背景:先天性膈疝（congenital diaphragmatic hernia,CDH）是由于胚胎發(fā)育異常導(dǎo)致的先天性畸形疾病,是新生兒急危重癥之一。探索CDH的發(fā)病機(jī)制,尋找有效的治療方法,是臨床和科研工作者的重要任務(wù)。Hippo信號通路是一條高度保守的抑制性通路,近年來研究發(fā)現(xiàn)該通路在肺發(fā)育中起著重要作用。目的:本實驗通過研究Hippo信號通路的關(guān)鍵效應(yīng)復(fù)合物YAP-TEAD及靶因子CTGF在先天性膈疝胎鼠模型不同胎齡中的情況,分析和探討膈疝肺發(fā)育不良的可能發(fā)病機(jī)制,對未來闡釋致病機(jī)理、找到精準(zhǔn)治療方法可能會有一定幫助。方法:15只正常SPF級SD孕大鼠,在胚胎第9.5天（E9.5d）時給予Nitrofen和橄欖油處理,分為CDH組和Control組。分別于E17.5d、E19.5d和E21.5d在麻醉下行剖宮產(chǎn)取出胎鼠,獲得胎肺組織,記錄胎鼠體重、肺重和致畸情況。HE染色用于觀察不同胎齡及不同組別之間肺發(fā)育的差異;實時熒光定量PCR用于檢測YAP,TEAD（1⁴）和CTGF mRNA表達(dá)情況,并分析各指標(biāo)的相關(guān)性;免疫組化染色對YAP、pYAP、TEAD4... 

【文章來源】：電子科技大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Hippo信號通路的簡要示意圖

電子科技大學(xué)碩士學(xué)位論文14圖2-2陰栓法觀察托盤內(nèi)陰栓，紅色箭頭所指為乳白色膠狀陰栓2.2.1.2分組將15只孕鼠在E9.5d時將孕鼠隨機(jī)分為對照組（Control組）6只和先天性膈疝組（CDH組）9只，分別予以不同處理。Control組：E9.5d時予以橄欖油2ml灌胃。將6只隨機(jī)平均分為三組（E17.5d、E19.5d、E21.5d），每組2只。CDH組：E9.5d時予以Nitrofen（465mg/kgNitrofen+2ml橄欖油，用水浴鍋加熱使Nitrofen完全溶解于橄欖油中）灌胃。將9只隨機(jī)平均分為三組（E17.5d、E19.5d、E21.5d），每組3只。2.2.1.3取肺組織標(biāo)本孕鼠麻醉及剖腹處理：將CDH組和Control組的孕鼠分別于E17.5d、E19.5d、E21.5d時在戊巴比妥鈉（0.05mg/g）麻醉下剖腹取出胎鼠，然后稱重，另觀察和記錄死胎及吸收胎情況。圖2-3為孕鼠剖宮產(chǎn)術(shù)。胎鼠的解剖及標(biāo)本采集：在解剖顯微鏡下，首先固定胎鼠四肢，沿胎鼠胸部正中剖開胸腔，剪開膈肌上方雙側(cè)的肋骨，展開雙側(cè)胸腔壁可充分暴露雙側(cè)胸腔，然后用眼科無齒鑷沿氣管向下完整取出全部肺組織，立即稱重并觀察每只胎鼠膈肌缺損位置、大小，嵌入胸腔器官的情況。肺組織標(biāo)本取出后，一半標(biāo)本置于4%多聚甲醛溶液中，并于24小時后進(jìn)行常規(guī)蠟塊包埋，另一半快速存于液氮罐中然后再轉(zhuǎn)至-80℃冰箱保存。胎鼠肺重統(tǒng)計：計算各組胎鼠的肺指數(shù)，即肺重與體重之比（LW/BW×100%），該比值是去除體重不均衡因素后反映肺組織相對發(fā)育水平的客觀指標(biāo)。

第二章材料與方法15造模成功標(biāo)準(zhǔn)：CDH組中以觀察發(fā)現(xiàn)有膈肌缺損的胎鼠視為先天性膈疝胎鼠模型造模成功（無膈肌缺損胎鼠則不計為本次實驗標(biāo)本）。圖2-4為膈疝胎鼠示意圖。圖2-3實施麻醉下無菌剖宮手術(shù)圖2-4為E19.5d左側(cè)膈疝胎鼠，紅色箭頭所指為疝入胸腔的肝組織2.2.2肺組織HE染色及形態(tài)學(xué)觀察從Control組和CDH組的三個時期中分別各隨機(jī)選6個肺組織蠟塊，各切一張，共36張切片，厚度約4μm，然后放入自動染色機(jī)中，進(jìn)行常規(guī)HE染色。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]染色體病的分子診斷[J]. 程偉.  檢驗醫(yī)學(xué)與臨床. 2020(03)
[2]基因編輯動物模型在人類疾病研究中的應(yīng)用[J]. 馬寶霞,沈文璐,王旭,李澤,徐坤.  生物工程學(xué)報. 2020(05)
[3]Shh信號通路對小鼠胚胎肺發(fā)育的調(diào)控作用[J]. 包和婧,馬樹東.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2018(03)
[4]Hippo信號通路在肺發(fā)育、再生和疾病中的功能[J]. 付思玲,趙婉瀅,張雯婧,宋海,季紅斌,湯楠.  遺傳. 2017(07)
[5]產(chǎn)前漢防己甲素干預(yù)對膈疝肺血管和結(jié)締組織生長因子的作用[J]. 陳后平,劉文英,唐耘熳,王學(xué)軍,吉毅,楊綱,徐冰,徐暢,曹李明.  中華小兒外科雜志. 2013 (03)

博士論文
[1]miR-455-5p調(diào)控STRA6在Nitrofen誘導(dǎo)的先天性膈疝肺發(fā)育不良的機(jī)制研究[D]. 鄭錦濤.南方醫(yī)科大學(xué) 2017



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