【摘要】： 目的本研究通過檢測小鼠胚胎心臟發(fā)育過程中GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因轉錄水平的動態(tài)表達和這些基因啟動子區(qū)組蛋白H3乙�；降淖兓�,以及組蛋白乙酰化酶亞型p300是否參與調控上述四種心臟發(fā)育相關基因的表達,從表觀遺傳組蛋白乙�；揎椀慕嵌�,初步探討胚胎心臟發(fā)育過程中多基因時序表達的染色質重塑調控模式,為進一步研究先天性心臟疾病的發(fā)生機制奠定理論基礎。 材料與方法選取胎齡10.5天和16.5天昆明小鼠正常胚胎心臟,用基于SYBR GREENⅠ的熒光定量聚合酶鏈反應(quantitative polymerase chain reaction, Q-PCR)方法觀察GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因mRNA的動態(tài)表達;采用染色質免疫沉淀(Chromatin immunoprecitation, ChIP)技術,分別用ChIP級抗乙�；慕M蛋白H3抗體和抗p300抗體免疫沉淀與其所結合的DNA,設計針對心臟發(fā)育相關基因啟動子區(qū)的DNA引物,用Q-PCR的方法擴增抗體所富集的上述基因啟動子DNA,觀察胚胎心臟發(fā)育過程中組蛋白乙酰化水平及組蛋白乙�；竵喰蚿300是否參與調控上述四種心臟特異轉錄因子的表達。 結果 1.心臟發(fā)育相關基因GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因mRNA表達水平在心臟發(fā)育的不同階段(胎齡10.5天和16.5天)呈現(xiàn)動態(tài)變化,其中GATA4、MEF2C基因mRNA相對β-actin的表達水平,E10.5明顯低于E16.5(P0.01),而Nkx2.5、Tbx5 mRNA相對表達水平,E10.5明顯高于E16.5(P0.05)。 2.染色質免疫沉淀(ChIP)分析顯示,胎齡10.5天和16.5天小鼠胚胎心臟組織中,這些基因啟動子區(qū)存在著組蛋白H3的乙�；降牟町�,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。其中Nkx2.5、MEF2C和Tbx5基因啟動子區(qū)組蛋白乙酰化水平變化趨勢與相應基因的mRNA表達水平變化趨勢相一致。同時,染色質免疫共沉淀檢測結果顯示p300與GATA4,Nkx2.5,MEF2C和Tbx5基因啟動子通過某種方式相互結合�？筽300抗體免疫沉淀的上述基因啟動子DNA量在這兩個小鼠心臟發(fā)育的關鍵階段有所不同,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論數(shù)據(jù)表明,心臟特異轉錄因子的動態(tài)表達可能是通過調節(jié)相應基因啟動子區(qū)組蛋白H3的乙酰化來激活基因啟動子實現(xiàn)的,p300可能參與了這一過程。這些結果提示p300是調控心臟發(fā)育的一個重要組成部分,可能為心臟發(fā)育相關基因在小鼠心臟發(fā)生過程中動態(tài)表達的機制之一。
【圖文】：

但心房間有房間孔相通。E16.5 胚胎心臟已具成體心臟外形，心房、心室已被心包所包裹（圖2-1）。圖 2-1 不同發(fā)育時期小鼠胚胎和心臟的形態(tài)特征Fig2.1 Morphology of embryo and heart in different developmental stagesA. E10.5 胚胎；B. E10.5 胚胎心臟；C. E16.5 胚胎；D. E16.5 胚胎心臟A. Embryo at 10.5 days; B. Embryonic heart at 10.5 days; C. Embryo at 16.5 days; D. Embryonicheart at 16.5 days.

胎心臟組織總 RNA 提取取 RNA 瓊脂糖凝膠電泳結果顯示清晰的三條帶，， 28S 條帶亮度約為 18S 條帶的 2 倍，5S 條帶隱約可的，未降解（見圖 2-2）。生物分光光度計測量所提取 RNA 溶液 OD260/OD2 RNA 純度高，無蛋白或氯仿等試劑污染。測得所提～500ng/μl。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R725.4

【引證文獻】

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1 孔娟娟;Islet-1在心臟發(fā)育的乙�；{控網(wǎng)絡中的樞紐作用[D];重慶醫(yī)科大學;2012年

本文編號：2697032