牛乳蛋白過(guò)敏（cow milk protein allergy,CMPA）是嬰兒及兒童中常見的食物過(guò)敏之一,一般情況下兒童的過(guò)敏癥狀會(huì)在5歲左右逐漸減輕,直至消失,但仍有10%左右的過(guò)敏兒童不能自動(dòng)康復(fù),會(huì)持續(xù)過(guò)敏癥狀且日益嚴(yán)重。腸道菌群作為人體最大的“微生物器官”與健康息息相關(guān),正常情況下腸道菌群處于動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)。當(dāng)這種平衡被破壞,可能引起過(guò)敏疾病等疾病的發(fā)生。短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids,SCFA）作為腸道中微生物代謝的最終產(chǎn)物,參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)和發(fā)育。目前研究多集中于發(fā)生牛乳蛋白過(guò)敏的嬰兒的腸道菌群結(jié)構(gòu)及糞便中SCFAs的變化,針對(duì)5-10歲的CMPA兒童腸道菌群及SCFAs的研究還很少,因此,本研究選擇5-8歲CMPA兒童的腸道菌群和糞便中SCFAs及乳酸的變化進(jìn)行探究。本研究選取了2016年6月至2016年12月經(jīng)哈爾濱兒童醫(yī)院確診為牛乳蛋白過(guò)敏的5-8歲兒童共6例,并在同一時(shí)間段選取了8例哈爾濱地區(qū)相同年齡段的健康兒童作為對(duì)照。采集所有兒童的糞便樣品用于試驗(yàn)。試驗(yàn)主要分為兩部分,第一部分為通過(guò)16S rDNA擴(kuò)增子測(cè)序?qū)λ械募S便樣品進(jìn)行分析... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

兒童糞便中細(xì)菌DNA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物質(zhì)量分析

圖 3-2 OTU 獲得情況分析Figure 3-2 Analysis of OTU accepted3.3 樣品復(fù)雜度分析3.3.1 Alpha 多樣性指數(shù)分析通常情況下，同一個(gè)種的序列指的是在 97%以上的序列都一致的條件下，可聚類成一個(gè)OTU 的序列[90]。通過(guò)使用 Qiime 軟件（Version 1.7.0）對(duì)不同樣品在 97%一致性閾值下的 alpha多樣性分析指數(shù)（Chao 1 指數(shù)、Shannon 指數(shù)、Simpson 指數(shù)和 ACE 指數(shù)）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)[91]，進(jìn)而可以分析兩組兒童的腸道菌群的豐度及多樣性的差異。表 3-1 為兩組樣品的 alpha 多樣性分析指數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，兩組樣品的 4 個(gè)指數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上都沒有顯著的的差異（P ＞ 0.05），這表明兩組兒童的腸道菌群在豐度和多樣性上都沒有明顯的差異。一般在嬰幼兒時(shí)期，不同個(gè)體的腸道菌群會(huì)有顯著性的差異[92]。當(dāng)兒童年齡達(dá)到 3 歲左右，其腸道菌群基本達(dá)到了一個(gè)動(dòng)態(tài)的平衡，結(jié)構(gòu)類似于成人的腸道菌群結(jié)構(gòu)[93]。由于本研究中的兒童年齡在 5-8 歲，且都生活在一個(gè)環(huán)境中，所以不同個(gè)體的腸道菌群的結(jié)構(gòu)沒有顯著性的差異也是合理的。表 3-1 Alpha 多樣性指數(shù)分析

3.2 物種多樣性曲線分析3.2.1 稀釋曲線分析稀釋曲線是指在所有的樣品中通過(guò)隨機(jī)抽取獲得部分?jǐn)?shù)據(jù)，進(jìn)而分析它們所代表的Us 數(shù)目[94]。由稀釋曲線可看出數(shù)據(jù)是否安排合理且能間接地看出樣品中物種的豐度情 3-3 為 14 個(gè)兒童樣品的稀釋曲線圖，health 1-health 8 表示健康組的 8 個(gè)樣品，cmpa 1- c示過(guò)敏組中的 6 個(gè)樣品。由圖可看出，cmpa 6、health 4、health 5、health 6、health 7alth 8 這六個(gè)樣本隨著測(cè)序條數(shù)的增多，曲線基本平行，這表明所用的數(shù)據(jù)已經(jīng)足夠，表驗(yàn)取樣合理。而其他的八個(gè)樣本隨著測(cè)序條數(shù)的增多還沒有進(jìn)入平臺(tái)期，這也意味著當(dāng)數(shù)量逐漸變大時(shí)，新的物種也會(huì)逐漸增多。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3429242