發(fā)布時(shí)間：2020-06-02 04:59

【摘要】：目的 妊娠期為了保證胚胎不受母體排斥,孕婦的免疫活性受到抑制,這使得母親與胎兒的雙向細(xì)胞交換成為微嵌合體形成的最主要機(jī)制。妊娠后母體內(nèi)的微嵌合體引起多種自身免疫病的證據(jù)已經(jīng)較為確鑿,同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)微嵌合體可引發(fā)免疫缺陷患兒的膽道閉鎖樣表現(xiàn),本研究探討了膽道閉鎖發(fā)病機(jī)制與母源性微嵌合體的相關(guān)性。 方法 選取石蠟包埋肝臟組織20例,每例連續(xù)4μm切片6張。在光學(xué)顯微鏡下觀察HE染色切片,選定靶區(qū)域。5張切片間隔0.5min梯度酶消化2-4mins。DAPI浸染充分后,在熒光顯微鏡下觀察每張切片靶區(qū)域的整體消化程度,按理想時(shí)間消化第6張切片并加探針變性雜交,洗滌后觀察熒光信號(hào)并計(jì)數(shù),初步建立石蠟包埋組織熒光原位雜交的理想消化時(shí)間及雜交信號(hào)的判讀方法。在12例膽道閉鎖和8例嬰兒肝炎綜合征、2例膽總管擴(kuò)張癥的男性肝臟組織石蠟切片中,采用熒光原位雜交染色體計(jì)數(shù)探針,熒光標(biāo)記細(xì)胞中的X、Y染色體,計(jì)數(shù)細(xì)胞核中2條X染色體的母體細(xì)胞。 結(jié)果 通過(guò)鏡下所見是判斷石蠟包埋組織FISH理想消化時(shí)間的有效方法:在熒光顯微鏡DAPI通道見藍(lán)色細(xì)胞核完整均一,離散良好,FITC通道見綠色細(xì)胞核邊線完整、輪廓清晰時(shí)達(dá)到FISH理想消化時(shí)間,雜交可獲滿意熒光信號(hào);異質(zhì)性組織切片需依據(jù)靶區(qū)域整體消化程度判斷理想時(shí)間;選擇熒光信號(hào)清晰可辨、DAPI染色均一、邊緣清楚的獨(dú)立細(xì)胞進(jìn)行分析。在12例膽道閉鎖肝臟組織切片中均可發(fā)現(xiàn)母體細(xì)胞,在10例對(duì)照組肝臟組織切片中也可發(fā)現(xiàn)母體細(xì)胞;在肝臟組織切片的30個(gè)可讀視野中,病例組和對(duì)照組母體細(xì)胞的數(shù)量分別是11±2.59和1.8±1.69(P0.01),差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 膽道閉鎖肝臟組織中母源性微嵌合體的數(shù)量顯著高于其他新生兒肝病,母源性微嵌合體可能與膽道閉鎖的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。
【圖文】：

圖 1A-B 觀察單個(gè)細(xì)胞：消化未過(guò)度時(shí)，完整的細(xì)胞核（圖 A 黃→）綠色邊緣線連續(xù)（圖 B 黃→）；開始出現(xiàn)消化過(guò)度，可見黑洞樣殘缺（圖 A 紅→）、綠色邊緣線不連續(xù)（圖 B 紅→）；隨著消化過(guò)度加重，黑洞樣殘缺加大（圖A 白→）、綠色邊緣線不連續(xù)加重（圖 B 白→）。

圖 3 消化過(guò)度的切片，前者（圖 ACE）過(guò)度程度較后者（圖 BDF）為輕。整體可見視野模糊，，細(xì)胞核輪廓不清，核間質(zhì)渣樣，過(guò)度較重整個(gè)視野呈現(xiàn)渣樣（圖 B），殘缺細(xì)胞核的比例增多（圖 C，D）。未過(guò)度的細(xì)胞核完整清晰（紅→）（圖 C，D）, 綠色邊線完整（紅→）（圖 E，F(xiàn)）；消化過(guò)度的細(xì)胞核出現(xiàn)不同程度的黑洞樣殘缺（綠→）
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R726.5

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