發(fā)布時(shí)間：2020-05-24 19:38

【摘要】：血管瘤由大量新生毛細(xì)血管和增殖的內(nèi)皮細(xì)胞組成，是“血管形成依賴”性疾病。血管形成的核心是內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和凋亡。如何能通過干預(yù)血管形成中的關(guān)鍵基因，以控制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和凋亡，是促進(jìn)或抑制血管形成的關(guān)鍵。survivin是新近發(fā)現(xiàn)的，迄今為止最強(qiáng)的凋亡抑制因子，有研究表明及本課題組前期發(fā)現(xiàn)survivin、VEGF和caspase-3在血管瘤的增生期和消退期表達(dá)有差異，并相關(guān)。本研究采用survivin及其基因沉默技術(shù)，體外培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞種植裸鼠皮下建立裸鼠人血管瘤動(dòng)物模型，并用脂質(zhì)體包裹Survivin ASODN干預(yù)，探討survivin對血管瘤血管形成的影響，從而闡明survivin及其基因封閉技術(shù)對血管瘤血管形成的作用機(jī)制，為尋找促進(jìn)和抑制血管形成的新靶點(diǎn)提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第一部分嬰幼兒增生期血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒及生狀況的觀察 目的：嬰幼兒增生期血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)、純化及鑒定。方法：采用組織化法對12例新鮮嬰幼兒血管瘤行細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)成功后，在相差顯微鏡刮除非內(nèi)皮細(xì)胞。待內(nèi)皮細(xì)胞鋪滿瓶底，進(jìn)行傳代，同時(shí)運(yùn)用反復(fù)貼壁法及酶消化法進(jìn)行數(shù)次純化，取4代內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行免疫組化法對內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行鑒定并檢測內(nèi)皮細(xì)胞純度。對所培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并繪制細(xì)胞生長曲線圖。結(jié)果：12例標(biāo)本均成功培養(yǎng)出血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞，培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)為較規(guī)則的圓形、橢圓形或多角形，核居中，部分可見核分裂及雙核，細(xì)胞境界清楚，細(xì)胞融合后內(nèi)皮細(xì)胞特有“鋪路石”特征。并通過免疫組化CD31、CD34和Ⅷ因子相關(guān)抗原鑒定證實(shí)為內(nèi)皮細(xì)胞。檢測純度為CD34(+)數(shù)為67.88%±4.25%，所培養(yǎng)的細(xì)胞具有“管腔形成”現(xiàn)象。結(jié)論：該實(shí)驗(yàn)可以滿足本研究相關(guān)需要。 目的：研究Survivin ASODN對人增生期血管瘤裸鼠種植瘤生長的影響。方法：將體外培養(yǎng)的細(xì)胞濃度調(diào)整為1.0×108個(gè)/ml，，取0.2mL注入裸鼠皮下，建立人增生期血管瘤裸鼠種植瘤動(dòng)物模型。瘤體直徑大于13澥彼婊治

本文編號：2678891