背景：先天性心臟病發(fā)病率占存活嬰兒的6‰-8‰,其中復(fù)雜先天性心臟病占0.5‰-2‰。大量復(fù)雜先天性心臟病例需生物或人工材料,如同種帶瓣血管,異種帶瓣血管及其他類型的帶瓣血管等,重建成右(左)室流出道得到糾治。同種帶瓣血管因其結(jié)構(gòu)自然,中心血流、抗反流、免疫原性低、不易形成血栓、不易附著細(xì)菌等優(yōu)點,在復(fù)雜先天性心臟病治療的應(yīng)用范圍越來越廣。有活性的同種帶瓣血管與無活性的人工帶瓣血管及其他類型的血管相比,因其具有一定程度的細(xì)胞生長能力,遠(yuǎn)期瓣膜失功幾率低,鈣化狹窄發(fā)生幾率低及血管的使用壽命時間長等特點,因此保存同種帶瓣血管的活性是實驗研究的方向。保存同種帶瓣血管的活性關(guān)鍵是在帶瓣血管的獲取、處理、降溫、保存及復(fù)溫過程中盡量減少帶瓣血管細(xì)胞的壞死和凋亡。作為促進(jìn)細(xì)胞凋亡的Bax基因與抑制細(xì)胞凋亡的Bcl-2基因,已經(jīng)有研究證實Bax基因表達(dá)可以促進(jìn)在缺血再灌注損傷模型中心肌細(xì)胞的凋亡；而在誘導(dǎo)大鼠心肌凋亡的研究中Bcl-2基因的表達(dá)則減少了心肌細(xì)胞的凋亡。以往很多研究是通過檢測葡萄糖代謝率等方法檢測帶瓣血管的活性,這些方法均是從細(xì)胞代謝水平來檢測帶瓣血管活性而不是基因與蛋白水平的檢測方法,因此我們探討在基因與蛋白水平檢測帶瓣血管經(jīng)凍存不同時間后的活性。 目的：研究在大鼠帶瓣血管低溫保存不同時間活性及Bax和Bcl-2基因的表達(dá)情況,探討基因檢測是否能成為同種帶瓣血管活性指標(biāo)。 方法：80只wistar大鼠分為四組：新鮮血管20例(A組),凍存3個月血管20例(B組),凍存6個月血管20例(C組),凍存9個月血管20例(D組)。應(yīng)用葡萄糖代謝法檢測帶瓣血管的代謝情況,鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(streptavidin peroxidase, SP)免疫組織化學(xué)法檢測樣本中的Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1、光鏡檢查各組帶瓣血管的三層結(jié)構(gòu)均存在,彈性存在。A組和B組血管的內(nèi)皮細(xì)胞層完整,連接緊密,脫落不明顯,細(xì)胞核清楚可見,纖維層排列緊密,C組及D組內(nèi)皮層出現(xiàn)局部分層,局部的細(xì)胞脫失,細(xì)胞連接不緊密,纖維層排列緊密。 2、各組間葡萄糖代謝率結(jié)果差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3、大鼠帶瓣血管的Bax蛋白陽性率隨著凍存時間的延長而增加,血管的Bcl-2蛋白陽性率與凍存時間長短無關(guān)。 結(jié)論： 1、經(jīng)液氮保存3、6、9個月后的大鼠帶瓣血管與新鮮的大鼠帶瓣血管葡萄糖代謝率結(jié)果無顯著性差異(P0.05),提示經(jīng)凍存后帶瓣血管活性存在。 2、在經(jīng)凍存后帶瓣血管Bax蛋白表達(dá)隨時間的延長而增加統(tǒng)計學(xué)有顯著性差異,提示隨著凍存時間的延長,細(xì)胞凋亡增加,推測Bax基因可以做為檢測同種帶瓣血管活性的指標(biāo)之一。 3、在各組中Bcl-2蛋白的陽性表達(dá)無顯著性差異,提示Bcl-2基因表達(dá)的存在或高表達(dá)有可能是細(xì)胞能耐受凍存打擊的原因之一。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R725.4
【部分圖文】：

(x’=7.033，P=0.008);C組與D組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(x’=3.135P=O.077);經(jīng)線性趨勢性檢驗，隨凍存時間的延長，Bax蛋白的陽性表達(dá)率逐漸增高(xZ=12.927，P=0.000)。見表3，圖1，附圖5一8。表3各組大鼠帶瓣血管Bax蛋白表達(dá)比較組別例數(shù)陽性數(shù)陽性率(%)尸值蘸蘸 蘸黝 黝蘸 蘸… …撇撇 撇繃緣繼粼 粼溪策槳 槳姍姍東麓熬熬 熬 {{{{{lll}}}!!!{{{{{鬃鬃鬢薰馨馨熬翼馨 馨纂 纂黝纂 纂蘸 蘸瓢 瓢罐罐罐暴暴蘸蘸 蘸鬢籍蒸彝 彝翼 翼纂鬢鑫鬢 鬢姍 姍 姍 姍姍薰 薰薰委派袋派忍翠扮扮瀟硯硯吸沖溺淤召終終冬緊定淡淡 淡 淡淡圖1各組中Bax蛋白表達(dá)陽性率比較 Fig1ThePOsitiven歡 ecomP幼 sonofBaxProteinexPressionineachgrouP 4.Bcl一2蛋白在各組帶瓣血管表達(dá)情況Bd一2蛋白在A組、B組、C組和D組的陽性表達(dá)率分別為25%、30%、20%和35%，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，4組間陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2842801