肺炎鏈球菌氨肽酶N對(duì)過敏性哮喘的作用及機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間:2021-07-20 13:08
目的:流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)研究表明,嬰幼兒期接觸微生物可降低患過敏性哮喘的風(fēng)險(xiǎn)。因而使用具有免疫調(diào)節(jié)作用的微生物或微生物成分可能成為預(yù)防過敏性哮喘的一種新型策略。最近的研究表明肺炎鏈球菌氨肽酶N(PepN)可以抑制T細(xì)胞效應(yīng)功能。因此,本實(shí)驗(yàn)的目的是研究PepN對(duì)小鼠過敏性哮喘的作用并初步闡明其作用機(jī)制。方法:利用大腸桿菌原核表達(dá)技術(shù)制備重組蛋白PepN,通過鎳柱純化后進(jìn)一步去除內(nèi)毒素。在雞卵清蛋白(OVA)致敏期間通過滴鼻處理小鼠PepN以研究PepN對(duì)過敏性哮喘的影響。通過流式細(xì)胞術(shù)、趨化因子檢測(cè)和過繼轉(zhuǎn)移評(píng)估CD11b+樹突狀細(xì)胞(CD11b+DCs)在PepN處理的過敏性哮喘小鼠中的作用。此外,使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠肺組織2型固有淋巴細(xì)胞(ILC2s)的數(shù)量。最后,在OVA致敏前處理PepN以進(jìn)一步確定PepN對(duì)小鼠過敏性哮喘的影響。結(jié)果:成功制備重組蛋白PepN,經(jīng)純化后其純度高于90%,且其內(nèi)毒素含量低于0.1EU/μg。在OVA致敏期間處理PepN可以減輕過敏性哮喘小鼠的2型氣道炎癥(嗜酸性粒細(xì)胞增多癥、粘液高分泌、Th2細(xì)胞因子增加...
【文章來(lái)源】:重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁(yè)數(shù)】:46 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
重組蛋白PepN的制備Figure1PreparationofrecombinantproteinPepN
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文18圖2致敏期間PepN處理對(duì)OVA誘導(dǎo)的過敏性哮喘2型氣道炎癥的影響Figure2EffcetofadministrationofPepNduringsensitizationontype2airwayinflammationofOVA-inducedallergicasthmaA,Experimentalprotocol.B,TotalinflammatorycellsandeosinophilsinBALF.C,Th2cytokine(IL-5,andIL-13)levelsinBALF.D,PhotomicrographsofH&E-andPAS-stainedlungtissuesectionsofmice(400Xmagnification)andsemi-quantifiedPASscore.E,Muc5acmRNAexpressionlevelinlungtissues.F,IgElevelsinBALFandserum.G,IFN-γandIL-17AlevelsinBALF.H,Th2cytokines(IL-4,IL-5,andIL-13)levelsinspleencellsrestimulatedwith200μg/mlOVAfor72h.
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文20圖3致敏期間PepN處理減少了過敏性哮喘小鼠肺部CD11b+DCs數(shù)量Figure3AdministrationofPepNduringsensitizationreducednumberofCD11b+DCsinlungsofallergicasthmamiceA,RepresentativeflowdiagramshowingthelungcDCs(CD11c+MHCII+)andcDCssubsetspopulation.B,TotalnumbersoflungcDCsandcDCssubsets.C,Themeanfluorescenceintensity(MFI)ofCD40andCD86expressiononcDCs.D,ThepercentagesofCD40andCD86onCD11b+DCs.3.4在致敏期間處理PepN減少了過敏性哮喘小鼠肺CD11b+DCs相關(guān)趨化因子的水平為了進(jìn)一步探究PepN對(duì)肺CD11b+DCs的影響,我們首先測(cè)量了過敏原暴露后負(fù)責(zé)募集DCs至肺的趨化因子的表達(dá)。CCL2和CCL8是CCR2的配體,CCR2是在炎癥性DCs上表達(dá)的趨化因子受體,因而CCL2和CCL8主要募集炎癥性DCs至肺部[18,30]。OVA致敏和激發(fā)誘導(dǎo)了肺CCL2和CCL8的mRNA表達(dá)水平增加,但PepN處理后兩者表達(dá)水平均保持不變(圖4A)。值得注意的是另一種趨化因子CCL20,負(fù)責(zé)募集未成熟DCs至肺部[17],其mRNA表達(dá)水平在經(jīng)PepN處理后顯著降低(圖4A)。與mRNA表達(dá)水平的變化保持一致,PepN也降低了過敏性哮喘小鼠BALF和肺勻漿中CCL20的蛋白水平(圖4B)。此外,在過敏性哮喘中,負(fù)責(zé)將效應(yīng)Th2細(xì)胞募集至肺的趨化因子包括CCL17和CCL22,其來(lái)源主要為CD11b+DCs[17,20]。因此,我們檢測(cè)了小鼠肺組織中CCL17和CCL22的mRNA表達(dá),結(jié)果顯示PepN處理后過敏性哮喘小鼠肺組織中CCL17和CCL22的mRNA
本文編號(hào):3292881
【文章來(lái)源】:重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁(yè)數(shù)】:46 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
重組蛋白PepN的制備Figure1PreparationofrecombinantproteinPepN
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文18圖2致敏期間PepN處理對(duì)OVA誘導(dǎo)的過敏性哮喘2型氣道炎癥的影響Figure2EffcetofadministrationofPepNduringsensitizationontype2airwayinflammationofOVA-inducedallergicasthmaA,Experimentalprotocol.B,TotalinflammatorycellsandeosinophilsinBALF.C,Th2cytokine(IL-5,andIL-13)levelsinBALF.D,PhotomicrographsofH&E-andPAS-stainedlungtissuesectionsofmice(400Xmagnification)andsemi-quantifiedPASscore.E,Muc5acmRNAexpressionlevelinlungtissues.F,IgElevelsinBALFandserum.G,IFN-γandIL-17AlevelsinBALF.H,Th2cytokines(IL-4,IL-5,andIL-13)levelsinspleencellsrestimulatedwith200μg/mlOVAfor72h.
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文20圖3致敏期間PepN處理減少了過敏性哮喘小鼠肺部CD11b+DCs數(shù)量Figure3AdministrationofPepNduringsensitizationreducednumberofCD11b+DCsinlungsofallergicasthmamiceA,RepresentativeflowdiagramshowingthelungcDCs(CD11c+MHCII+)andcDCssubsetspopulation.B,TotalnumbersoflungcDCsandcDCssubsets.C,Themeanfluorescenceintensity(MFI)ofCD40andCD86expressiononcDCs.D,ThepercentagesofCD40andCD86onCD11b+DCs.3.4在致敏期間處理PepN減少了過敏性哮喘小鼠肺CD11b+DCs相關(guān)趨化因子的水平為了進(jìn)一步探究PepN對(duì)肺CD11b+DCs的影響,我們首先測(cè)量了過敏原暴露后負(fù)責(zé)募集DCs至肺的趨化因子的表達(dá)。CCL2和CCL8是CCR2的配體,CCR2是在炎癥性DCs上表達(dá)的趨化因子受體,因而CCL2和CCL8主要募集炎癥性DCs至肺部[18,30]。OVA致敏和激發(fā)誘導(dǎo)了肺CCL2和CCL8的mRNA表達(dá)水平增加,但PepN處理后兩者表達(dá)水平均保持不變(圖4A)。值得注意的是另一種趨化因子CCL20,負(fù)責(zé)募集未成熟DCs至肺部[17],其mRNA表達(dá)水平在經(jīng)PepN處理后顯著降低(圖4A)。與mRNA表達(dá)水平的變化保持一致,PepN也降低了過敏性哮喘小鼠BALF和肺勻漿中CCL20的蛋白水平(圖4B)。此外,在過敏性哮喘中,負(fù)責(zé)將效應(yīng)Th2細(xì)胞募集至肺的趨化因子包括CCL17和CCL22,其來(lái)源主要為CD11b+DCs[17,20]。因此,我們檢測(cè)了小鼠肺組織中CCL17和CCL22的mRNA表達(dá),結(jié)果顯示PepN處理后過敏性哮喘小鼠肺組織中CCL17和CCL22的mRNA
本文編號(hào):3292881
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