【摘要】：第一部分體外模型探究AI-2類似物對(duì)混合生物膜形成的影響目的:本課題組根據(jù)前期分子流行病學(xué)基礎(chǔ),選取銅綠假單胞菌野生型PAO1和新生兒口咽部常見細(xì)菌輕型鏈球菌(Streptococcus mitis,S.mitis)構(gòu)建混合生物膜(Biofilm,BF)體外模型,前期已發(fā)現(xiàn)PAO1的BF形成受自誘導(dǎo)因子-2(Autoinducer-2,AI-2)調(diào)控。本研究為明確AI-2類似物是否能夠干預(yù)PAO1S.mitis混合BF形成,旨在為進(jìn)一步探究AI-2干預(yù)混合BF具體作用機(jī)制打下基礎(chǔ)。方法:本項(xiàng)目在前期研究的基礎(chǔ)上,選取銅綠假單胞菌的野生株P(guān)AO1和S.mitis構(gòu)建混合BF體外模型,使用AI-2類似物D-核糖(D-ribose)對(duì)混合BF進(jìn)行干預(yù)。在BF生長(zhǎng)過程中加入D-ribose,通過掃描電鏡、激光共聚焦成像、結(jié)晶紫染色、q-PCR及菌落計(jì)數(shù)等技術(shù)定性、定量對(duì)比分析,以期明確AI-2類似物是否能夠干預(yù)S.mitisPAO1混合BF的形成。結(jié)果:S.mitis能夠產(chǎn)生AI-2,不能形成BF;PAO1不產(chǎn)生AI-2,可形成BF;S.mitis能夠顯著促進(jìn)PAO1的BF形成、上調(diào)PAO1的QS基因,加入AI-2類似物D-ribose后,能夠顯著抑制S.mitisPAO1混合BF形成,其BF內(nèi)活菌數(shù)、致密度、結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、厚度均顯著降低。結(jié)論:1.S.mitis促進(jìn)PAO1的BF形成是通過分泌到胞外的物質(zhì)起到的促進(jìn)作用;2.加入AI-2類似物D-ribose后可抑制S.mitisPAO1混合BF形成。這提示S.mitis產(chǎn)生的AI-2在S.mitisPAO1混合BF形成過程中有重要作用,AI-2可作為干預(yù)S.mitisPAO1混合BF形成的重要靶點(diǎn)。第二部分體內(nèi)模型探究AI-2類似物對(duì)氣管導(dǎo)管混合生物膜感染的影響目的:S.mitis產(chǎn)生的AI-2在S.mitisPAO1混合BF形成過程中有重要作用,可以促進(jìn)PAO1體外BF的作用。使用AI-2類似物D-ribose干預(yù),可以抑制其混合BF形成。故本部分實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步在體內(nèi)研究:在氣管插管BF感染體內(nèi)模型中,S.mitis是否可以增強(qiáng)PAO1致病力?使用AI-2類似物D-ribose干預(yù)是否可以減輕混合BF感染?這是本部分實(shí)驗(yàn)擬闡明的問題。方法:將實(shí)驗(yàn)分為5組,分別為P組(PAO1單菌種BF導(dǎo)管),PS組(PAO1S.mits混合菌種BF導(dǎo)管),PSD組(PAO1S.mits混合BF導(dǎo)管,氣管插管后用D-ribose干預(yù)),S組(S.mits導(dǎo)管),C組(無菌導(dǎo)管組)。分別觀察大鼠一般情況、生存曲線、計(jì)數(shù)肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)、肺部組織HE染色切片、平板計(jì)數(shù)肺組織內(nèi)活菌數(shù),ELISA法檢測(cè)BALF中IL-4、IL-6、IL-10。結(jié)果:在SD大鼠氣管插管模型中,PS組較P組的大鼠活力更低,死亡率更高、肺部病理改變更明顯、肺部細(xì)菌量更大;使用D-ribose霧化干預(yù)后,可以降低PAO1S.mitis混合BF感染的嚴(yán)重程度。C組和S組各項(xiàng)感染指標(biāo)及病變程度均低于另外三組。結(jié)論:S.mitis可能是通過在體內(nèi)與PAO1形成更致密的BF,導(dǎo)致“免疫逃逸”,使得機(jī)體清除細(xì)菌能力降低,體內(nèi)感染程度更重、死亡率更高;加入AI-2類似物D-ribose后可減輕感染程度。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R722.135

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 傅雅琨;余加林;蘆起;艾青;宋思捷;賀雨;張?jiān)戚x;;銅綠假單胞菌與輕型鏈球菌混合生物膜體外模型的建立[J];中國(guó)抗生素雜志;2015年04期

2 宋超;余加林;艾青;劉東;陸韋;蘆起;彭寧寧;;機(jī)械通氣新生兒氣管導(dǎo)管表面生物膜細(xì)菌多樣性研究[J];中華兒科雜志;2013年08期

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本文編號(hào)：2710102