發(fā)布時間：2020-09-29 19:09

　　 背景與目的: 腎母細胞瘤(Wilmstumor:nephroblastoma,WT)是一種小兒腎臟惡性腫瘤,占小兒所有實體腫瘤的8%左右,是兒童最常見的實體腫瘤之一。Max Wilms1899年曾對該瘤的特征進行詳細的描述,故又命名為Wilms'瘤。本病多見于7歲以內(nèi)的兒童。本病的預后與腫瘤的組織學類型、發(fā)病年齡及是否轉(zhuǎn)移等密切相關,但對其預后影響最大的是腫瘤的局部侵犯和向重要臟器的遠處轉(zhuǎn)移的情況。近40年來由于手術、化療及放療等措施的綜合應用,腎母細胞瘤的死亡率大大降低,但是出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者預后仍然較差。利用分子生物學手段尋找與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移關系密切的基因,探索腫瘤預后標志物成為近年來醫(yī)學界研究的熱點。 CXCR4是近年來分離出的腫瘤轉(zhuǎn)移相關基因,已有研究證明該基因的過度表達與多種惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移關系密切,而SDF-1作為其配體,二者的結(jié)合在腫瘤細胞的遷移、粘附、增殖、侵襲、抗凋亡、血管新生及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。VEGF是作用最強的促血管生成因子之一,在腫瘤血管生成過程中發(fā)揮關鍵作用。VEGF表達在腫瘤的生長、浸潤,轉(zhuǎn)移和預后亦起著非常重要的作用。 本研究運用RT-PCR技術檢測腎母細胞瘤組織和瘤旁正常組織中的CXCR4mRNA的表達,并運用免疫組化技術檢測CXCR4,SDF-1和VEGF蛋白的表達情況。分析三者與腎母細胞瘤臨床病理指標的關系,并探討三指標之間的相關性,旨在尋找可以準確預測和判斷腫瘤預后的生物學指標,為腎母細胞瘤的臨床治療提供更多的實驗依據(jù)。 實驗方法 1.實驗對象選擇、組織樣本的采集和患者臨床資料的整理選取2007年-2008年間鄭大三附院,鄭大一附院,手術切除的腎母細胞瘤30例(其中新鮮標本19例蠟塊11例)和瘤旁組織12例(距腫瘤大于5CM)分別為實驗組和對照組,搜集患者的性別,臨床分期,病理類型,有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面的臨床資料,便于統(tǒng)計分析和研究。 2.采用Trizol試劑提取腎母細胞瘤組織RNA。通過1.0%的瓊脂糖凝膠電泳及RNA的OD值評估RNA的含量和純度。 3.使用Promega公司的AMV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進行cDNA的逆轉(zhuǎn)錄。RT-PCR擴增β-actin的檢測逆轉(zhuǎn)錄效果。 4.設計兩者引物,對CXCR4基因在腎母細胞瘤及瘤旁正常組織中表達量進行檢測,CXCR4的相對含量=(CXCR4密度/β-actin密度)。 5.免疫組化方法檢測CXCR4、SDF-1和VEGF三種蛋白的表達情況。陽性細胞胞質(zhì)著色,按染色強度分別進行計分。計算機輔助圖像分析求其光密度(OD)值平均值,代表其蛋白的含量。 6.統(tǒng)計學分析 運用SPSS15.0統(tǒng)計軟件,采用χ~2檢驗,Fisher精確檢驗和獨立樣本t檢驗等方法對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 實驗結(jié)果 1.RT-PCR結(jié)果顯示腫瘤組織中CXCR4mRNA的相對含量高于瘤旁組織(P＜0.05)。CXCR4mRNA相對含量在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,臨床分期Ⅲ-Ⅳ組高于Ⅰ-Ⅱ期組,預后不良組CXCR4mRNA相對含量高于預后良好組。免疫組化檢測CXCR4蛋白結(jié)果和PCR結(jié)果吻合,呈現(xiàn)一致的變化趨勢。 2.腎母細胞瘤中SDF-1蛋白陽性表達率是53.3%(16/30),高于瘤旁腎組織(P＜0.05)。SDF-1蛋白光密度值在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,臨床分期Ⅲ-Ⅳ組顯著高于Ⅰ-Ⅱ期組,預后不良組高于預后良好組(P＜0.05)。 3.腎母細胞瘤中VEGF蛋白陽性表達率是63.3%(19/30),高于瘤旁組織(P＜0.05)。VEGF蛋白光密度值在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,臨床分期Ⅲ-Ⅳ組高于Ⅰ-Ⅱ期組,預后不良組高于預后良好組(P＜0.05)。 4.相關性分析CXCR4與VEGF、SDF-1呈正相關(r=0.439,0.427 P＜0.05),SDF-1與VEGF呈正相關(r=0.369 P＜0.05)。 結(jié)論 1.RT-PCR技術與免疫組化技術檢測腎母細胞瘤組織CXCR4在mRNA和蛋白的表達水平,結(jié)果表明其轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平具有一致性。 2.腎母細胞瘤中CXCR4、SDF-1和VEGF表達較對照組增高,并與NTWS分期、病理分型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關。 3.CXCR4、SDF-1和VEGF表達有相關性,CXCR4、VEGF和SDF-1的高表達提示腫瘤具有更高的侵襲轉(zhuǎn)移能力。 4.對腎母細胞瘤中CXCR4、VEGF和SDF-1的表達進行檢測,可以判斷其惡性行為,預測浸潤和轉(zhuǎn)移的潛能,為臨床治療提供理論依據(jù)。
【學位單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2009
【中圖分類】：R737.11
【部分圖文】：

圖1腎母細胞瘤RNA瓊脂糖凝膠電泳lQualitativeanalysisofRNAfraglnentsbyagarosegelele錄ega公司的A娜逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，每次均以滅菌的錄步驟:品70℃水浴smin，短暫離心Zmin后置于冰上。應體系，加入上述PCR管中0xbuffer取lN仰s(10mM)取laseinhibior0.知landomprimer0.和lMVenzyme0.印l

圖5.SDF一l在腎母細胞瘤的表達(PV法IOx40)圖6.SDF一1在對照組的表達(PV法10x40)20O0bp1000bp750bp50Obp53lbP285bP250bp100bpMarker月中鄉(xiāng)富至目.又寸只硯建且

圖5.SDF一l在腎母細胞瘤的表達(PV法IOx40)圖6.SDF一1在對照組的表達(PV法10x40)20O0bp1000bp750bp50Obp53lbP285bP250bp100bpMarker月中鄉(xiāng)富至目.又寸只硯建且

【參考文獻】

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1 孟志兵;徐曉剛;周中華;;CXCL12/CXCR4對腫瘤生物學行為的影響[J];臨床腫瘤學雜志;2008年04期

2 主改俠;張敏鴿;段釗;劉瑩;;SDF-1及其受體CXCR4在上皮性卵巢腫瘤中的表達及意義[J];西安交通大學學報(醫(yī)學版);2008年02期

3 王曉翊;盧實;林曉琰;王澤華;;SDF-1/CXCR4對卵巢上皮性癌細胞增殖和侵襲的影響[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展;2008年04期

4 時小燕;劉少君;;趨化因子及其家族在中樞神經(jīng)生長發(fā)育、損傷修復中的作用[J];中國臨床康復;2006年13期

5 王青青,王建莉;趨化因子及其受體與腫瘤[J];中國腫瘤生物治療雜志;2001年01期

本文編號：2830136