【摘要】：目的:1.觀察缺鋅是否造成心臟發(fā)異常。2.觀察SENPs各成員在胚胎心臟發(fā)育過程中的變化趨勢及重要性。3.探討缺鋅是否通過誘導SENP5過表達導致小鼠胚胎心臟發(fā)育異常。研究內(nèi)容及方法:1.缺鋅對心肌細胞增殖、凋亡及分化的影響提取小鼠心肌細胞,進行原代培養(yǎng),通過免疫熒光雙標記實驗鑒定提取出的原代心肌細胞是否為心肌干細胞,建立缺鋅模型,利用CCK8和流式細胞術(shù)檢測心肌細胞在正常和缺鋅兩種不同的情況下的活性及凋亡情況,Western Blotting檢測原代心肌細胞的分化情況。2.SENPs各成員在小鼠胚胎心臟發(fā)育過程中的表達水平及變化趨勢收集E10.5至P7發(fā)育階段的小鼠胚胎心臟標本,通過免疫組化及Western Blotting檢測SENPs蛋白在心臟中的表達情況。3.缺鋅時SENP5蛋白表達變化及其對心肌細胞活性及分化的影響建立心肌細胞H9c2的缺鋅模型,在正常和缺鋅兩種不同的情況下,通過Western Blotting檢測心肌細胞中SENP5蛋白的不同表達情況。創(chuàng)建SENP5干涉質(zhì)粒,對心肌細胞進行轉(zhuǎn)染。通過CCK8檢測在SENP5干涉的情況下心肌細胞的活性情況,Western Blotting檢測心肌細胞的分化情況。結(jié)果:1.免疫熒光結(jié)果顯示原代培養(yǎng)的心肌細胞絕大部分表明都帶有Sca1和c-kit特異性標記物,證實為心肌干細胞。CCK8及流式結(jié)果顯示,與正常對照組相比,缺鋅時心肌細胞的活性明顯降低,凋亡數(shù)量增加。Western Blotting結(jié)果示,與正常對照組相比,缺鋅時心肌干細胞的分化能力下降。2.免疫組化及Western Blotting結(jié)果顯示,在E10.5-E19.5發(fā)育階段,SENP5在小鼠胚胎心臟中的表達量逐漸上升,在P1-P7發(fā)育階段,SENP5的表達量逐漸升高,表明在正常胚胎心臟發(fā)育的重要階段,SENP5的表達水平隨著心肌干細胞分化能力的減弱而升高,間接說明了SENP5在胚胎心臟發(fā)育過程中的重要作用。3.Western Blotting結(jié)果證實,相比于正常對照組,心肌細胞內(nèi)SENP5的表達量在缺鋅時明顯增加。CCK8及Western Blotting結(jié)果顯示,與正常對照組相比,缺鋅時,正常心肌干細胞活性下降,分化能力減弱;而SENP5干涉的心肌干細胞在缺鋅狀態(tài)下,其活性度及分化能力與正常對照組略有下降,但高于正常細胞缺鋅組;正常狀態(tài)下,SENP5干涉心肌干細胞的活性和分化能力與正常對照組相比無明顯差別。結(jié)論:缺鋅通過誘導SENP5過表達導致小鼠胚胎心臟發(fā)育異常。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R722.1
【圖文】：

天津醫(yī)科大學碩士學位論文 一、缺鋅對心肌細胞圖 1.免疫熒光檢測心肌干細胞。A、原代細胞圖像，可見紡錘緣向外伸展；B、第二代傳代細胞，可見其間混雜有多角形或第四代傳代細胞，可見細胞形態(tài)逐漸均一化，細胞增殖旺盛胞表達心肌干細胞特異性標記物 Sca1；E、可見大部分細胞表性標記物 c-kit 表達。1.2.2 CCK8 結(jié)果CCK8 結(jié)果顯示，與正常對照組相比，缺鋅時心肌細胞濃度時活性度即下降到 40%以上，見圖 2。P＜0.05，有統(tǒng)計

圖 3.流式檢測心肌細胞凋亡情況。圖 A 為正常心肌細胞處理組；圖 B 為缺鋅心肌細胞處理組。1.2.4 Western Blotting 結(jié)果見圖 4，與正常對照組相比，缺鋅時，心肌干細胞中干性維持指標 Sca1、c-kit蛋白表達量升高，而分化指標 GATA4 蛋白的表達量下降。用 Image J 軟件分析WB 條帶，SPSS 分析所得數(shù)據(jù)，P＜0.05，有統(tǒng)計學意義。

WesternBlotting檢測分化情況

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本文編號：2782234