【摘要】：目的 神經(jīng)干細(xì)胞(Neural stem cells NSCs)的研究是當(dāng)前神經(jīng)科學(xué)研究的熱點(diǎn),隨著神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)成功,探索神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化機(jī)制尤其是其定向分化機(jī)制受到人們的關(guān)注。研究表明,神經(jīng)干細(xì)胞屬于多能干細(xì)胞,在體外它能在含有EGF和/或bFGF的無血清培養(yǎng)基中保持不斷增殖狀態(tài),并一直保持干細(xì)胞的特性,在誘導(dǎo)因素作用下可以分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。 神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育過程中,細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、軸突和樹突的發(fā)出、把大分子物質(zhì)和細(xì)胞器運(yùn)送到突起的分支以及軸突與其他神經(jīng)細(xì)胞建立突觸聯(lián)系等,均與細(xì)胞骨架有關(guān)。微管是神經(jīng)元中重要的細(xì)胞骨架成分之一,不僅維持細(xì)胞的形態(tài),而且參與細(xì)胞的多種功能,包括物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、信息傳遞等等。tau蛋白是一種微管相關(guān)蛋白,是保持微管穩(wěn)定性的重要因素,在結(jié)構(gòu)和功能上與微管密不可分。另外,tau蛋白還參與軸突發(fā)育和維持軸突形態(tài)相關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)過程。 本實(shí)驗(yàn)采用神經(jīng)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定及定向分化、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光標(biāo)記術(shù)、電鏡技術(shù)、圖像分析等方法研究細(xì)胞骨架蛋白-tau蛋白表達(dá)變化,并探討其與神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的神經(jīng)元形態(tài)變化的相關(guān)性,希望對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化機(jī)制及其與細(xì)胞骨架蛋白的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法 1.神經(jīng)干細(xì)胞原代及繼代培養(yǎng):無菌取新生大鼠大腦皮層組織,剪碎,0.25%胰蛋白酶消化,過濾,離心,以1～2×10~5個(gè)/ml密度種植于無血清培
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R722.1
【圖文】：

隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，細(xì)胞突起逐漸伸長(zhǎng)，突起數(shù)量增加。到第6一7天細(xì)胞成熟，胞體呈錐體形或圓形，核大，位于細(xì)胞中間，清晰可見，突起4一6個(gè)，細(xì)長(zhǎng)，伸展良好(圖2)。·15·

2.nestin免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果整個(gè)神經(jīng)球呈棕黃色染色(圖3A)，可見神經(jīng)干細(xì)胞呈圓形或橢圓形，細(xì)胞核較大、未著色，細(xì)胞質(zhì)較少，胞質(zhì)內(nèi)nestin表達(dá)呈強(qiáng)陽性(圖3B)。圖3大腦皮層神經(jīng)千細(xì)胞原代培養(yǎng)形成的神經(jīng)球nestin免疫細(xì)胞化學(xué)染色。x400A:可見整個(gè)神經(jīng)球呈棕黃色染色。B:nesnti在神經(jīng)干細(xì)胞的胞質(zhì)中有表達(dá)，核未著色。3.nestin免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果采用Txeas一erd熒光二抗標(biāo)記nestni，可見整個(gè)神經(jīng)球發(fā)紅色熒光(圖4)。4.NSE免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果光鏡下可見棕黃色NSE反應(yīng)產(chǎn)物均勻分布于胞質(zhì)與突起中，核未著色(圖5)。

大腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞繼代培養(yǎng)形成的神經(jīng)球nestin免疫熒光染色x400可見整個(gè)神經(jīng)球發(fā)紅色熒光

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2 湯其群;張素春;李華偉;鄒云增;;干細(xì)胞定向分化的基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用研究[J];生命科學(xué);2007年04期

3 黃保勝;李立新;謝青松;田和平;胡衛(wèi)星;傅震;;腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞在體內(nèi)外的定向分化[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年37期

4 杜U

本文編號(hào)：2758402