目的:通過分析SP-C基因exonⅠ、Ⅱ、Ⅲ結構,篩查SP-C基因突變類型,計算突變的基因型頻率和基因頻率,評估突變與NRDS發(fā)病及其嚴重性的關系,最終探明SP-C基因突變是否為漢族NRDS的發(fā)病因素,為國內臨床診治該病拓寬視野。方法:選取2013年01月至2014年12月在北京軍區(qū)總醫(yī)院附屬八一兒童醫(yī)院新生兒重癥監(jiān)護病房住院治療、并確診為NRDS的90例漢族患兒作為NRDS組,又根據胎齡分為3個亞組:極早產組(胎齡32周)、早產組(32周≤胎齡37周)、足月組(胎齡≥37周),每組30例。采用觀察表收集臨床資料,主要包括性別、胎齡、出生體重、分娩方式、窒息、胎膜早破、胎盤異常、孕母情況、血常規(guī)、血氣分析、血培養(yǎng)、痰培養(yǎng)、胸片分度、機械通氣、肺表面活性物質使用、預后等指標。另選取90例其它漢族患兒作為對照組,對照組的患兒可患有壞死性小腸結腸炎、先天性腸道閉鎖等腹部先天性疾病,對照組患兒以胎齡、性別、出生體重等方面與NRDS組相匹配。所有研究對象在臨床確診或住院后抽取抗凝全血樣本。采用DNA抽提試劑盒提取基因組DNA,通過PCR分別對SP-C基因的exonⅠ、Ⅱ、Ⅲ進行擴增,并對擴增產物進行基因測序,用基因計數(shù)法計算基因頻率,運用Hardy-Weinberg平衡法則進行遺傳平衡吻合度檢驗。采用2x檢驗比較組間基因型、基因頻率及差異的顯著性,并分析不同基因型以及等位基因頻率與所研究的NRDS發(fā)病及嚴重程度的關聯(lián)性。結果:(1)SP-C基因exonⅡ存在c.115GT和c.139GC兩種雜合錯義突變,均引起sp-c蛋白序列改變,僅在nrds組發(fā)現(xiàn);sp-c基因exonⅢ存在c.228gc雜合同義突變,并未引起氨基酸的改變,在nrds組和對照組發(fā)現(xiàn)。以上3種基因突變迄今尚未見國內外報道;在exonⅠ未發(fā)現(xiàn)任何基因突變。(2)nrds組在sp-c基因exonⅡ存在c.115gt雜合錯義突變,此突變存在gg(野生型)、g/t(突變型)2種基因型。突變(g/t)基因型頻率為0.078,突變(t)等位基因頻率為0.039。nrds組g/t基因型頻率(0.078)高于對照組(0)(2x=7.283,p0.05),nrds組t等位基因頻率(0.039)高于對照組(0)(2x=7.139,p0.05)。nrds組90例研究對象中,55例患兒胸片示nrdsiii-iv級改變,g/t基因型頻率(1.000)高于gg基因型頻率(0.578)(2x=4.830,p0.05),t等位基因頻率(1.000)高于g等位基因頻率(0.595)(2x=4.635,p0.05)。7例患兒死亡,g/t基因型頻率(0.571)高于gg基因型頻率(0.036)(2x=25.788,p0.01),t等位基因頻率(0.571)高于g等位基因頻率(0.058)(2x=24.744,p0.01)。(3)nrds組在sp-c基因exonⅡ存在c.139gc雜合錯義突變,此突變存在gg(野生型)、g/c(突變型)2種基因型。突變(g/c)基因型頻率為0.067,突變(c)等位基因頻率為0.033。nrds組g/c基因型頻率(0.067)高于對照組(0)(2x=6.207,p0.05),nrds組t等位基因頻率(0.033)均高于對照組(0)(2x=6.102,p0.05)。nrds組90例研究對象中,64例剖宮產中,g/c基因型頻率(0.167)低于gg基因型頻率(0.750)(2x=9.276,p0.01),c等位基因頻率(0.167)低于g等位基因頻率(0.730)(2x=8.956,p0.01)。55例患兒需要3-4劑肺表面活性物質治療,g/c基因型頻率(0.167)低于gg基因型頻率(0.643)(2x=5.343,p0.05),c等位基因頻率(0.167)低于g等位基因頻率(0.626)(2x=5.159,p0.05)。(4)nrds組和對照組在sp-c基因exonⅢc.228gc雜合同義突變,此突變存在gg(野生型)、g/c(突變型)2種基因型。nrds組突變(g/c)基因型頻率為0.089,突變(c)等位基因頻率為0.044。nrds組g/c基因型頻率(0.089)高于對照組(0.011)(2x=5.731,p0.05),nrds組c等位基因頻率(0.044)高于對照組(0.006)(2x=5.584,p0.05)。該位點突變與所研究的臨床指標無關聯(lián)性(p0.05)。結論:(1)本研究在中國漢族人群SP-C基因的exonⅡ、Ⅲ發(fā)現(xiàn)了c.115GT、c.139GC、c.228GC這3個前人未發(fā)現(xiàn)的基因突變。(2)SP-C基因c.115GT基因突變與所研究的NRDS發(fā)病和嚴重性相關聯(lián),且增加了該病死亡風險。(3)SP-C基因c.139GC基因突變與所研究的NRDS發(fā)病相關聯(lián),但沒有增加該病的嚴重程度及死亡風險。(4)SP-C基因c.228GC基因突變與所研究的NRDS發(fā)病相關聯(lián),但與所研究的NRDS的臨床嚴重程度無明顯相關性。
【學位單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R722.1
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
    1. 材料
        1.1 選擇研究對象
        1.2 實驗材料
    2. 方法
        2.1 臨床資料
        2.2 血樣本采集
        2.3 DNA抽提和PCR擴增
        2.4 基因測序
        2.5 統(tǒng)計學分析
結果
    1. 臨床資料
    2. DNA抽提及SP-C基因3個外顯子擴增
    3. SP-C基因exon Ⅰ基因突變篩查
    4. SP-C基因exon Ⅱ基因突變篩查
    5. SP-C基因exon Ⅲ基因突變篩查
討論
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
縮略詞表
攻讀學位期間發(fā)表文章情況
致謝

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本文編號：2835335