【摘要】： 目的: 應(yīng)用基因芯片技術(shù)對(duì)ALL患兒的基因表達(dá)譜進(jìn)行初步研究,尋找與ALL早期診斷分型、治療及預(yù)后判斷等具有重要價(jià)值的新基因;并通過(guò)實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法對(duì)差異性基因進(jìn)行驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)基因與疾病的關(guān)系,對(duì)臨床治療起指導(dǎo)意義。 方法: 1.按照CCLG-2008方案,選擇3例初診為標(biāo)危再評(píng)估轉(zhuǎn)入高危(B組)的ALL患兒與3例初診和再評(píng)估均為標(biāo)危(A組)的ALL患兒作為實(shí)驗(yàn)組,及3例ITP患者作為正常對(duì)照組;分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞,提取總RNA;合成cDNA,反轉(zhuǎn)錄cRNA后與Illumina Human-6全基因組表達(dá)譜微珠芯片雜交。洗片后用Illumina BeadSation基因芯片掃描儀進(jìn)行雜交結(jié)果掃描,芯片圖像分析軟件BeadStudio對(duì)芯片數(shù)據(jù)分析,比較B組和A組兩者的差異性基因。 2.選取82例ALL患兒作為實(shí)驗(yàn)組和15例正常患兒作為對(duì)照組,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法對(duì)ABCC4、BCL11A和TOP2A 3個(gè)差異性基因進(jìn)行定量分析,并分析這3個(gè)目的基因在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間差異性表達(dá)的意義及與臨床指標(biāo)的關(guān)系。 結(jié)果: 1.①基因芯片結(jié)果顯示,B組與A組有19個(gè)基因差異性表達(dá),包括ABCC4、BCL11A等14個(gè)上調(diào)基因和TOP2A等5個(gè)下調(diào)基因。 ②研究表明ABCC4和TOP2A為兩個(gè)多藥耐藥基因,BCL11A為一個(gè)與血液系統(tǒng)惡性疾病致病機(jī)制可能有關(guān)的基因,其余基因與血液系統(tǒng)惡性疾病的相關(guān)性尚待研究。 ③差異性基因功能聚類分析發(fā)現(xiàn)其與凋亡、細(xì)胞粘附、細(xì)胞信號(hào)、細(xì)胞分化、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)形成、代謝過(guò)程等相關(guān)。 2.①上調(diào)基因ABCC4和BCL11A經(jīng)實(shí)時(shí)定量RT-PCR驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)高危組的表達(dá)量高于標(biāo)危組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);白血病患者組的表達(dá)量均高于正常對(duì)照組,差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。其余白血病患者組(除高危組和標(biāo)危組)之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 ②下調(diào)基因TOP2A經(jīng)實(shí)時(shí)定量RT-PCR驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)高危組的表達(dá)量低于標(biāo)危組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);白血病患者組的表達(dá)量均低于正常對(duì)照組,差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。其余白血病患者組(除高危組和標(biāo)危組)之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 ③各臨床指標(biāo)間的差異對(duì)BCL11A mRNA表達(dá)量均無(wú)顯著性差異(P值＞0.05)。各臨床指標(biāo)中只有緩解和不緩解因素之間的差異對(duì)ABCC4 mRNA的表達(dá)量有顯著性差異(P值＜0.05);各臨床指標(biāo)中只有緩解和不緩解、潑尼松試驗(yàn)敏感與不敏感兩組因素之間的差異對(duì)TOP2A mRNA的表達(dá)量有顯著性差異(P值均＜0.05)。 結(jié)論: 1.基因芯片技術(shù)能發(fā)現(xiàn)與兒童ALL相關(guān)的差異性基因,這些基因分別參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞信號(hào)、細(xì)胞分化、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)形成及代謝過(guò)程等。 2.定量RT-PCR發(fā)現(xiàn)ABCC4基因?yàn)橐粋�(gè)可用于評(píng)估臨床療效的上調(diào)耐藥基因,BCL11A基因?yàn)橐粋�(gè)與兒童ALL發(fā)病機(jī)制可能相關(guān)的上調(diào)基因,TOP2A基因?yàn)橐粋�(gè)與兒童ALL治療靶點(diǎn)可能相關(guān)的下調(diào)耐藥基因。 3.基因芯片技術(shù)結(jié)合定量RT-PCR對(duì)兒童ALL精確分型、預(yù)后判斷、早期干預(yù)和靶向治療的研究等具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R733.7
【圖文】：

的OD260/OD28。界于 1.7一2.0之間。同時(shí)經(jīng)聚丙烯酞胺凝膠電泳檢測(cè)示:185、285兩，條帶清晰可見，且無(wú)拖尾現(xiàn)象示完整性好，電泳圖見圖1。28芝31855芝3圖1實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組骨髓總RNA電泳圖2二芯片雜交結(jié)果2.1散點(diǎn)圖圖2一4中的每一個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)代表芯片上每一個(gè)基因點(diǎn)的雜交信號(hào)，Y軸與X軸的比值在0.5至2.0之間的數(shù)據(jù)點(diǎn)，基本屬于非差異性表達(dá);Y軸與X軸的比值在0.5至2.0之外的數(shù)據(jù)點(diǎn)，可能存在差異性表達(dá)。

圖4B組(高危組)芯片與A組(標(biāo)危組)芯片信號(hào)值比較的散點(diǎn)圖2.2芯片的掃描圖截圖圖5為1#一7#芯片的掃描圖截圖，其中每一個(gè)亮點(diǎn)代表熒光信號(hào)點(diǎn)，從圖中可以看出熒光信號(hào)點(diǎn)距分布均勻、規(guī)則、亮度適中;無(wú)背景色干擾，示芯片雜交效果良好。1#芯片2#芯片3#芯片

【引證文獻(xiàn)】

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1 許宏;宋文琪;徐樨巍;;兒童急性淋巴細(xì)胞白血病治療中甲氨蝶呤血藥濃度監(jiān)測(cè)分析[J];中國(guó)新藥與臨床雜志;2010年11期

本文編號(hào)：2762071