目的支氣管哮喘(哮喘)是一種發(fā)病機(jī)制復(fù)雜的常見慢性呼吸道疾病,其發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì),但其確切機(jī)制至今尚未完全清楚。微小RNA(microRNA,簡稱miRNA或miR)是一類長度約為22nt(核苷酸)的內(nèi)源性非編碼單鏈小RNA。研究發(fā)現(xiàn),miRNA可以控制人類基因組中所有基因中的30%,并在各種生物過程中具有重要功能,包括細(xì)胞增殖分化及凋亡,機(jī)體代謝,組織損傷修復(fù),生物發(fā)育等,從而參與哮喘等疾病的發(fā)生與發(fā)展,但miRNA中參與哮喘的具體種類及具體的信號(hào)機(jī)制尚不清楚。因此本實(shí)驗(yàn)主要研究哮喘兒童支氣管肺泡灌洗液(BALF)中miRNA的表達(dá)水平并探討可能的作用機(jī)制。方法2016年01月至2017年02月期間,收集確診為哮喘患兒15例做為實(shí)驗(yàn)組,同時(shí)收集12例異物患兒(異物在24小時(shí)內(nèi)移除)作為對(duì)照組。應(yīng)用miRNA芯片檢測(cè)miRNA的表達(dá)水平,并通過qRT-PCR驗(yàn)證其表達(dá)水平。并分別采用qPCR和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)方法,對(duì)于兩組間表達(dá)差異較顯著的miRNA家族(miR-34家族和miR-200家族)的預(yù)測(cè)靶基因E-鈣粘蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白質(zhì)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果1.在正常對(duì)照組患兒的支氣管肺泡灌洗液中,發(fā)現(xiàn)存在超過800種miRNAs的表達(dá),其中最豐富的 10 種 miRNAs 是 let-7b-5p、miR-191-5p、miR-23a-3p、miR-4454、miR-24-3p、miR-7704、let-7c-5p、let-miR-103a-3p 和 miR-3960。2.miRNA芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn),哮喘組患兒的支氣管肺泡灌洗液中存在65種miRNAs與對(duì)照組有差異表達(dá),包括43個(gè)下調(diào)的miRNAs和22個(gè)上調(diào)的miRNAs。下調(diào)的miRNAs中包含miR-34/449家族中的6種miRNAs和miR-200家族中的7種miRNAs,占所有下調(diào)miRNAs的30.2%。3.對(duì)miR-34/449家族和miR-200家族中的13種miRNA定量RT-PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),miR-34/449家族中的4種和miR-200家族中的6種表達(dá)水平與miRNA芯片結(jié)果一致,包括 miR-34b-3p、miR-34b-5p、miR-34c-3p、miR-34c-5p、miR-200a-3p、miR-200a-5p、miR-200b-3p、miR-200b-5p、miR-200c-3p 和 miR-141-3p。4.miR-34家族和miR-200家族的預(yù)測(cè)靶基因中E-cadherin基因,在兩組間存在差異性表達(dá),且其在哮喘兒童的支氣管肺泡灌洗液中表達(dá)下調(diào)(P0.05)。結(jié)論miRNAs特別是miR-34和miR-200家族,參與了哮喘的發(fā)生,并可能通過調(diào)控靶基因E-cadherin的表達(dá)參與兒童哮喘的發(fā)病,這為哮喘的治療提供了可能的治療靶點(diǎn)或者新方向。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R725.6
【文章目錄】：
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中文摘要
英文摘要
中英文縮略詞
1 前言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑與材料
    2.3 PCR所需引物
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 研究對(duì)象
    3.2 納入標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)
    3.3 支氣管肺泡灌洗液（BALF）的收集
    3.4 RNA抽提（TRIzol法）
    3.5 miRNA芯片
    3.6 PCR技術(shù)
    3.7 PCR產(chǎn)物2%瓊脂糖凝膠電泳
    3.8 蛋白濃度的測(cè)定
    3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 對(duì)照組miRNA結(jié)果
    4.2 差異表達(dá)的miRNA
    4.3 差異表達(dá)miRNA的驗(yàn)證
    4.4 差異表達(dá)miRNA家族（2個(gè)家族）靶基因及信號(hào)通路的預(yù)測(cè)
    4.5 靶基因E-cadherin及其蛋白表達(dá)水平的測(cè)定
5 討論
6 結(jié)論
7 不足與進(jìn)一步展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡歷

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本文編號(hào)：2857384