光檢測p47phox在細胞內的定位及移位率、westernblot檢測p47phox的蛋白表達量。結果:第一,臨床樣本中,隨著早產兒吸氧濃度的升高,pbmcs內活性氧與血清丙二醛明顯升高,p47phox由包質向包膜移位的細胞數增多,p47phox的移位率明顯增加,p47phox的蛋白表達量也隨之增加(p均0.05);第二,培養(yǎng)pbmcs各組中,pbmcs經高氧及相應藥物處理48h后,與高氧處理組相比,其余三組活性氧和丙二醛明顯減少,p47phox移位率與表達量也顯著降低(p均0.05);與常規(guī)培養(yǎng)組相比,高氧聯合dpi處理組及高氧聯合apocynin處理組中ros、丙二醛、p47phox移位率與表達量并無顯著差異(p均0.05)。結論:早產兒和pbmcs經氧暴露后,p47phox可增加向胞膜移位,上調其表達量,這與ros和丙二醛增加是一致的。而對pbmcs運用nadph氧化酶抑制劑dpi和apocynin處理后,p47phox移位率、表達量出現減少,此時,ros和丙二醛也相應減少。這提示p47phox可增加向胞膜移位,上調其表達量來調節(jié)PBMCs內活性氧簇的升高,而DPI和apocynin能通過降低p47phox移位與表達來減少高氧誘導的PBMCs內活性氧簇的產生。
【關鍵詞】：早產兒 外周血單個核細胞 高氧暴露 p47phox 二苯基碘 夾竹桃麻素
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R722.6
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-27
• 結果27-31
• 附圖31-35
• 討論35-42
• 結論42-43
• 參考文獻43-50
• 英文縮寫及中英文對照50-51
• 致謝51-52
• P47phox 介導活性氧產生與疾病的關系 綜述52-64
• 參考文獻60-64
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表和撰寫的論文64-65

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 金鷹,唐玫,李國明;實用淋巴細胞培養(yǎng)技術[J];激光生物學報;2000年01期

2 盧美燕;董文斌;;氧化應激在高體積分數氧肺損傷中的作用[J];實用兒科臨床雜志;2012年22期

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本文編號：539479