【摘要】： 目的:新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE)是新生兒常見疾病,可導(dǎo)致新生兒死亡及新生兒期以后永久性神經(jīng)系統(tǒng)損傷,目前尚無有效的治療方法。本研究建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)模型,給予重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor, rhG-CSF)干預(yù),觀察不同時(shí)間點(diǎn)腦組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-2(vascular endothelial growth factor receptor -2, VEGFR2)表達(dá)的變化,從而揭示G-CSF發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制,為臨床上治療新生兒缺氧缺血性腦病開辟新的途徑。 方法:7日齡Wistar大鼠168只,雌雄不限,體重12~18g,隨機(jī)分為三組:假手術(shù)對(duì)照組, HIBD模型組, rhG-CSF治療組,每組各56只。HIBD模型組和rhG-CSF治療組均先制備HIBD模型,三組均根據(jù)處死時(shí)間不同又分為7個(gè)亞組:6h組、12h組、24h組、48h組、72h組、5d組、7d組,每亞組各8只。模型采用阻斷左側(cè)頸總動(dòng)脈后置于含8%O2的低氧環(huán)境中2h制備而成。治療組在HIBD后即刻給予rhG-CSF(60μg /kg)頸部皮下注射,每日一次,連續(xù)五天。各組分別于HIBD后不同時(shí)間點(diǎn)取腦組織,假手術(shù)組也在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取腦組織,肉眼觀察腦組織大體形態(tài)變化,光鏡下觀察各組大鼠左側(cè)腦組織HE染色的病理改變,免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)三組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)左側(cè)腦組織VEGF及VEGFR2的表達(dá)。 結(jié)果:(1)新生大鼠在HIBD后出現(xiàn)不同程度的行為異常。(2)HIBD模型組在HIBD后各時(shí)間點(diǎn)肉眼觀腦組織大體形態(tài)出現(xiàn)不同程度的異常改變,而rhG-CSF治療組各時(shí)間點(diǎn)腦組織大體形態(tài)基本正常。(3)HE染色:假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)腦組織細(xì)胞層次清楚、細(xì)胞形態(tài)正常;HIBD模型組在HIBD后6h、12h出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)細(xì)胞水腫、變性,24h、48h神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的壞死,細(xì)胞核碎裂、溶解,72h細(xì)胞壞死更明顯,至5d、7d時(shí)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少,膠質(zhì)細(xì)胞增生,細(xì)胞排列紊亂。rhG-CSF治療組各時(shí)間點(diǎn)腦組織病理變化較HIBD模型組明顯減輕,細(xì)胞排列尚規(guī)則。(4)VEGF和VEGFR2的表達(dá):VEGF和VEGFR2陽性表達(dá)均呈棕黃色細(xì)顆粒沉積,陽性細(xì)胞可表達(dá)于大腦皮層和海馬,陽性著色主要位于神經(jīng)細(xì)胞胞漿及突起。假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)腦組織均無明顯VEGF及VEGFR2陽性表達(dá);HIBD模型組腦組織VEGF及VEGFR2陽性表達(dá)在HIBD后逐漸增加,均于24-48h達(dá)高峰,以后逐漸下降,不同時(shí)間點(diǎn)比較,VEGF,VEGFR2陽性表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),與假手術(shù)組相比,各時(shí)間點(diǎn)HIBD模型組VEGF,VEGFR2陽性表達(dá)均明顯增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);rhG-CSF治療組各時(shí)間點(diǎn)腦組織均可見明顯的VEGF,VEGFR2陽性表達(dá),與HIBD模型組和假手術(shù)組分別相比,各時(shí)間點(diǎn)治療組VEGF,VEGFR2表達(dá)均明顯增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(5)新生大鼠HIBD后腦組織VEGF和VEGFR2的表達(dá)成直線正相關(guān)關(guān)系(r=0.778, P0.01)。 結(jié)論(:1)新生大鼠HIBD后給予rhG-CSF治療可減輕腦組織的病理改變,提示rhG-CSF對(duì)新生大鼠HIBD具有神經(jīng)保護(hù)作用。(2)新生大鼠HIBD后腦組織VEGF及VEGFR2表達(dá)增加,且二者表達(dá)有顯著的直線正相關(guān)關(guān)系,提示二者在HIBD早期具有一定的保護(hù)作用。(3)rhG-CSF治療后可明顯增加新生大鼠HIBD后腦組織VEGF及VEGFR2的表達(dá),這可能是rhG-CSF發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R722.1
【圖文】：

V}GF免疫組織化學(xué)染色(DAHX400),棕黃色為陽性染色;A,B,G分別代表假手術(shù)組模型組，治療組;1.2，3,4.5分別代表術(shù)后第Bh

VEGFR2免疫組織化學(xué)染色(CAB}400)，棕黃色為f}性染色;A,8,C分別代表假手術(shù)組，模型組，治療組:1，2,3,4,5分別代表術(shù)后第6h

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 閆煥利;HIF-1α及其抑制劑對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷時(shí)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2720011