【目的】研究表面蛋白A1基因多態(tài)性頻率分布,探討其與新生兒支氣管肺發(fā)育不良(BPD)相關(guān)性 【方法】選擇2008年7月至2010年10月同濟(jì)醫(yī)院接診武漢漢族BPD患兒,滿足入選條件共38例,同期非呼吸系統(tǒng)疾病入院患兒55例為對(duì)照。兩組均取靜脈血2mL,EDTA-Na抗凝,用傳統(tǒng)酚氯仿方法抽提DNA,無(wú)水乙醇沉淀干燥后溶解于TE中-20℃保存。SPA1與SPA2同源性極高,故應(yīng)用巢式PCR(nested-PCR)與限制性酶切(RFLP)技術(shù)相結(jié)合。每一個(gè)樣本需進(jìn)行一次PCR,將PCR產(chǎn)物用雙蒸水按1:99稀釋后作為用nested-PCR的模板進(jìn)行第二次PCR。將PCR結(jié)果取5μl于2﹪瓊脂糖凝膠電泳。取PCR產(chǎn)物5μl分別加入適量的相應(yīng)特異性?xún)?nèi)切酶。A219位點(diǎn)65℃水浴2小時(shí),AA62、AA50、AA19位點(diǎn)37℃水浴過(guò)夜。酶消化產(chǎn)物10μl或15μl于8%或12﹪聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,參照DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)電泳條帶判斷基因型。 【結(jié)果】BPD組和對(duì)照組AA219,AA62,AA50,AA19基因和基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)人群均具有群體代表性。對(duì)各基因位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布進(jìn)行比較顯示BPD組和對(duì)照組之間AA50基因型分布(P=0.038)和等位基因頻率(P=0.012)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AA219,AA62,AA19三個(gè)位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。AA50 BPD組CC基因型明顯低于對(duì)照組(7vs23,P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 【結(jié)論】SPA1上AA50位點(diǎn)基因多態(tài)性可能與新生兒支氣管肺發(fā)育不良有關(guān),CC基因型可能對(duì)BPD患病有保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類(lèi)】：R722.1
【部分圖文】：

圖 1：為 AA219 位點(diǎn)基因多態(tài)性 PAGE 電泳結(jié)果：M 泳道：分子量標(biāo)準(zhǔn)；1、7子 T/T 基因型；2、3：為純合子 C/C 型；4、5、6：為雜合子 T/C 型。AA62 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物經(jīng) HhaⅠ酶切后 PAGE 電泳后銀染結(jié)果見(jiàn)圖 2。表現(xiàn)為A/A 型：222bp；純合子 G/G 型：196bp；雜合子 A/G 型：222bp 和 196bp。圖 2：為 AA62 位點(diǎn)基因多態(tài)性 PAGE 電泳結(jié)果：1、2、4、8 為純合子 G/G 型為雜合子 A/G 型；7、9 為純合子 A/A 型。AA50，AA19 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物分別經(jīng) DdeⅠ和 BbvⅠ酶切后瓊脂糖電泳結(jié)果見(jiàn)

圖 1：為 AA219 位點(diǎn)基因多態(tài)性 PAGE 電泳結(jié)果：M 泳道：分子量標(biāo)準(zhǔn)；1、子 T/T 基因型；2、3：為純合子 C/C 型；4、5、6：為雜合子 T/C 型。AA62 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物經(jīng) HhaⅠ酶切后 PAGE 電泳后銀染結(jié)果見(jiàn)圖 2。表現(xiàn)為A/A 型：222bp；純合子 G/G 型：196bp；雜合子 A/G 型：222bp 和 196bp。

AA62 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物經(jīng) HhaⅠ酶切后 PAGE 電泳后銀染結(jié)果見(jiàn)A/A 型：222bp；純合子 G/G 型：196bp；雜合子 A/G 型：222bp 和圖 2：為 AA62 位點(diǎn)基因多態(tài)性 PAGE 電泳結(jié)果：1、2、4、8 為純?yōu)殡s合子 A/G 型；7、9 為純合子 A/A 型。AA50，AA19 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物分別經(jīng) DdeⅠ和 BbvⅠ酶切后瓊脂糖AA50 純合子 G/G 型：143bp；純合子 C/C 型:123bp； 雜合子 G/C 型AA19 純合子 T/T 型：143bp；純合子 C/C 型:103bp； 雜合子 T/C 型
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 常立文;;新生兒支氣管肺發(fā)育不良的診治[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;2007年04期

本文編號(hào)：2847524