第一部分ApoE、CALHM1基因多態(tài)性與顳葉癲癇的關(guān)聯(lián)研究 研究背景與目的 癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)中僅次于腦血管疾病的第二大病種。全球大約有50000000人患有癲癇,其中發(fā)展中國(guó)家的患者占80%。癲癇給患者、家庭以及整個(gè)社會(huì)都帶來了極大的疾病負(fù)擔(dān)。內(nèi)側(cè)顳葉癲癇(mesial temporal lobe epilepsy, MTLE)是發(fā)病率最高的成人部分性癲癇,也是臨床上最常見的難治性癲癇綜合征。散發(fā)性MTLE是由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用所導(dǎo)致的一類多基因復(fù)雜疾病,其中遺傳因素在MTLE的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要的角色。遺傳背景的差異在散發(fā)性MTLE人群中主要表現(xiàn)為單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms, SNPs),大量的研究證據(jù)表明基因多態(tài)性在MTLE的易感性方面發(fā)揮了重要的作用。一些研究表明載脂蛋白E (apolipoprotein E, ApoE)基因可能是MTLE的一個(gè)易感基因,另有研究發(fā)現(xiàn)ApoEε4等位基因與一些疾病相關(guān)的特征比如創(chuàng)傷后癲癇發(fā)作、MTLE早的起病年齡、難治性復(fù)雜部分性發(fā)作以及MTLE發(fā)作后意識(shí)障礙有關(guān)。而其它的一些研究未能發(fā)現(xiàn)ApoEε4等位基因與MTLE的關(guān)聯(lián)或者不能復(fù)制以前的關(guān)聯(lián)研究。鑒于上述不一致的研究結(jié)果,再加上不同地域和人種的群體在遺傳方面常存在差異,因此我們?cè)噲D在中國(guó)漢族人群進(jìn)行ApoE基因多態(tài)性與MTLE以及上述報(bào)道的一些MTLE相關(guān)臨床變量的關(guān)聯(lián)研究。另外,最近一研究發(fā)現(xiàn)人鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)蛋白1基因(calcium homeostasis regulator 1, CALHM1)能夠調(diào)節(jié)鈣離子穩(wěn)態(tài)、提高腦內(nèi)β-淀粉樣蛋白(amyloid-p,Aβ)的產(chǎn)生。鈣離子穩(wěn)態(tài)和腦內(nèi)Aβ的沉積均與MTLE的發(fā)生有密切的關(guān)系,據(jù)此我們推測(cè)CALHM1基因可能是MTLE的易感基因,因而探討了CALHM1基因多態(tài)性與MTLE的關(guān)聯(lián)。 研究方法 本研究采用病例對(duì)照研究設(shè)計(jì),在735例癲癇患者(包括560例MTLE患者)、558例健康對(duì)照受試者中探討了ApoEε4等位基因和-491A／T多態(tài)性與MTLE及其一些相關(guān)臨床變量的相關(guān)性；在560例MTLE患者、401例健康對(duì)照受試者中探討了CALHM1基因5個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)與MTLE易感性之間的關(guān)聯(lián)。采用PCR-PIRA (Primer Introduced Restriction Analysis,引物引入限制性分析)和PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism,限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)法進(jìn)行基因分型。采用盲法和隨機(jī)抽取10%的樣本重測(cè)進(jìn)行質(zhì)量控制。 結(jié)果 1.ApoE基因多態(tài)性與MTLE的相關(guān)性 中國(guó)漢族人群MTLE患者ApoEε4等位基因與既往較嚴(yán)重的頭部創(chuàng)傷有關(guān),既往有顱腦損傷的患者中攜帶ε4等位基因者發(fā)展成MTLE的風(fēng)險(xiǎn)是無ε4等位基因者的1.873倍(OR=1.873,95%CI 1.084-3.237,p=0.023). MTLE組與健康對(duì)照組比較,ApoE和-491A／T的等位基因、基因型及單倍型分布無明顯差異。ApoEε4等位基因與難治性MTLE的起病年齡、難治性復(fù)雜部分性發(fā)作以及MTLE發(fā)作后意識(shí)障礙無關(guān)。 2. CALHM1基因多態(tài)性與MTLE的相關(guān)性 CALHM1基因rs1119692位點(diǎn)等位基因與MTLE有明顯關(guān)聯(lián)(OR=1.35,95%CI1.10-1.65,p=0.003),經(jīng)多重比較校正后p值仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(校正后p=0.015)。MTLE組rs1119692-A等位基因的頻率(32.4%)明顯大于健康對(duì)照組(26.2%)。基因型分析也表明rs1119692變異與MTLE顯著相關(guān)(p=0.004,校正后p=0.02)。CALHM1基因多態(tài)對(duì)于MTLE遺傳易感性的影響與ApoEε4等位基因無關(guān)。四位點(diǎn)單倍型rs1119692-rs729211-rs2986016-rs2986017與MTLE的關(guān)聯(lián)最強(qiáng)(x2=19.87,p=0.0005)。其中G-G-G-T單倍型能夠顯著增加MTLE的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.09,95%CI1.27-3.42,p=0.0029),而G-A-G-C單倍型能夠明顯降低MTLE的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.70,95%CI 0.53-0.92,p=0.0106)。另外,二位點(diǎn)、三位點(diǎn)和五位點(diǎn)單倍型分析也表明了它們與MTLE有明顯的關(guān)聯(lián)。與Alzheimer病不同,本研究未發(fā)現(xiàn)rs2986017(Pro86Leu)與MTLE的關(guān)聯(lián)。MTLE組與健康對(duì)照組比較,其它的三個(gè)位點(diǎn)(rs729211、rs2986018、rs2986016)的等位基因與基因型均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論 ApoEε4等位基因可能是既往有顱腦創(chuàng)傷史患者發(fā)生MTLE的一個(gè)危險(xiǎn)因素,而ApoE和-491A／T多態(tài)性與中國(guó)漢族人群MTLE的易感性、難治性MTLE的起病年齡、難治性復(fù)雜部分性發(fā)作以及MTLE發(fā)作后意識(shí)障礙無關(guān)。CALHM1基因rs1119692多態(tài)性改變可能與MTLE的發(fā)病有關(guān),且不依賴于ApoEε4等位基因的存在。 第二部分中文版兒童癲癇影響量表的信度與效度分析 研究背景和目的 癲癇是兒童時(shí)期最常見的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一,我國(guó)兒童癲癇(不含熱性驚厥)每年的發(fā)病率為151／10萬,患病率為3.45%o,因此癲癇是危害兒童身心發(fā)育的重要疾病之一。最近大量的研究提示癲癇治療的終極目標(biāo)已不再僅僅局限于控制癲癇發(fā)作,還要使癲癇患兒的生活質(zhì)量得到全面的提高。目前,盡管已有很多用于評(píng)定兒童癲癇對(duì)癲癇患兒生活質(zhì)量影響的量表問世,但仍然缺乏能夠用來評(píng)價(jià)兒童癲癇對(duì)其家庭及患兒生活質(zhì)量影響的癲癇特異性調(diào)查問卷。兒童癲癇影響量表(theimpact of pediatric epilepsy scale, IPES)就是針對(duì)評(píng)價(jià)兒童癲癇對(duì)其家庭及自身生活質(zhì)量的影響這一目的而創(chuàng)建的,它是一合適、有效的測(cè)評(píng)量表。不同的經(jīng)濟(jì)和文化背景可能會(huì)對(duì)西方國(guó)家適用的測(cè)評(píng)工具直接在其他國(guó)家使用時(shí)的可信性和有效性產(chǎn)生影響。因此,本研究的目的是將英文版IPES量表恰當(dāng)?shù)胤g成中文,并檢驗(yàn)其信度、效度以及敏感度,從而為我國(guó)心理學(xué)研究以及常規(guī)臨床護(hù)理提供一個(gè)良好的測(cè)量工具。 方法 根據(jù)歐洲癌癥研究及治療機(jī)構(gòu)生活質(zhì)量小組的量表翻譯過程指南,將英文版IPES量表翻譯成中文。嚴(yán)格按照錄入和排除標(biāo)準(zhǔn)納入合適的病人。該量表的聚合效度是通過分析中文版IPES量表中的每個(gè)項(xiàng)目與中文版父母評(píng)價(jià)的兒童癲癇生活質(zhì)量量表和兒童癲癇影響測(cè)評(píng)表的亞量表的相關(guān)性來評(píng)價(jià)；采用主成份分析,并作方差最大旋轉(zhuǎn)(varimax rotation)來檢驗(yàn)該量表的結(jié)構(gòu)效度。Cronbach's a系數(shù)用于評(píng)估每個(gè)項(xiàng)目與總量表的內(nèi)部一致性信度；采用組內(nèi)相關(guān)系數(shù)(the intraclass correlation coefficient, ICC)模型來評(píng)價(jià)該量表的重測(cè)信度。敏感度的分析是通過比較不同癲癇嚴(yán)重程度患兒的項(xiàng)目平均得分的差異是否顯著來評(píng)價(jià)。 結(jié)果 在將英文版IPES量表翻譯為中文的過程中,遇見的主要問題是能否準(zhǔn)確理解其含義和文化背景的差異。共有110例患者納入本研究,在研究人員的督促下所有入組患者均完成了重測(cè)測(cè)驗(yàn)。完成該量表的平均時(shí)間為5分鐘(3-10分鐘),每個(gè)項(xiàng)目的平均得分范圍是0.30-2.82分。該量表的所有項(xiàng)目都對(duì)該測(cè)量工具有顯著貢獻(xiàn)。效度分析表明,IPES量表的每個(gè)項(xiàng)目平均得分與中文版父母評(píng)價(jià)的兒童癲癇生活質(zhì)量量表和兒童癲癇影響測(cè)評(píng)表中概念相近的亞量表顯著相關(guān),主成份分析顯示三個(gè)因素(外部活動(dòng)的參與、社會(huì)功能、家庭生活)解釋了該量表72%的方差。第一次和第二次測(cè)驗(yàn)的總體內(nèi)部一致性系數(shù)分別為0.916和0.930；該量表的重測(cè)信度范圍為0.891-0.992。另外,該量表能夠區(qū)分不同嚴(yán)重程度的癲癇患兒,提示其具有較高的敏感度。 結(jié)論 中文版IPES量表的翻譯過程經(jīng)過反復(fù)斟酌,心理測(cè)量學(xué)特征分析結(jié)果提示該量表具有較好的效度、極好的內(nèi)部一致性信度和重測(cè)信度以及較高的敏感度,因此它可以作為在中國(guó)評(píng)價(jià)兒童癲癇對(duì)其家庭及自身生活質(zhì)量影響的嚴(yán)重程度的一個(gè)確切、可接受、簡(jiǎn)潔的生活質(zhì)量測(cè)評(píng)工具。該量表在未來的心理學(xué)研究以及常規(guī)臨床護(hù)理中都具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R742.1
【部分圖文】：

北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士研究生學(xué)位論文19bp的小片段已看不清楚。各種基因型的特征見圖1一2。圖1一6是部分研究對(duì)象Pvull酶切后瓊脂糖凝膠電泳圖。 2345678910llj21314151617，8192021222324500bP250bP100bP圖l一6:40，0瓊脂糖凝膠電泳分離顯示rs29s6017的PeR產(chǎn)物Pvull酶切結(jié)果:3，17，20為T汀;2，11，21為T/C;其余為e/C:24為 DLZ000Marker4.cALH叼了基因:51119692的基因分型:錯(cuò)配引物，引入HPall酶切位點(diǎn)。擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為112坤。經(jīng)Hpan酶切可獲得87bp和25bp的片段。經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的電泳后

6.CALH人f1基因rs2986018的基因分型:錯(cuò)配引物，引入川ul酶切位點(diǎn)。擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為 114bp。經(jīng)Alul酶切可獲得95bP和19帥的片段。經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的電泳后，19bp的小片段已看不清楚。各種基因型的特征見圖1一2。圖1一9是部分研究對(duì)象Alul酶切后瓊脂糖凝膠電泳圖。 2345678910111213141516171819202122232000bP114匕p卡95bP-.250bP 100bP圖l一9:40，0瓊脂糖凝膠電泳分離顯示rs29s6ols的PCR產(chǎn)物Alul酶切結(jié)果:20為T汀;2，3，11，17，21為C廳:其余為C/C;23為 oL2000Marker7.CALHMI基因rs2986016的基因分型:錯(cuò)配引物，引入Mtul酶切位點(diǎn)。擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為122bP。經(jīng)Mhil酶切可獲得95bP和27bP的片段。經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的電泳后，27bp的小片段已看不清楚。各種基因型的特征見圖1一2。圖1一10是部分研究對(duì)象Mlul酶切后瓊脂糖凝膠電泳圖。 23456789101j121314151617181920212223122b{95bP250bP100bP圖1一10:4%瓊脂糖凝膠電泳分離顯示rs2986016的PcR產(chǎn)物Mlul酶切結(jié)果:18
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