目的:評價異丙酚在肝缺血再灌注(HIR)誘導的海馬損傷的作用以及線粒體自噬在該過程該過程中所起的作用。方法:清潔級的健康的雄雌不分的C57/BL小鼠40只,周齡2周,體重6~8g,隨機數(shù)表法分為4組(n=10):假手術組(S組)、肝缺血/再灌注組(IR組)、異丙酚組(P組),和異丙酚+自噬抑制劑(3-甲基腺嘌呤,3-MA)組(3-MA組)。采用夾閉肝左葉、中葉脈管(門脈、動脈與膽道)的共干的方法制備70%肝缺再灌注損傷模型。S組僅開腹、游離第一肝門以及1小時后關腹等操作,無血管夾閉,IR組按上述方法制備70%肝缺再灌注損傷模型,P組于造模前30 min腹腔注射異丙酚30 mg/kg;3-MA組造模前1h時腹腔注射3-MA5 mg/kg,30 min后腹腔注射異丙酚50μg/kg,S、和IR組在開腹前30min腹腔內注射等量乳化劑。各組小鼠于再灌注后6h通過眼球取血后處死小鼠,取海馬組織。采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)測定腦損傷標志物:神經元特異性烯醇化酶(NSE)和酸性結合蛋白(S100β)。取海馬組織,制備10%組織勻漿,采用硫代巴比妥酸法測定丙二醛(MDA)含量,采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性。采用免疫組化的方法檢測各小組海馬組織的小膠質細胞活化情況。通過TUNEL法評估海馬神經元細胞凋亡情況,計算細胞凋亡指數(shù)(AI)。采用透射電子顯微鏡(TEM)觀察各組小鼠海馬組織線粒體自噬和線粒體的超微結構。使用蛋白質免疫印跡(Western blot)分析評估LC3II/I,BNIP3L/NIX和p62的表達。結果:與S組相比,IR組,P組,3-MA組腦損傷標志物NSE和S-100β水平均升高,海馬組織中MDA含量上升,SOD活性下降,小膠質細胞活化水平增高,AI上升,LC3II/I,BNIP3L/NIX蛋白含量均提高,伴隨p62蛋白含量的下降(P0.05)。與IR組相比,P組腦損傷標志物NSE和S-100β水平明顯下降,海馬組織中MDA含量下降,SOD活性上升,小膠質細胞活化水平和AI下降,LC3II/I,BNIP3L/NIX蛋白含量進一步提高,伴隨p62蛋白含量的進一步下降,3-MA組腦損傷標志物NSE和S-100β水平進一步升高,海馬組織中MDA含量上升,SOD活性下降,小膠質細胞活化水平和AI上升,LC3II/I,BNIP3L/NIX蛋白含量均提高,伴隨p62蛋白含量的下降(P0.05)。TEM觀察,S組海馬組織線粒體結構完整,線粒體自噬較少。與S組相比,IR組,P組,3-MA組線粒體數(shù)量均有所下降,且線粒體形態(tài)結構紊亂,線粒體腫脹增加,自噬小體增多,與IR組相比,P組線粒體數(shù)量增多,線粒體結構較完整,線粒體自噬小體數(shù)量增多,3-MA組的線粒體數(shù)量下降明顯,且線粒體形態(tài)結構紊亂,線粒體腫脹進一步增加,自噬小體減少。結論:1.異丙酚可減輕幼鼠肝缺血再灌注后海馬組織的氧化應激反應和細胞凋亡。2.異丙酚減輕幼鼠肝缺血再灌注后海馬損傷的機制與激活線粒體自噬相關。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R726.9
【部分圖文】：

具有統(tǒng)計學意義。2 結果2.1 腦損傷標志物 NSE 和 S100β與 S 組相比，IR 組，P 組，3-MA 組血清中腦損傷標志物 NSE 和 S100β均有所增加（P<0.05），與 IR 組相比，P 組的血清中腦損傷標志物 NSE 和 S100β下降（P<0.05），3-MA 組腦損傷標志物 NSE 和 S100β水平上升。見表 1 和圖 1 。表 1 血清 NSE、S100β濃度的比較（n=10， x ± s）組別 NSE（ng/mL） S100β（mg/mL）S 組 9.74±0.72 1.34±0.06IR 組 31.33±2.34a2.06±0.13aP 組 20 .09±1.26ab1.73±0.08ab3-MA 26.52±2.73ab2.23±0.22ab與 S 組比較 ，aP<0.05；與 IR 組比較，bP<0.05。

天津醫(yī)科大學碩士學位論文與 S 組比較，IR 組，P 組，3-MA 組的 MDA 含量顯著升高，SOD 活性降低（P＜0.05）；與 IR 組比較，P 組的 MDA 含量顯著降低，SOD 活性升高，3-MA組的 MDA 含量顯著升高，SOD 活性降低（P＜0.05）。見表 2 和圖 2。表 2 海馬組織 MDA 含量及 SOD 活性的比較（n=5， ±s）組 別 MDA(mmol/mg) SOD(U/mg)S 組 58.99±5.04 230.1±18.03IR 組 130.90±8.92a177.4±6.68aP 組 89.26±3.64ab202.8±9.72ab3-MA 組 164.4±12.59ab167.8±6.25ab與 S 組比較 ，aP<0.05；與 IR 組比較，bP<0.05。

圖 3：海馬組織小膠質細胞活化情況（×200）2.4 海馬神經元凋亡TUNEL 檢測海馬神經元凋亡，凋亡細胞核顯示為紅色熒光，細胞核顯示為DAPI 藍色熒光染色。結果表明，與 S 組相比，IR 組，P 組，3-MA 組的細胞凋亡的程度明顯加重，各組海馬組織，每個切片各取 5 個高倍視野下算出的細胞凋亡指數(shù)均有所增加（P<0.05）；與 IR 組相比，P 組的細胞凋亡情況明顯，細胞凋亡指數(shù)下降，3-MA 組的細胞凋亡則反而加重，細胞凋亡指數(shù)上升（P<0.05）。見圖 4、圖 5
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本文編號：2837959