【摘要】： 肥胖是一種常見(jiàn)的能量代謝性疾病,其檢出率逐年增高,已成為全球性的流行性疾病。肥胖與2型糖尿病、高血壓、心腦血管疾病等關(guān)系密切,是2型糖尿病等嚴(yán)重并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的高危因素。由于近年來(lái)肥胖與2型糖尿病發(fā)生的低齡化趨勢(shì)日趨突出,兒童與青少年肥胖與2型糖尿病之間的關(guān)系也開(kāi)始受到兒科學(xué)者的關(guān)注。 脂肪組織在體內(nèi)過(guò)度積聚是肥胖的重要特征,胰島素抵抗、胰島β細(xì)胞功能障礙則是2型糖尿病最主要的兩個(gè)病理生理學(xué)變化。長(zhǎng)期以來(lái),研究者一直試圖闡明肥胖與2型糖尿病之間的關(guān)系,擬以脂肪細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,如:游離脂肪酸(Free Fatty Acids,FFA)、腫瘤壞死因子α(Tumor Necrosis Factorα,TNF-α)、Leptin、Adiponectin等,來(lái)解釋胰島素抵抗、胰島β細(xì)胞功能障礙的發(fā)生發(fā)展,但均未獲滿意結(jié)果。 Resistin,是近年來(lái)通過(guò)差減雜交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的、由脂肪細(xì)胞分泌的胰島素抵抗候選分子。由于:1)飲食性或遺傳性肥胖小鼠血漿Resistin濃度明顯升高,禁食或TZDs類抗糖尿病藥物應(yīng)用后其血漿濃度明顯降低;2)重組Resistin能使正常小鼠出現(xiàn)明顯的胰島素抵抗癥狀,而應(yīng)用Resistin中和抗體則能顯著改善胰島素抵抗的癥狀,因此Resistin被認(rèn)為是聯(lián)系肥胖與2型糖尿病的紐帶。 胰島素抵抗涉及骨骼肌、脂肪、肝臟、胰島等多個(gè)重要靶組織的功能變化。有關(guān)Resistin與骨骼肌、脂肪細(xì)胞胰島素抵抗關(guān)系的研究,近年來(lái)已有較多文獻(xiàn)報(bào)道,但對(duì)肝臟、胰島功能影響的研究卻并不多見(jiàn),具體表現(xiàn)在:1)盡管有報(bào)道指出Resistin可嚴(yán)重影響肝細(xì)胞的糖代謝,但Resistin與肝細(xì)胞胰島素抵抗之間的關(guān)系及其具體機(jī)制卻并不清楚;2)葡萄糖刺激的胰島素分泌(Glucose stimulated insulinsecretion,GSIS)功能低下、胰島β細(xì)胞凋亡是構(gòu)成胰島β細(xì)胞功能障礙的兩個(gè)重要方面,盡管目前研究證實(shí)Resistin可引發(fā)胰島細(xì)胞的GSIS功能障礙,但尚未見(jiàn)有關(guān)Resistin與胰島β細(xì)胞凋亡關(guān)系的研究報(bào)道。 本研究分別以大鼠肝細(xì)胞H4IIE、大鼠胰島β細(xì)胞株RINm5F為研究工具,以初步闡明Resistin與肝臟胰島素抵抗、Resistin與胰島β細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。采用飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠和3T3-L1前體脂肪誘導(dǎo)分化來(lái)初步探討Resistin的分泌。 第一部分Resistin對(duì)H4IIE肝細(xì)胞胰島素敏感性的影響及其機(jī)制 目的:觀察Resistin對(duì)肝臟胰島素敏感性的影響,并初步探討其機(jī)制。方法:1)體外培養(yǎng)大鼠H4IIE肝細(xì)胞株,以重組Resistin蛋白干預(yù)H4IIE肝細(xì)胞,通過(guò)檢測(cè)胰島素刺激的糖原合成,評(píng)估肝細(xì)胞胰島素敏感性的變化;2)以Resistin干預(yù)的H4IIE肝細(xì)胞為研究對(duì)象,采用Western Blot技術(shù)測(cè)定胰島素受體后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中IRS-1、Akt、GSK-3β的總蛋白水平和磷酸化水平,采用RT-PCR、Western Blot技術(shù)檢測(cè)IRS負(fù)性調(diào)節(jié)因子SOCS-3的mRNA水平、蛋白水平,初步分析Resistin影響肝細(xì)胞胰島素敏感性的機(jī)制;3)體外合成SOCS-3特異的ASO(anti-sense oligo),轉(zhuǎn)染H4IIE肝細(xì)胞株以抑制SOCS-3的表達(dá),以重組Resistin蛋白干預(yù)轉(zhuǎn)染有SOCS-3特異ASO的H4IIE肝細(xì)胞,通過(guò)檢測(cè)胰島素刺激的糖原合成,驗(yàn)證SOCS-3在Resistin致肝細(xì)胞胰島素敏感性變化機(jī)制中的作用。結(jié)果:1)Resistin對(duì)胰島素刺激的肝細(xì)胞糖原合成具有抑制作用;2)Resistin抑制肝細(xì)胞中IRS-1、Akt、GSK-3β的活性,對(duì)IRS-Akt-GSK3整條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路具有抑制作用;3)Resistin上調(diào)肝細(xì)胞中IRS負(fù)性調(diào)節(jié)因子SOCS-3的mRNA水平、蛋白水平,SOCS-3特異ASO的應(yīng)用能顯著改善Resistin對(duì)胰島素刺激的肝細(xì)胞糖原合成的抑制作用。結(jié)論:1)Resistin可降低肝細(xì)胞的胰島素敏感性,誘導(dǎo)肝細(xì)胞胰島素抵抗;2)Resistin可能通過(guò)激活SOCS-3的機(jī)制,抑制胰島素受體后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的作用,導(dǎo)致肝細(xì)胞胰島素抵抗。 第二部分Resistin對(duì)大鼠胰島β細(xì)胞功能的影響 目的:探討Resistin對(duì)胰島β細(xì)胞功能的影響,評(píng)價(jià)凋亡抑制蛋白TIMP-1在逆轉(zhuǎn)Resistin致胰島β細(xì)胞凋亡中的作用。方法:體外培養(yǎng)RINm5F大鼠胰島β細(xì)胞株,以重組Resistin蛋白或/和TIMP-1干預(yù)RINm5F胰島β細(xì)胞,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性,以Caspase-3活性、DNALadder等凋亡特異性檢測(cè)指標(biāo)鑒定細(xì)胞凋亡,Western Blot檢測(cè)IκB-α總蛋白和磷酸化水平。結(jié)果:1)大劑量(200ng/ml)Resistin能顯著降低RINm5F胰島β細(xì)胞的細(xì)胞活性,TIMP-1則能逆轉(zhuǎn)由Resistin引起的RINm5F胰島β細(xì)胞活性降低;2)Resistin誘導(dǎo)RINm5F胰島β細(xì)胞凋亡,TIMP-1則對(duì)Resistin誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞凋亡具有拮抗作用;3)Resistin能顯著上調(diào)IκB-αser32位點(diǎn)的磷酸化活性,TIMP-1則能抑制IκB-αser32位點(diǎn)磷酸化活性的上調(diào)。結(jié)論:1)Resistin可影響胰島β細(xì)胞的功能,具有誘導(dǎo)RINm5F胰島β細(xì)胞凋亡的作用;2)Resistin可能通過(guò)上調(diào)IκB-αser32位點(diǎn)磷酸化活性的機(jī)制,誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞凋亡;3)TIMP-1可能夠通過(guò)抑制IκB-αser32位點(diǎn)磷酸化活性的機(jī)制,拮抗Resistin對(duì)RINm5F胰島β細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。 第三部分3T3-L1脂肪細(xì)胞與飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠Resistin的分泌 目的:初步探討影響Resistin分泌的調(diào)節(jié)因素。方法:1)體外培養(yǎng)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞株,誘導(dǎo)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞分化為成熟的脂肪細(xì)胞,于3T3-L1前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程的第0、4、6、8天收集細(xì)胞培養(yǎng)的上清;2)以高能量飼料誘導(dǎo)SD大鼠,制備飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠模型,模型制備成功后采集大鼠血清;3)ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清、大鼠血清中的Resistin水平。結(jié)果:1)隨3T3-L1前體脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化,細(xì)胞培養(yǎng)上清中的Resistin分泌量逐漸增加;2)肥胖大鼠血清中的Resistin水平顯著高于正常對(duì)照大鼠。結(jié)論:1)脂肪細(xì)胞分泌Resistin的水平與脂肪細(xì)胞的成熟度有關(guān);2)Resistin的分泌與機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R723.14;R725.8

【共引文獻(xiàn)】

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6 龍志芳;杜雪立;;胰島素抵抗的細(xì)胞機(jī)理[J];河北師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年06期

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本文編號(hào)：2752839