目的：制備并評估新生兒壞死性小腸結腸炎(Necrotizing enterocolitis, NEC)新生大鼠腸道損傷后自我修復的模型。觀察新生大鼠NEC模型中腸道損傷修復過程中第10染色體同源丟失性磷酸酶張力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)、腸道干細胞標記物富含亮氨酸的G蛋白偶聯受體(eucine-rich-repeat-containing G-protein-coupled receptor 5, Lgr5)和腸道損傷修復過程中的重要因子β-連環(huán)蛋白(cadherin associated protein beta, P-catenin)的變化,探討PTEN、Lgr5和β-catenin在腸道缺血損傷與自我修復中的可能作用,為進一步研究NEC發(fā)病機制、可能的治療方向提供思路。 第一部分制備與評估NEC腸道損傷后自我修復的新生鼠模型 方法：30只新生大鼠隨機分為對照組15只(A組)和實驗組15只(B組)。實驗組在生后第1d起給予缺氧和冷刺激,連續(xù)3d,再分別于停止缺氧和冷刺激后24h、72h和120h脫臼處死,分為B1、B2和B3組,每組5只。對照組未予缺氧和冷刺激,同時間段處死,分為A1、A2和A3組,每組5只。于實驗前和實驗第4d分別測量兩組新生鼠體重,觀察體重變化情況。記錄實驗組制模過程中新生鼠對刺激的反應,有無腹脹、胃潴留、活動度下降等情況。處死后取新生鼠腸道組織標本,H.E.染色,Nadler評分標準評估模型中新生鼠腸道粘膜損傷與修復情況。 結果：1.實驗組新生鼠給予缺氧和冷刺激后相繼出現不同程度的活動下降,進奶量減少,輕到中度的腹瀉,可見明顯的腹脹和胃潴留,且在給予刺激的3d內漸有加重,而在停止刺激后72h和120h癥狀又逐漸消失。 2.實驗組在缺氧和冷刺激后體重增加量明顯低于對照組,P0.05,有統計學意義。 3.大體解剖時發(fā)現,對照組新生鼠腸壁色澤紅潤、彈性好；而實驗組B1組部分腸段可見水腫、增厚及明顯的出血點；而B2和B3組腸壁色澤又趨于基本正常。 4.H.E.染色可見對照組回盲部絨毛結構完整、粘膜完好、上皮完整、連續(xù)、腺體排列規(guī)則、組織結構清楚、分泌功能活躍、固有層血管無擴張,肌層無異常,無炎性細胞浸潤及潰瘍。實驗組B1組腸粘膜和粘膜下層充血、水腫,固有層較多炎癥細胞浸潤,Nadler病理組織評分均在2-3級之間。B2和B3兩組腸粘膜損傷較B1組減輕,少量粘膜脫落,少量炎癥細胞浸潤,Nadler病理組織評分均在1-2級之間。 第二部分PTEN、Lgr5和β-catenin在NEC腸道損傷修復中的變化觀察 方法：制備和評估NEC腸道損傷與自我修復的新生鼠模型后,在實驗組停止缺氧和冷刺激后24h、72h和120h,分別獲取不同組新生鼠末端回腸組織,利用Realtime PCR方法,測定組織勻漿中PTEN、Lgr5和β-catenin mRNA的表達水平。觀察腸道損傷后自我修復過程中PTEN、Lgr5和β-catenin的變化,分析三者之間的關系,探討三者可能的作用。 結果：1.實驗組與對照組相比,在停止缺氧和冷刺激后24h時,PTEN、Lgr5和β-catenin mRNA表達水平明顯升高,有顯著性差異(P=0.013；P=0.047；P=0.020),具有統計學意義。 2.停止缺氧和冷刺激后72h和120h時,實驗組與對照組相比,PTEN.Lgr5和P-catenin mRNA表達水平不具顯著性差異(P=0.630,P=0.864；P=0.481,P=0.353；P=0.472,P=0.259),無統計學意義。 3.實驗組PTEN、Lgr5、β-catenin三者在24h時的表達水平無明顯差異(P=0.053；P=0.105；P=0.681),無統計學意義。 4.實驗組PTEN、Lgr5和β-catenin mRNA表達水平在24h時與72h和120h相比顯著升高(P=0.002,P=0.001；P=0.011,P=0.001；P=0.030,P=0.006),有統計學意義。 5.實驗組PTEN、Lgr5和β-catenin mRNA表達水平在72h與120h相比差異不大(P=0.941；P=0.525；P=0.746),無統計學意義。 結論：1、6%O2的N2,4℃冷刺激,成功制備新生大鼠NEC腸道損傷修復模型。 2、NEC模型后24h,腸道損傷期,PTEN、Lgr5和β-catenin mRNA表達水平明顯增加,顯著高于對照組。 3、NEC模型后72h與120h,腸道修復期,PTEN、Lgr5和β-catenin mRNA表達水平較24h明顯下降,與對照組比較,無顯著差異。 4、腸道損傷期,β-catenin表達水平增加,可能與促進干細胞增殖有關。 5、PTEN負性調節(jié)β-catenin活性,可能在平衡干細胞增殖速度和數量上起到一定作用。
【學位單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2011
【中圖分類】：R722.1
【部分圖文】：

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貧日大學碩十研究生學位論文PT巨N、Lg巧不lr日一Cat。ni，:在NEcj湯道損傷修艾‘}，的變化觀察瘤細胞生長、侵襲、轉移，促進腫瘤細胞凋亡。研究發(fā)現，PTEN具有蛋白磷酸酶和脂質磷酸酶雙重活性，能夠參與多種信號通路的調控，能夠調節(jié)細胞生長、增殖、分化和凋亡。PTEN基因產物在誘導細胞周期阻滯、細胞凋亡和血.管新生諸方面起著重要作用。其編碼的蛋白因具有雙重特異性磷酸酶活性，不僅加快磷酸酞肌醇3，4，5三磷酸(PhosPhatidylinositol3一kinases，PxP3)的03位脫磷酸，拮抗磷脂酞肌醇3激酶(Phosphatidylinositol3，4，5一triphosphate，pl3K)的磷酸化，減少PIP3的聚集;而且促使蛋白激酶B(Proteinkinase，Akt)磷酸酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸去磷酸，降低Akt的磷酸化水平。引起細胞周期阻滯和誘導凋亡〔’9〕，阻止腫瘤的惡性演變。PTEN不僅與腫瘤的發(fā)生有關，在PTEN缺失的小鼠中，胎鼠死亡率明顯增高，因此PTEN在胚胎的發(fā)育中起重要作用〔川。同時也發(fā)現下調PTEN能有效緩解由缺血再灌注所致的神經元損傷「縱。

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 魏克倫;楊于嘉;姚裕家;杜立中;王慶紅;;中國住院新生兒流行病學調查[J];中國當代兒科雜志;2009年01期

2 申崇標;陳力學;劉寶松;周冀英;曾照芳;邵陽;;下調PTEN基因對全腦缺血再灌注大鼠神經元損傷的保護作用研究[J];解放軍醫(yī)學雜志;2010年07期

本文編號：2820166