1.研究背景阪崎克羅諾桿菌(Cronobactersakazakii,CS)是一種引起嬰幼兒壞死性小腸結(jié)腸炎(Necrotizingenterocolitis,NEC)的革蘭陰性無芽孢桿菌。腸道菌群失調(diào)、腸黏膜屏障的破壞和細胞死亡增加與CS致NEC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。益生菌具有抑制致病菌生長、維持腸道菌群平衡、促進腸黏膜和免疫細胞發(fā)育等功能,已成為NEC防治的研究熱點和發(fā)展趨勢。前期從健康嬰兒糞便中分離篩選到一株無毒脆弱擬桿菌(Bacteroidesfragilis)(ZY-312),具有治療腸道炎癥、腹瀉等功能。本研究將開展ZY-312能否防治CS致NEC的發(fā)生,并初探其防治機制。2.研究方法(1)建立基于人結(jié)腸腺癌Caco-2的體外腸屏障模型,明確ZY-312能否抑制CS對腸屏障的損傷及其保護作用機制。(2)建立基于“CS定植腸黏膜-破壞腸屏障-引發(fā)NEC”發(fā)病過程的新生大鼠模型,利用ZY-312干預,評價ZY-312防治CS致新生大鼠NEC感染的效果。(3)探討ZY-312防治CS致NEC感染的作用機制:1)明確ZY-312對新生大鼠腸屏障的保護作用;2)檢測ZY-312對CS致新生大鼠腸組織炎癥小體NLRP3及細胞焦亡的調(diào)控;3)明確ZY-312是否抑制CS誘導的細胞凋亡。3.研究結(jié)果(1)體外研究結(jié)果顯示ZY-312能抑制CS降解Caco-2分泌的黏蛋白,抑制CS的黏附和侵襲,減輕CS對腸上皮細胞緊密連接蛋白的破壞。(2)體內(nèi)研究結(jié)果顯示ZY-312能有效預防新生大鼠CS感染致NEC,降低死亡率。(3)ZY-312防治CS致NEC的機制包括:1)ZY-312可增強小鼠腸屏障功能,包括:①增加腸道表層黏蛋白、細胞緊密連接蛋白的表達和降低腸道的通透性來增強新生大鼠腸機械屏障功能;②增加腸道表層的免疫球蛋白A、減少促炎因子的釋放,增強新生大鼠腸免疫屏障功能;③通過改善腸道菌群的豐度,增加擬桿菌的數(shù)目,減少致NEC變形菌門的數(shù)量,實現(xiàn)微生物屏障功能的修復。2)ZY-312可抑制CS激活的炎癥小體NLRP3相關(guān)蛋白的表達,減少促炎因子IL-1β的釋放,緩解炎癥。3)ZY-312可抑制CS誘導的腸上皮細胞發(fā)生焦亡和凋亡,減少細胞程序性死亡,防治NEC的發(fā)生。4.結(jié)論新生兒早期腸屏障功能的不完善和致病菌導致的細胞死亡增加是NEC發(fā)生的主要原因。本研究引入二代益生菌脆弱擬桿菌ZY-312開展防治CS引起的NEC,結(jié)果表明ZY-312能通過調(diào)節(jié)腸道菌群、修復腸屏障、抑制炎癥小體NLRP3的活化,減少細胞程序性死亡(焦亡和凋亡),調(diào)控NEC。本研究為脆弱擬桿菌ZY-312的應用奠定理論基礎(chǔ),并為細菌性NEC的防治尋找新的治療靶點。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R725.7
【部分圖文】：

修復腸上皮屏障，并改變腸道代謝產(chǎn)物，從而改善ＭＩＡ癥狀（圖１－３）。??Ｍａｔｅｒｎａｌ?ｉｍｍｕｎｅ?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?Ｓａｃｔｅｒｏ／ｃｔｅｓ?ｆｒａｇｒ／７／ｓ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??—?—－?，謂?一一?Ｚ??ｌｕｍｅｎ?＾?ｄｙｓｔｔｉｏｓｉｓ?ａｌｔｅｒｅｄ??ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ??ｒｙｒ?＂＾ｒ?＾?＾??｜Ｖ．矜凡ＩＶ?ＰＪＶ錢置上．．錢Ｊ｜??ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ?〇?ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄ?ｃｐｉｔｈＲｌｉａｌ?＾ＺＺＩＺ?Ｏ?ｉｍｐｒｏｖｅｄ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ??ｅｐｉｔｈｅＵｕｍ?ｂａｒｒｉｅｒ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ?—？?ｔ＞ａｒｒｌｅｒ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ??ｋＭ．?■＇，．．＾??？?？?？?Ｏ?ｌｅａｋａｇｅ?ｏｆ?Ｇｌ?？?？?〇?ｒｅｄｕｃｅｄ?ｌｅａｋａｇｅ??＊?？?？?．?？?ｍ？ｔａｔＫｊｌ？ｔｏ＊?？?ｏｆ?Ｇｌ?ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ??４?善??？?ｄｅｔｒｉｍｅｎｔａｌ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｎ?ｂｒａｉｎ?ａｎｔｉ?ｂｅｈａｖｉｏｒ?ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｎ?ｂｒａｉｎ?ａｎｄ?ｂｅｈａｖｉｏｒ??圖１－３脆弱擬桿菌通過修復腸黏膜屏障改善ＭＩＡ癥狀??Ｆｉｇ?１－３?Ｐｒｏｐｏｓｅｄ?Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ－Ｇｕｔ－Ｂｒａｉｎ?Ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ?ｉｎ?ｔｈｅ?ＭＩＡ?Ｍｏｄｅｌ??２．４脆弱擬桿菌利用六型分泌系統(tǒng)限制腸內(nèi)病原體的定殖，阻止腸道炎癥的??發(fā)生??腸道菌群是對抗腸道病原體的主要力量，而ＮＥＣ早產(chǎn)兒的腸道菌群多樣性??不足

炎癥的恢復。綜合文獻，脆弱擬桿菌莢膜多糖ＰＳＡ可誘導腸道免疫系統(tǒng)的成熟，??通過免疫反應延緩炎癥性疾病的過程［６（）］，即誘導腸道Ｆ〇Ｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞的分化、??ＩＬ－１０的產(chǎn)生及炎癥介質(zhì)的平衡發(fā)揮預防和治療炎癥性疾病的作用（圖１－４）。??ａ?Ｇｕｔ?Ｂｃａｅｉｏｔｄｅｓ??ｆｒａｇｉｌａ??Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ?ｌｕｍｅｎ??Ｌａｍｉｎａ?ｐｒｏｐｒｉａ??＼?Ｊ?Ｊ?｜?ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ??ＰＳＡ?ＦＯＸＰｉ＇Ｔ＾?ｃｅｌｌｓ??；?ＣＤ４．?ＴＭｌ７ｃｅｌｈ??ＭＨＣ?Ｔｃｅｌｌ??—?遽＾，ＦＮＴ????？?Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ??ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ??Ｔ．ｌｃｅｌｂ??圖１－４?ＰＳＡ免疫作用示意圖［６１］??Ｆｉｇ?１－４?Ｉｍｍｕｎｅ?ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｍｉｃｒｏｂｉａｌ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ?ＰＳＡ??２．６脆弱擬桿菌能改變巨噬細胞的表型，增加巨噬細胞對致病菌的吞噬能力，??并抑制病原菌在體內(nèi)定植??Ｄｅｎｇ?Ｈ等體外將分離的脆弱擬桿菌菌體裂解液與骨髓巨噬細胞（ＢＭＤＭ）??共孵育后，在ＭＯＩ為５００的情況下，能明顯增加巨噬細胞吞噬熒光微球和致病??性大腸桿菌的能力，對巨噬細胞表型分析，發(fā)現(xiàn)脆弱擬桿菌誘導巨噬細胞表達共??刺激分子ＣＤ８０、ＣＤ８６，向Ｍｌ型分化［氣此外，ＰａｇｌｉｕｃａＣ等報道脆弱擬桿菌??可抑制漢賽巴爾通體細菌引起的損傷，增加機體的保護功能，減少病原性細菌在??８??

Ｆｉｇ?１－５?Ｔｈｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｏｆＺＹ－３１２??３．脆弱擬桿菌抑制壞死性小腸結(jié)腸炎的其他可能機制??３．１炎癥小體的激活是否參與ＮＥＣ的發(fā)生？??ＮＥＣ是腸道免疫功能失衡而引起的炎癥性疾病，早在１９９７年，Ｖｉｓｃａｒｄｉ［６６］??，ＮＥＣ上ＩＬ－ｌＣａｓａｓｅ－１，??
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本文編號：2841725