發(fā)布時間：2017-06-23 23:05

  本文關(guān)鍵詞：新生期小鼠胰島細胞變化及其增殖機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1、建立新生期小鼠胰島分離純化方法。2、研究新生期小鼠胰島細胞的動態(tài)變化。3、觀察新生期小鼠胰島細胞周期相關(guān)基因的表達變化,探討其與胰島細胞增殖的關(guān)系。方法:1、胰腺局部充盈、膠原酶Ⅴ消化,單純顯微鏡下手挑胰島,獲得出生后1周、3周和8周C57BL/6小鼠的胰島。2、以胰島素和胰高血糖素雙染胰島細胞,流式細胞術(shù)及免疫熒光法檢測不同階段小鼠胰島β和α細胞構(gòu)成比例的變化。3、采用免疫組化染色法檢測不同階段小鼠胰島β/α細胞量、單個細胞面積、細胞數(shù)量、細胞構(gòu)成比例的變化以及Rb、p107、p130、E2F1、cdk1和cyclinB1的表達變化。4、通過PI染色流式細胞術(shù)檢測不同階段小鼠胰島細胞周期的變化。通過Ki67和胰島素雙染免疫熒光法觀察不同階段小鼠胰島β細胞增殖的變化。5、運用實時定量PCR檢測不同階段小鼠胰島細胞周期相關(guān)基因mRNA的表達變化。6、利用Westernblot技術(shù)分析不同階段小鼠胰島細胞周期相關(guān)基因蛋白的表達變化。結(jié)果:1、在1mg/mL酶濃度下,1周和3周小鼠胰島的最適消化時間分別為23min(38.11±2.78胰島/胰腺)和25min(66.06±2.61胰島/胰腺)。1周以直徑50μm胰島居多(P0.01),而3周以50~99μm者居多(P0.01)。單純手挑組胰島得量顯著高于Histopaque-1077純化組(P0.05)。所得胰島存活率和純度均90%,且存在β和α細胞構(gòu)成比例的變化(P0.05)。2、與1周相比,3周和8周胰島β/α細胞量顯著增加(均P0.05);單個β/α細胞面積在3周時無明顯差異,8周時均擴大1.7倍(均P0.01);而β/α細胞數(shù)量在3周增加約3.5/3.7倍(均P0.01),8周與3周無明顯差異;α細胞比例在3周和8周時明顯下降,而β細胞比例明顯增加(均P0.01)。新生期小鼠胰島細胞增殖顯著,與8周相比,1周和3周時G0/G1期細胞明顯減少(均P0.05),而G2/M期顯著增多(均P0.05),細胞增殖指數(shù)明顯增加(均P0.01)。1周時Ki67、胰島素雙陽性細胞占胰島素陽性細胞比例明顯高于3周和8周(P0.01)。3、與1周相比,8周時Rb、p107、E2F1/2/3、cyclinD1/E1/A1/A2/B1/B2、cdk6/2/1、cdc25b/c、Wee1mRNA表達明顯降低(均P0.05),而p130、E2F4/5、cdc25amRNA表達增高。cdk4在3周時表達顯著高于1周和8周(P0.05)。從出生后1周、3周至8周,p16和p27mRNA表達均逐漸降低,而p21在3周時較高。免疫組化顯示:Rb、p107、p130、E2F1均在不同階段胰島細胞胞漿中差異表達;cdk1和cyclinB1在胞漿和胞核中均有表達,且不同階段胰島存在差異。Westernblot結(jié)果顯示:與1周相比,8w時Rb、p107、E2F1、cdk1和cyclinB1表達均明顯降低,p130表達顯著增高(均P0.05)。結(jié)論:1、胰腺局部充盈、膠原酶Ⅴ消化后鏡下手挑胰島是一種較好的新生期小鼠胰島分離純化方法,消化時間和純化方法是其重要影響因素。2、新生期小鼠胰島細胞量擴增明顯,以細胞數(shù)量增加為主;細胞構(gòu)成比例變化顯著;細胞增殖顯著,其中β細胞增殖明顯。3、新生期小鼠胰島細胞中細胞周期相關(guān)基因在mRNA水平和蛋白水平均存在顯著表達變化,提示其可能參與新生期胰島細胞增殖的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：新生期 胰島細胞 增殖 細胞周期相關(guān)基因
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 研究背景12-14
• 參考文獻13-14
• 第一部分 新生期小鼠胰島分離純化方法的研究14-27
• 摘要14-15
• Abstract15-16
• 引言16
• 1、實驗材料16-19
• 2、實驗方法19-20
• 3、實驗結(jié)果20-23
• 討論23-25
• 參考文獻25-27
• 第二部分 新生期小鼠胰島細胞變化的研究27-41
• 摘要27-28
• Abstract28-29
• 引言29
• 1、實驗材料29-32
• 2、實驗方法32-34
• 3、實驗結(jié)果34-38
• 討論38-40
• 參考文獻40-41
• 第三部分 新生期小鼠胰島細胞周期相關(guān)基因的表達變化41-65
• 摘要41-42
• Abstract42-43
• 引言43
• 1、實驗材料43-49
• 2、實驗方法49-53
• 3、實驗結(jié)果53-58
• 討論58-62
• 參考文獻62-65
• 結(jié)論與展望65-66
• 文獻綜述66-75
• 參考文獻72-75
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況75-76
• 致謝76

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7 祝方;鄭晟e，

本文編號：476503