【摘要】： 前言 早產(chǎn)兒發(fā)生新生兒呼吸窘迫綜合征(neonatal respiratory distress syndrome，NRDS)將嚴(yán)重威脅新生兒生命，其主要原因是新生兒肺發(fā)育不成熟，Ⅱ型肺泡上皮細胞不能合成足夠的肺表面活性物質(zhì)(pulmonary surfactant，PS)。地塞米松(dexamethasone，DEX)被廣泛應(yīng)用于臨床，能夠有效促進Ⅱ型肺泡上皮細胞合成、分泌肺表面活性物質(zhì)，誘導(dǎo)胎肺成熟，但其孕周依賴性以及抑制胎兒生長和加重母胎感染等副作用已越來越多地引起關(guān)注。 鹽酸氨溴索(ambroxol，ABX)作為一種快速促排痰藥，除了能促進呼吸道粘稠分泌物排出外，近年來大量研究表明還可促進表面活性物質(zhì)的合成和分泌，增加卵磷脂／鞘磷脂比值，也有明顯的促胎肺成熟作用，且與地塞米松相比無明顯不良反應(yīng)。 本實驗擬聯(lián)合應(yīng)用鹽酸氨溴索與地塞米松作用體外培養(yǎng)的人胎肺Ⅱ型上皮細胞，并與單一應(yīng)用鹽酸氨溴索或地塞米松組相比較，確定鹽酸氨溴索與地塞米松在體外促胎肺成熟方面是否具有協(xié)同作用。 材料與方法 1、材料來源 選擇2006年4月至2006年12月期間，于中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院產(chǎn)科病房行腔內(nèi)引產(chǎn)的死亡胎兒12例�；颊呒凹覍偻馑劳鎏菏w由醫(yī)院處理。孕28～34周，胎兒性別不限，取胎兒雙側(cè)肺組織為實驗對象。 2、主要試劑 Percoll、15％FCS-RPMI1640、地塞米松、鹽酸氨溴索等。 3、實驗方法 收集的胎肺組織經(jīng)解剖分離和0.25％胰蛋白酶—EDTA消化后，采用密度梯度離心法對Ⅱ型肺泡上皮細胞進行分離和純化，在15％FCS-RPMI1640培養(yǎng)液、37℃的條件下，培養(yǎng)至細胞長成單層。倒置顯微鏡下觀察細胞的生長狀態(tài)，并在透射電子顯微鏡下鑒定Ⅱ型肺泡上皮細胞。對培養(yǎng)成功的Ⅱ型肺泡上皮細胞分別施加ABX、DEX和ABX+DEX，并繼續(xù)培養(yǎng)48小時，用Bartlett法和改良Lowry法分別測定用藥后的Ⅱ型肺泡上皮細胞中飽和磷脂和總蛋白的含量，以飽和磷脂／總蛋白比值作為數(shù)據(jù)結(jié)果。 所得到的數(shù)據(jù)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±S)表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理與分析，t檢驗比較總體均數(shù)的差異，檢驗水準(zhǔn)取α=0.05。 實驗結(jié)果 1、Ⅱ型肺泡上皮細胞培養(yǎng)結(jié)果 倒置顯微鏡下Ⅱ型肺泡上皮細胞貼壁生長，貼壁時間為16.24±0.37h。呈現(xiàn)上皮細胞的典型形態(tài)，多邊形或梭形，細胞核明顯，胞漿較豐富。在培養(yǎng)35.38±0.41h之后，細胞相互連接成單層。 2、Ⅱ型肺泡上皮細胞的電鏡鑒定結(jié)果 透射電鏡下Ⅱ型肺泡上皮細胞表面有短小的微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)含有電子密度較大的分泌顆粒，形狀和大小不一，呈板層狀結(jié)構(gòu)，即典型的板層小體。培養(yǎng)的細胞中Ⅱ型肺泡上皮細胞百分比為72.365±0.354％。 3、ABX、DEX及ABX+DEX對Ⅱ型肺泡上皮細胞中飽和磷脂／總蛋白含量比值的影響 (1)未用藥組飽和磷脂／總蛋白含量比值為1.99±0.375μmol／mg，ABX、DEX及ABX+DEX三組飽和磷脂／總蛋白比值分別為2.78±0.34gmol／mg、2.95±0.49μmol／mg和3.46±0.46μmol／mg。 (2)ABX、DEX及ABX+DEX三組分別與未用藥組相比，P值分別為0.0079、0.0096及0.014，均有顯著性差異；ABX+DEX組與ABX組相比，P值為0.0069，，有顯著性差異；ABX+DEX組與DEX組相比，P值為0.015，有顯著性差異；單一應(yīng)用ABX組與DEX組相比，P值為0.320，無顯著性差異。 4、ABX、DEX及ABX+DEX對不同孕周胎兒肺組織Ⅱ型肺泡上皮細胞飽和磷脂／總蛋白含量比值的影響 (1)未用藥組中孕28~(+0)～30~(+6)周和孕31~(+0)～33~(+6)周中飽和磷脂／總蛋白含量比值分別為1.78±0.31μmol／mg和2.20±0.32μmol／mg；ABX組中分別為2.74±0.32μmol／mg和2.82±0.39μmol／mg；DEX組中分別為2.69±0.41μmol／mg和3.01±0.48μmol／mg；ABX+DEX組中分別為3.32±0.36μmol／mg和3.6±0.53μmol／mg。 (2)將未用藥組中孕28~(+0)～30~(+6)周和孕31~(+0)～33~(+6)周標(biāo)本中飽和磷脂／總蛋白含量比值均數(shù)進行比較，P值為0.045，有顯著性差異；ABX組中的均數(shù)進行比較，P值為0.483，無顯著性差異；DEX組中的均數(shù)進行比較，P值為0044，有顯著性差異；ABX+DEX組中的均數(shù)進行比較，P值為0.312，無顯著性差異。 結(jié)論 1、ABX和DEX兩種藥物均能增加未成熟胎肺組織Ⅱ型肺泡上皮細胞飽和磷脂的含量；聯(lián)合應(yīng)用的效果要優(yōu)于單一應(yīng)用；單一應(yīng)用ABX或DEX對胎肺組織Ⅱ型肺泡上皮細胞飽和磷脂的含量的影響無顯著差異。 2、孕周較大的胎肺組織中Ⅱ型肺泡上皮細胞飽和磷脂的含量高于孕周較小者。ABX和ABX+DEX均對促進小孕周的胎肺組織Ⅱ型肺泡上皮細胞飽和磷脂的含量增加的作用更為明顯。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R722.6

【共引文獻】

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本文編號：2659694