【摘要】：目的比較物理訓練和自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)對新生期大鼠反復長程驚厥所致神經行為損傷的干預效應及分子機制。 方法出生6d(Postnatal day 6,用P6表示,下同)的健康Sprague-Dawley(SD)大鼠75只,隨機分為5組,對照組(control,CON組,n=15)、對照水療組(control and hydrotherapy,HCON組,n=15)、驚厥組(Recurrent neonatal seizures,RS組,n=15)、驚厥水療組(Recurrent neonatal seizures and hydrotherapy,HRS組,n=15),3-MA組(3-MA組,n=15)。RS組、HRS組及3-MA組在P6吸入三氟乙醚誘導驚厥發(fā)作,持續(xù)30分鐘,連續(xù)6天,CON及HCON組同樣操作但不吸入三氟乙醚,其中3-MA組在每日開始驚厥前15min腹腔注射3-MA。于末次驚厥后第2天(即P12)對HCON及HRS組采用物理訓練(泡泡浴水療)進行干預,連續(xù)28天。檢測五組大鼠生長發(fā)育(體重、門齒萌出、豎耳、睜眼),P12、P17進行游泳行為評分,P17、P26、P33、P40進行神經行為學評分(前肢懸吊實驗、負向趨地反應實驗、曠場實驗)。P42每組各取6只采用Timm染色法觀測各組大鼠海馬區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽。余大鼠(n=9/每組)于P43～P49行Morris水迷宮測試大鼠學習記憶功能。于P50取海馬及大腦皮質組織,采用免疫印跡技術(Western blot)檢測可塑性相關基因-1(plasticity related gene 1,PRG-1)、抗凋亡基因Bcl-2及自噬標記蛋白LC3、Beclin1的表達。 結果1、生長發(fā)育RS組各日齡體重較CON組明顯降低(P㩳0.01);HRS組(P26、P33、P40)體重較RS組顯著升高(P㩳0.05),3-MA組(P12、P14、P18)體重較RS組顯著升高(P㩳0.05)。各組生理發(fā)育現(xiàn)象(門齒萌出、豎耳、睜眼)出現(xiàn)時間無顯著性差異。 2、神經行為學(1)游泳評分:RS組游泳實驗評分(P12、P17)明顯低于CON組(P㩳0.05);HRS組游泳實驗評分(P12、P17)與RS組比較無明顯差異(P㧐0.05),3-MA組游泳實驗評分(P12、P17)與RS組相比明顯提高(P㩳0.05)。(2)前肢懸吊實驗顯示:各組大鼠不同日齡前肢懸吊時間比較無顯著性差異(P㧐0.05)。(3)負向趨地反應實驗顯示:RS組不同日齡負向趨地反應時間較CON組明顯延長(P㩳0.05);HRS組不同日齡負向趨地反應時間與RS組比較無顯著性差異(P㧐0.05),而3-MA組不同日齡負向趨地反應時間較RS組明顯降低(P㩳0.05)。(4)曠場實驗顯示:RS組(P17、P26、P33)曠場得分較CON組明顯降低(P㩳0.05);HRS組曠場得分(P26、P33、P40)較RS組明顯升高(P㩳0.05),同時3-MA組曠場得分(P17、P26)較RS組明顯升高(P㩳0.05)。 3、學習記憶能力Morris水迷宮實驗顯示:(1)逃避潛伏期:五組大鼠逃避潛伏期于測試第1天至第5天逐漸縮短,RS組第4、5天逃避潛伏期較CON組明顯延長(P㩳0.05);HRS組第4天逃避潛伏期較RS組明顯縮短(P㩳0.05),同時3-MA組第4、5天逃避潛伏期亦明顯短于RS組(P㩳0.05)。(2)搜尋策略:RS組第4、5天成績較CON組、HRS組及3-MA組差,具有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05)。(3)空間探索測試:各組間穿越平臺次數(shù)無明顯差異(P㧐0.05)。 4、Neo-Timm染色:RS組大鼠海馬齒狀回內分子層及CA3區(qū)始層可見明顯異常增生苔蘚纖維;HRS組CA3區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽程度較RS組明顯降低(P㩳0.05),而3-MA組CA3區(qū)及齒狀回苔蘚纖維發(fā)芽程度均較RS組降低(P㩳0.05);CON組及HCON組未見明顯發(fā)芽。 5、免疫印跡:(1)RS組海馬及大腦皮質PRG-1表達水平較CON組明顯升高(P㩳0.05);HRS組PRG-1表達水平與RS組相比無顯著性差異(P㧐0.05),但是3-MA組海馬及大腦皮質PRG-1的表達較RS組明顯降低(P㩳0.05)。(2)RS組海馬及大腦皮質Bcl-2表達水平較CON組明顯降低(P㩳0.05);HRS組海馬及大腦皮質Bcl-2表達水平較RS組顯著升高(P㩳0.05),3-MA組海馬Bcl-2表達水平較RS組顯著升高(P㩳0.05)。(3)各組大鼠海馬及大腦皮質LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的值及Beclin1的表達無顯著性差異(P㧐0.05)。 結論1、新生期三氟乙醚誘導大鼠反復長程驚厥導致生長發(fā)育、神經行為及學習能力損傷,同時造成海馬苔蘚纖維異常發(fā)芽以及大腦皮質與海馬PRG-1表達升高、Bcl-2表達降低。 2、驚厥后早期采用物理訓練(泡泡浴水療)進行干預,能促進大鼠體重增長,改善驚厥所致情感認知及學習能力損害,但對神經反應性損傷干預效果不明顯。泡泡浴水療能減輕驚厥后海馬苔蘚纖維異常發(fā)芽程度,顯著上調海馬與大腦皮質Bcl-2的表達,但對海馬及大腦皮質PRG-1的表達無明顯干預作用。 3、驚厥發(fā)作前應用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤能明顯改善驚厥所致體重降低、神經行為異常及情感認知和學習能力損害。顯著抑制驚厥后海馬苔蘚纖維異常增生發(fā)芽,明顯下調海馬及大腦皮質PRG-1的表達、上調海馬Bcl-2的表達。 4、本研究表明,物理訓練(泡泡浴水療)及自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤對新生期驚厥性腦損傷均有干預作用,而3-甲基腺嘌呤的干預效應更加顯著。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R722.1

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本文編號：2642172