【摘要】：第一部分1例IKBKG基因突變患者臨床及免疫學特征研究目的:通過分析1例高通量測序報告未發(fā)現(xiàn)致病基因突變但臨床表現(xiàn)高度懷疑原發(fā)性免疫缺陷病(PID)患者的測序序列,并進行免疫學表型分析及功能驗證,探討當高通量測序無法進行基因確診時如何開拓新的診斷方法避免PID患者漏診。方法:以1例高通量測序報告未發(fā)現(xiàn)致病基因突變但臨床表現(xiàn)高度懷疑原發(fā)性免疫缺陷病(PID)患者為研究對象。收集分析患者臨床資料、免疫相關基因高通量測序結果;流式細胞術檢測淋巴細胞亞群進行免疫學初篩、IKBKG基因一代測序、蛋白印跡法檢測NEMO蛋白表達及淋巴細胞增殖功能檢測。結果:一代測序基因分析示IKBKG基因第9號外顯子拼接位點發(fā)生g.21819 GA雜合突變,其母為該突變位點攜帶者。患者NEMO蛋白表達量明顯降低,B細胞增殖功能明顯受損。結論:在國內首次確診1例IKBKG基因突變致無外胚層發(fā)育不良的免疫缺陷病(NEMO-ID)患者,對于不具備NEMO典型臨床表型,即外胚層發(fā)育不良,但臨床上發(fā)生反復感染的患者,仍應考慮本病可能。假基因可能干擾高通量測序結果,仔細分析序列原始數據對最終獲得確診結果至關重要。第二部分1例STAT5B基因突變患者臨床及免疫學特征研究目的:探討國內首例STAT5B基因雜合突變患者的臨床、免疫學特點,明確STAT5B基因雜合突變具有致病性,為STAT5B基因遺傳方式提供新的證據。方法:以1例反復腹瀉、生長發(fā)育受限伴反復肺炎的STAT5B基因突變患者為研究對象,分析患者臨床特征;采用流式細胞術分析外周血T細胞亞型比例及Treg比例;Sanger測序法驗證患者基因突變;磷酸化蛋白質印跡法評估患者STAT5B磷酸化功能。結果:患者主要臨床表現(xiàn)為反復腹瀉、反復肺部感染、低丙種球蛋白血癥和淋巴細胞減少。高通量測序檢測發(fā)現(xiàn)STAT5B基因11號外顯子雜合突變。流式細胞數淋巴細胞亞型評估示患外周血患者外周血Th2細胞比例顯著升高,Treg比例降低。T細胞增殖功能降低。IL2刺激后STAT5B蛋白磷酸化水平降低。本例患者臨床、測序結果及免疫學表現(xiàn)均符合STAT5B基因突變患者表現(xiàn)。結論:本文首次報道1例STAT5B基因雜合突變患者的臨床及免疫學特點,提示顯性抑制或其他多種因素可能參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展,并為該病的診療提供經驗。
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重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文17圖1-1 IKBKG基因突變位點分析及一代測序Figure 1-1 The analysis and Sanger sequencing of IKBKG mutation. a) Patterns of cDNAand protein of IKBKGin WT and mutant, b) DNAand cDNA mutation verified by Sangersequencing.2.3 IKBKG基因突變致病性分析對患者 cDNA 序列改變進行致病性預測，Provean 分值小于-2.5 認為該位點突變有害；MutationTaster 預測結果為致病，并且 prob 值為 1，可信度高。表1-2 IKBKG基因突變致病性預測Table 1-2 Pathogenicity prediction of IKBKG mutationVariantProveanScoreProveanPredictionMutationTasterPredictionMutationTasterProbG1056del -16.000 Deleterious Disease causing 1b

利用蛋白印跡法檢測患者及其父母 NEMO 蛋白表達。結果顯示，，與患者父母相比，患者 PBMC 中 NEMO 蛋白表達水平明顯降低(圖 1-2)。圖1-2 NEMO蛋白表達Figure 1-2 The expression of NEMO in patients2.5免疫學表型分析患者精細免疫分型結果見表 1-3。表1-3 IKBKG基因突變患者淋巴細胞亞群分析Table 1-3 The lymphocyte subsets of IKBKG-mutational patient相對數(%) 相對數參考范圍[14]絕對數(個/μl) 絕對數參考范圍[14]T細胞72.3 55.1-78.3 2429.3 1215
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R725.9

【參考文獻】

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1 周麗娜;丁媛;李黎;唐文靜;趙曉東;;全血淋巴細胞流式細胞術精細免疫分型方法的建立[J];免疫學雜志;2015年06期

本文編號：2658439