【摘要】： 前言 新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic—ischemic encephalopathy，HIE)是由于圍生期缺氧和腦血流減少或暫停而引起的新生兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變。它是導(dǎo)致兒童神經(jīng)系統(tǒng)殘疾的重要因素之一，目前發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，缺乏特異性治療手段。凋亡作為神經(jīng)元的主要死亡方式之一在HIE的遲發(fā)性損傷中占有重要地位，因此抗凋亡治療可能成為臨床治療HIE的重要手段。胰島素(insulin，IN)對成年大鼠局灶和全腦缺血性腦損傷均具有保護(hù)作用，最近又發(fā)現(xiàn)它能通過磷脂酰肌醇-3(PI-3)途徑減輕培養(yǎng)神經(jīng)元凋亡。我們給HIE新生大鼠腦室內(nèi)注入胰島素，觀察其對神經(jīng)元凋亡的影響并探討其可能的抗凋亡機(jī)制。 方法 第一部分：胰島素對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)元凋亡影響的病理觀察 參照Rice法建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型。14只HIE大鼠隨機(jī)分為胰島素干預(yù)組和對照組。模型制成后2小時干預(yù)組側(cè)腦室注入小劑量胰島素(1.0IU／kg)，對照組腦室內(nèi)注入等體積磷酸鹽緩沖液(PBS)。缺氧缺血后24小 — —％————M—— 時，HE染色和透射電鏡觀察各大腦皮層和海馬部位神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況。側(cè)腦室 注射后卯分鐘斷尾取血 100 VI左右，用微量血糖測定儀測血糖。 第二部分：不同劑量胰島素對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)元凋亡的影響 參照Roe法建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型。32只HIE大鼠隨機(jī)分為 小劑量胰島素組、中劑量胰島素組、大劑量胰島素組和對照組。模型制成后2 小時僅腦室內(nèi)分另注入刁劑量門刀IU／k）、中齊量（25fo71’g）、大齊量（5刀n川唱） 三種劑量的胰島素和等體積PBS。缺氧缺血后24小時處死動物，取損傷側(cè)腦組 織制成石蠟塊，采用TUN’EL法檢測凋亡，，比較各組皮質(zhì)和海馬部位神經(jīng)細(xì)胞凋 亡情況，深入探討胰島素在HIE中的抗凋亡作用。側(cè)腦室注射后90分鐘斷尾取 血 100 pl左右，用微量血糖測定儀測血糖。 第三部分：不同劑量胰島素對Hill大鼠腦組織Caspase—3的影響 參照uce法建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型。24只HIE大鼠隨機(jī)分為 小劑量胰島素組、中劑量胰島素組、大劑量胰島素組和對照組。模型制成后2 小時僅腦室內(nèi)分另注入刁劑量門刀IU／k）、中齊量（2．seq）、大齊量（5刀n川唱） 三種劑量的胰島素和等體積PBS。缺氧缺血后24小時處死動物，取損傷側(cè)新鮮 腦組織，采用 Western一blot法檢測各組腦組織 Caspase—3 P20亞單位表達(dá)情況， 研究胰島素可能的抗凋亡機(jī)制。 結(jié) 果 1．腦室內(nèi)注入PBS的新生大鼠腦組織切片HE染色光鏡下在皮質(zhì)、海馬、紋狀 體部位可見較多典型凋亡細(xì)胞和凋亡小體，而腦室內(nèi)注入小劑量胰島素的大鼠腦 組織凋亡細(xì)胞和凋亡小體稀疏分布。 2．TUN’EL染色并計數(shù)凋亡細(xì)胞結(jié)果：皮質(zhì)部位：小劑量胰島素組凋亡細(xì)胞（56， 25）顯著少于對照組（12．50，74）（P＝＝0刀of）；中劑量胰島素組凋亡細(xì)胞（39， 48）顯著少于對照組u二0刀of）；大劑量胰島素組凋亡細(xì)胞（274，259）顯著 多于對照組（P—0刀09）；中劑量胰島素組凋亡細(xì)胞顯著少于小劑量胰島素組u ＝＝0007）。海馬部位：小劑量胰島素組凋亡細(xì)胞（l，13）顯著少于對照組（30， 13）（尸＝口刀02）；中劑量胰島素組凋亡細(xì)胞（13，呂）顯著少于對照組（P＝＝0．001）； 3 — ———————————M 大劑量胰島素組凋亡細(xì)胞k．50，15）顯著多于對照組（尸一0刀of入 中劑量胰 島素組凋亡細(xì)胞顯著少于小劑量胰島素組（尸＝0刀08人 3．血糖檢測結(jié)果：小劑量胰島素組血糖水平（5．54士0．3 Inunol兒）與對照組（5．56 土0．27。of／L）無顯著差別（P＝0．934）；中劑量胰島素組血糖水平（4．80土 0．62nunol／L）顯著低于對照組（P＝0刀02）；大劑量胰島素組血糖水平（190土 0．聽no幾）顯著低于對照組（P＝0刀co）。 4．C8spssc一3檢狽結(jié)果：各組 C8spssC 一3 p20亞單位＊值比較：大齊量胰島 素組o值（7．680，11．6100）與對照組（8．4750，7．7700）相比，無顯著差別（P ＝＝l刀）；中劑量胰島素 ID值門刀1，2．5775）顯著低于對照組（P＝＝0刀06）；小 劑量胰島素組o值（2275，3．2475）顯著低于對照組（P＝＝0刀16）；中劑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R722.1

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本文編號：2674753