【摘要】： 先天性心臟病(簡稱先心病)是兒童最常見的先天性畸形之一,嚴(yán)重影響患兒生存率以及生存質(zhì)量。圓錐動脈干畸形是一類復(fù)雜性先心病,可以導(dǎo)致新生兒時期出現(xiàn)低氧血癥和難以糾正的酸中毒,引起患兒早期死亡。圓錐動脈干畸形的發(fā)病機(jī)制已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。先心病是多基因與環(huán)境因素相互作用的結(jié)果,遺傳因素日益受到重視。研究證實(shí),圓錐動脈干畸形是22q11微缺失綜合征最常見的心臟表現(xiàn),而部分圓錐動脈干畸形患者存在22q11微缺失。位于22q11微缺失片段的TBX1和HIRA等基因在動物模型中均證實(shí)與圓錐動脈干畸形有關(guān),被認(rèn)為是圓錐動脈干畸形發(fā)病的候選基因。然而,盡管22q11微缺失綜合征患者普遍表現(xiàn)有圓錐動脈干畸形,但是對于單純圓錐動脈干畸形與22q11微缺失的研究結(jié)果并不一致,此外,在人類圓錐動脈干畸形與22q11微缺失片段上的相關(guān)基因的研究還非常有限。本課題重點(diǎn)研究圓錐動脈干畸形患兒的染色體異常、22q11微缺失以及該微缺失片段上相關(guān)基因包括TBX1和HIRA的多態(tài)性,探討人類圓錐動脈干畸形與染色體異常和相關(guān)基因多態(tài)性的關(guān)系,為深入研究圓錐動脈干畸形的發(fā)生機(jī)制提供依據(jù)和基礎(chǔ)。 第一部分4046例染色體檢查與先天性心臟病關(guān)系的回顧性分析 目的: 分析染色體核型異常與先心病的關(guān)系。 方法: 采用病例回顧性方法分析我院從1990年1月至2006年12月所進(jìn)行染色體檢查的患兒中染色體核型異常的種類,并統(tǒng)計(jì)先天性心臟病患兒染色體核型的特點(diǎn)以及染色體核型異�；純旱南忍煨孕呐K病類型。 結(jié)果: 1、4046例染色體檢測患兒中,染色體核型異常660例(16.32%),先天性心臟病391例(9.66%)。 2、21三體綜合癥是最常見的常染色體疾病,共458例,占染色體核型異�？倲�(shù)的63.40%。先天性卵巢發(fā)育不良是最常見的性染色體疾病,共105例,占染色體核型異�？倲�(shù)15.90%。 3、660例染色體異常患兒中,有185例先天性心臟病患兒。157例染色體核型表現(xiàn)為21三體綜合征,其中133例(84.71%)心臟間隔類缺損。4例染色體核型表現(xiàn)為先天性卵巢發(fā)育不良綜合癥者,2例(50%)為主動脈弓縮窄。 4、391例先天性心臟病患兒中,染色體核型異常185例(41.31%),3655例心臟結(jié)構(gòu)正常的兒童中,染色體核型異常475例(13.0%)(x~2=304.7,P=0.000,OR=6.012,95%CI為4.822-7.497)。105例圓錐動脈干畸形患兒,染色體核型異常16例(15.24%),而286例非圓錐動脈干畸形兒童中,染色體核型異常169例(59.1%)(x~2=59.25,P=0.000,OR=8.035,95%CI為4.489-14.380)。 小結(jié): 1、21-三體綜合征是最常見的常染色體畸形疾病,其最常見的心臟畸形是間隔類缺損;先天性卵巢發(fā)育不良綜合征是最常見的性染色體畸形疾病,其常見的心臟畸形可能是主動脈縮窄。 2、圓錐動脈干畸形患兒染色體核型異常并不多見,提示應(yīng)用常規(guī)染色體核型分析無法對這類嚴(yán)重復(fù)雜的先心病進(jìn)行產(chǎn)前篩查。 第二部分圓錐動脈干畸形與22q11微缺失的關(guān)系 目的: 探討圓錐動脈干畸形與22q11微缺失的關(guān)系。 方法: 選取91例圓錐動脈干畸形患兒,采取患兒外周血2ml,對其外周血進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),制取染色體圖片,進(jìn)行染色體核型G帶分析。選用Vysis公司提供的Tuple1探針,應(yīng)用原位熒光雜交技術(shù)(FISH)進(jìn)行染色體微缺失檢測。 結(jié)果: 1、91例圓錐動脈干畸形患兒中,83例外周血染色體標(biāo)本進(jìn)行FISH實(shí)驗(yàn)成功,其疾病類型分布為肺動脈閉鎖/室間隔缺損31例、法洛四聯(lián)癥24例、右心室雙出口10例、肺動脈瓣狹窄7例、大動脈轉(zhuǎn)位5例、動脈單干4例、主動脈縮窄1例以及主動脈瓣狹窄1例。 2、FISH共檢測出3例陽性患兒,3例均為肺動脈閉鎖/室間隔缺損,占所有病例數(shù)3.6%,占肺動脈閉鎖的9.7%。 小結(jié): 1、22q11微缺失在肺動脈閉鎖/室間隔缺損中發(fā)生率比其它圓錐動脈干畸形高。 2、FISH可以作為產(chǎn)前檢查22q11微缺失的方法,在孕早期檢出部分肺動脈閉鎖/室間隔缺損等圓錐動脈干畸形。 第三部分圓錐動脈干畸形相關(guān)基因多態(tài)性研究 目的: 探討圓錐動脈干畸形與22q11區(qū)段上相關(guān)基因(TBX1、HIRA)多態(tài)性的關(guān)系。 方法: 應(yīng)用PCR技術(shù)以及測序的方法,對203例圓錐動脈干畸形患兒(法洛四聯(lián)癥87例、肺動脈閉鎖49例、大動脈轉(zhuǎn)位32例、右室雙出口29例以及動脈單干6例)、150例簡單先天性心臟病患兒和150例心臟結(jié)構(gòu)正常的健康兒童,檢測TBX1基因2857位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性,以及對HIRA外顯子5,25進(jìn)行測序。對TBX1基因2857位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性和HIRA 2個外顯子上單核苷酸多態(tài)性與圓錐動脈干畸形的關(guān)系進(jìn)行分析。 結(jié)果: 1、TBX1基因多態(tài)性分析 TBX1 2857位點(diǎn)非CC基因型(攜帶G等位基因)頻率在大動脈轉(zhuǎn)位組是87.5%、正常對照組是75.3%(X~2=4.821,P=0.028,OR=2.256,95%CI為1.079-4.718);TBX1 2857位點(diǎn)G等位基因頻率在大動脈轉(zhuǎn)位組是64.1%、正常對照組是47.4%(X~2=5.159,P=0.023,OR=1.926,95%CI為1.093-3.393)。 2、HIRA基因多態(tài)性分析 (1)HIRA 25983位點(diǎn)非CC基因型(攜帶G等位基因)頻率在大動脈轉(zhuǎn)位組是6.2%、簡單先心病組15.3%(X~2=4.310,P=0.038,OR=2.765,95%CI為1.026-7.449),右室雙出口組是3.4%、簡單先心病組15.3%(X~2=8.791,P=0.003,OR=5.706,95%CI為1.597-20.368),但是HIRA 25983位點(diǎn)G等位基因在各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (2)HIRA 100308位點(diǎn)非GG基因型(攜帶A等位基因)頻率在法洛四聯(lián)癥組是13.8%、正常對照組是3.3%(X~2=7.779,P=0.005,OR=5.264,95%CI為1.463-18.937),在動脈單干組是16.7%(X~2=10.889,P=0.001,OR=6.622,95%CI為1.874-23.391)。HIRA 100308位點(diǎn)A等位基因頻率在法洛四聯(lián)癥組是8.6%、正常對照組是1.7%(X~2=4.714,P=0.030,OR=4.846,95%CI為1.020-23.084),在動脈單干組是16.7%。(X~2=13.085,P=0.000,OR=10.036,95%CI為2.253-44.712)。 (3)HIRA 100598位點(diǎn)GG、GA和從基因型及G/A等位基因頻率在各組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 小結(jié): 1、TBX1 2857位點(diǎn)G/C單核苷酸多態(tài)性可能與大動脈轉(zhuǎn)位的遺傳易感性有關(guān),G等位基因可能是大動脈轉(zhuǎn)位的易感基因。 2、HIRA 100308位點(diǎn)G/A單核苷酸多態(tài)性與法洛四聯(lián)癥和動脈單干的遺傳易感性有關(guān),A等位基因可能是法洛四聯(lián)癥和動脈單干的易感基因。 3、HIRA 25983位點(diǎn)G/C和HIRA 100598位點(diǎn)G/A單核苷酸多態(tài)性與圓錐動脈干畸形易感性無顯著相關(guān)性。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R725.4
【圖文】：

!有家族史.其他圖1一 14046例患兒染色體檢查原因分布圖3、染色體核型異常基本情況:在4046例患兒中，有660例患兒(16.31%)存在染色體核型異常。在所有染色體異常病例中，按照染色體類型將其分為兩類:性染色體異常和常染色體異常。按照染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的變化又分為性染色體數(shù)目異常和性染色體結(jié)構(gòu)異常，以及常染色體數(shù)目異常和常染色體結(jié)構(gòu)異常(見表1一1，表1-2，表1一3，表l一4，表l一5)。

一、外周血染色體核型所有患兒外周血染色體處于分裂相中期，染色體核型均為正常:男性表現(xiàn)為46，XY;女性表現(xiàn)為46，XX(見圖2一1)。圖2一1:染色體核型G帶分析A:正常女性染色體核型:46，XX;B:正常男性染色體核型:46，XY二、熒光原位雜交 (FISH)結(jié)果1、91例患兒中，83例FISH成功(男:女=54:29)，其中有3例FISH陽性，即存在22qll微缺失(表2一1)。

2()()mm匕/m名， Me(;()onIndex:1.33，診斷為:肺動脈閉鎖伴室間隔缺損，側(cè)枝循環(huán)形成。該患兒經(jīng)過手術(shù)治療，但是術(shù)后心功能衰竭明顯，最終死亡。(F工SH結(jié)果見圖2一2，心導(dǎo)管檢查結(jié)果見圖2一3)‘七﨑才，自，!LL.k勿..1曰日F今口J口..圖2一2:標(biāo)本28染色體FIS日A:染色體核型G帶分析:46，XY;B、 C:FISH結(jié)果:紅點(diǎn)代表TuPlel、綠點(diǎn)代表對照位點(diǎn)22ql3、自色箭頭所指處為紅點(diǎn)缺失，表明存在 22q11微缺失

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2789070