【摘要】：目的 孕期飲酒可以導(dǎo)致胎兒酒精綜合征，其中先天性心臟病(Congenitalheart diseases)為常見伴發(fā)畸形之一，目前其內(nèi)在機(jī)制仍不明確。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)組蛋白乙酰化修飾的改變能夠干擾心臟發(fā)育核心轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，同時(shí)阻礙間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化，而乙醇及其代謝產(chǎn)物可以選擇性的升高心肌祖細(xì)胞CP15-13(Cardiac progenitorcells15-13)組蛋白H3第九位賴氨酸（H3Lysine9, H3K9）乙�；郊靶呐K發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)。推測(cè)此可能為酒精致心臟發(fā)育畸形的機(jī)制之一。本研究通過構(gòu)建酒精致胚胎心臟發(fā)育異常小鼠動(dòng)物模型，在體內(nèi)水平探討孕期酒精暴露所致胚胎心臟發(fā)育異常的表觀遺傳機(jī)制，為該疾病發(fā)病機(jī)制的探尋提供全新思路。 材料與方法 選取雌性昆明小鼠，受孕后分組飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組于小鼠孕期心臟發(fā)育時(shí)間窗E7.5-E15.5（Embryo day）予以不同計(jì)量酒精連續(xù)灌胃，對(duì)照組予以等劑量生理鹽水灌胃。收集E11.5、E14.5、E17.5及E18.5胚胎心臟和新生小鼠及生后一周小鼠心臟。通過檢測(cè)血液酒精濃度及HE染色觀察胚胎心臟大體結(jié)構(gòu)篩選合適酒精灌胃濃度及劑量。應(yīng)用Westernblot檢測(cè)小鼠胚胎心臟發(fā)育H3K9乙�；瘯r(shí)序水平及酒精干預(yù)對(duì)其產(chǎn)生的影響。利用基于SYBR GREENⅠ的熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative polymerase chain reaction, Q-PCR)檢測(cè)酒精干預(yù)后心臟發(fā)育相關(guān)基因Gata4、Mef2c、Nkx2.5mRNA表達(dá)水平的改變。 結(jié)果 1.血液酒精濃度顯示，10ul/g/d酒精灌胃40分鐘后血液酒精濃度為348.15±77.49mg/100ml，高于2.5ul/g/d（46.42±14.24）及5ul/g/d（154.92±41）劑量組，而15ul/g/d劑量灌胃可導(dǎo)致孕鼠流產(chǎn)率增高（4/5），因此選擇10ul/g/d濃度劑量進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2.HE染色顯示酒精干預(yù)可以導(dǎo)致小鼠胚胎心臟心肌發(fā)育不良，心室腔增大，室間隔肌部變薄。未見解剖結(jié)構(gòu)畸形。 3.Western blot結(jié)果顯示胎鼠心臟發(fā)育期間，組蛋白H3K9乙酰化水平于發(fā)育早期（E11.5）開始升高，E17.5達(dá)到高峰并維持至出生前，于新生時(shí)期迅速下降，生后一周仍維持在較低水平，E17.5較E11.5、新生期及生后一周均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p0.05）。酒精干預(yù)致E11.5、E14.5、E17.5及E18.5胚胎心臟組蛋白H3K9乙�；捷^正常對(duì)照組升高（p0.05）。 4.Q-PCR結(jié)果顯示，酒精干預(yù)可致心臟發(fā)育相關(guān)基因Gata4和Nkx2.5在E14.5和E17.5， Mef2c在E14.5表達(dá)較對(duì)照組有顯著升高（p0.05）。 結(jié)論 以上數(shù)據(jù)顯示了胚胎心臟組蛋白H3K9乙�；臅r(shí)序性規(guī)律以并提示酒精干預(yù)可致其高乙酰化并致心臟發(fā)育核心轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)上調(diào)。為揭示酒精導(dǎo)致先天性心臟病提供全新思路及理論支持。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R725.4
【圖文】：

5.0 0 5 154.92±41.0510 6 40 348.15±77.49a15 4 5 689.31±18.26a: P<0.052.2 胚胎心臟 H&E 染色分別對(duì)酒精暴露組及正常對(duì)照組妊娠末期胚胎心臟進(jìn)行石蠟切片觀察大體結(jié)構(gòu)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：酒精暴露組較對(duì)照組心臟大體并未出現(xiàn)畸形，然而實(shí)驗(yàn)組室間隔肌部明顯變薄，心室腔較正常組有所增大，心室肌厚度降低（如圖 1-1 所示）。A B

心臟發(fā)育過程中，組蛋白 H3K9 乙酰化水平于發(fā)育早期（E11.5）開始升高到高峰并維持至妊娠末期（E18.5）（p＞0.05），后于新生時(shí)期顯著下降并低水平（Pd7），E17.5 較 E11.5、E14.5、新生期及生后 7 天均存在統(tǒng)計(jì)p<0.05）如圖 2-1。酒精干預(yù)致 E11.5、E14.5 及 E17.5 胚胎心臟組蛋白 H化水平較正常對(duì)照組分別升高 2.35、1.47、1.56 倍及 1.52（p<0.05）。而生后 7 天酒精干預(yù)組心臟組蛋白 H3K9 乙酰化水平較對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異5）如圖 2-2。

C D圖 2-2C Western-blot 檢測(cè) E11.5-新生小鼠心臟組蛋白 H3AcK9 水平Figure2-2C Western-blot result of E11.5-Newborn H3AcK9 level圖 2-2D Western-blot 檢測(cè) E17.5-生后 7 天小鼠心臟組蛋白 H3AcK9 水平Figure2-2D Western-blot result of E11.5-postday7 H3AcK9 level+代表酒精處理組；－代表正常對(duì)照組+means alcohol exposure －means control

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張如華;胡開順;武遠(yuǎn)眾;康鐵邦;;BRD7逆轉(zhuǎn)錄病毒穩(wěn)定系的構(gòu)建及其功能評(píng)價(jià)[J];分子診斷與治療雜志;2013年04期

本文編號(hào)：2797538