【摘要】：目的：本研究通過(guò)建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic braindamage， HIBD）模型，觀察血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)在新生大鼠HIBD模型中穿透血腦屏障(Blood brain barrier，BBB)的時(shí)間，探討HIBD時(shí)BBB通透性改變的“時(shí)間窗”，為VEGF在HIBD中應(yīng)用提供最佳給藥方法和治療時(shí)間的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：將VEGF經(jīng)二種途徑(骨髓腔、鼻腔)在不同時(shí)間點(diǎn)同時(shí)給予7日齡SD新生大鼠HIBD模型，同時(shí)設(shè)假手術(shù)組、HIBD組、HIBD骨髓腔注射VEGF組及HIBD鼻腔滴VEGF組，每組各48只。四組根據(jù)處死時(shí)間不同又分為6個(gè)亞組：2h組、6h組、12h組、24h組、48h組、72h組，每亞組各8只。HIBD模型采用阻斷左側(cè)頸總動(dòng)脈后置于含8%O292%N2混合氣體的低氧環(huán)境中2h制備而成。HIBD骨髓腔注射VEGF組及HIBD鼻腔滴VEGF組均于處死前半小時(shí)給VEGF。在設(shè)定時(shí)間點(diǎn)觀察各組大鼠運(yùn)動(dòng)行為學(xué)變化、腦組織外觀、腦組織病理改變及ELISA法檢測(cè)腦組織勻漿中VEGF水平。 結(jié)果：（1）7日齡SD大鼠在HIBD后出現(xiàn)不同程度的行為異常。（2）假手術(shù)組腦組織在各時(shí)間點(diǎn)外觀正常，兩側(cè)對(duì)稱(chēng)，無(wú)水腫、軟化及液化壞死灶。HIBD模型組在12h左側(cè)腦組織出現(xiàn)輕微水腫、體積增大；在24h左側(cè)腦組織水腫明顯，局部可呈蒼白色；在48h、72h左側(cè)腦組織水腫程度加重，局部可見(jiàn)軟化、液化壞死灶。（3）HE染色：假手術(shù)組腦組織在各時(shí)間點(diǎn)結(jié)構(gòu)層次清楚、細(xì)胞形態(tài)正常。HIBD組在12h左側(cè)腦組織可有細(xì)胞水腫；在24h、48h可見(jiàn)細(xì)胞不同程度的水腫、變性壞死、溶解、核固縮及核碎裂；72h細(xì)胞壞死更明顯。（4）四組新生大鼠在2h、6h、12h、24h、48h、72h ELISA法檢測(cè)10%腦組織勻漿VEGF水平分別為，假手術(shù)組：119.7±12.6ng/L、117.6±12.4ng/L、120.9±12.1ng/L、124.1±12.2ng/L、121.3±12.2ng/L、119.3±10.9ng/L，HIBD組：118.9±11.3ng/L、129.7±12.5ng/L、164.1±14.6ng/L、208.5±15.8ng/L、177.6±13.6ng/L、159.3±16.1ng/L，骨髓注射組：121.0±10.2ng/L、132.0±9.9ng/L、213.1±23.4ng/L、523.2±26.6ng/L、463.3±39.4ng/L、371.1±16.7ng/L，鼻腔組：224.5±19.1ng/L、231.9±20.0ng/L、237.6±21.4ng/L、231.3±19.3ng/L、218.6±29.6ng/L、227.9±22.1ng/L。觀察到：假手術(shù)組在各時(shí)間點(diǎn)腦組織勻漿中VEGF水平?jīng)]有明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），提示假手術(shù)組在各時(shí)間點(diǎn)腦組織勻漿中VEGF水平是相對(duì)穩(wěn)定的。HIBD組在各時(shí)間點(diǎn)腦組織勻漿中VEGF水平有明顯不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）；2h與6h之間VEGF水平無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；隨著HIBD后時(shí)間的延長(zhǎng)，在12h、24h、48h、72h VEGF水平均較2h、6h升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pa0.01），尤其在24h腦組織勻漿中VEGF水平較12h、48h、72h均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pa0.01），72h較48h明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），表明HIBD組腦組織勻漿中VEGF水平在2h至6h沒(méi)有升高，在6h后至12h開(kāi)始升高，于24h達(dá)高峰，至48h開(kāi)始下降，于72h明顯下降。本實(shí)驗(yàn)對(duì)HIBD組腦組織免疫組織化學(xué)染色在12h染色開(kāi)始明顯，24h染色達(dá)到高峰，，至48h染色開(kāi)始下降，于72h染色明顯下降，這與ELISA法檢測(cè)腦組織勻漿中VEGF水平變化相一致。骨髓注射組在不同時(shí)間點(diǎn)間腦組織勻漿中VEGF水平有明顯不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），而2h與6h之間VEGF水平無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），但在12h、24h、48h、72h VEGF水平均較2h、6h升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pa0.01），尤其在24h腦組織勻漿中VEGF水平達(dá)到高峰較12h、48h、72h均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pa0.01），72h較48h明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），表明骨髓注射組腦組織勻漿中VEGF水平在12h開(kāi)始升高，于24h達(dá)高峰，至48h開(kāi)始下降，于72h明顯下降，且在此時(shí)間段VEGF水平明顯高于HIBD組，這提示HIBD12h后BBB通透性明顯增加，外周的VEGF可以跨過(guò)BBB，在24h通透性最高，于48h通透性開(kāi)始降低，至72h通透性明顯降低。鼻腔組在不同時(shí)間點(diǎn)間腦組織勻漿中VEGF水平?jīng)]有明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），表明鼻腔組在不同時(shí)間點(diǎn)間腦組織勻漿中VEGF水平是相對(duì)穩(wěn)定的。 在相同時(shí)間點(diǎn)不同組別間的比較：在2h、6h時(shí)間點(diǎn)均可觀察到假手術(shù)組、HIBD組、骨髓注射組各組間腦組織勻漿中VEGF水平均沒(méi)有明顯變化，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pa0.05）；鼻腔組較假手術(shù)組、HIBD組、骨髓注射組腦組織勻漿中VEGF水平均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pa0.01）。這提示在HIBD后2h、6h，HIBD組腦組織缺氧缺血沒(méi)有影響腦組織VEGF水平，骨髓途徑給予VEGF均不能進(jìn)入腦組織，但鼻腔途徑給予VEGF均可以相對(duì)穩(wěn)定的水平進(jìn)入腦組織。在12h、24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)均可觀察到HIBD組、骨髓注射組、鼻腔組腦組織勻漿中VEGF水平均較假手術(shù)組明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pa0.01）；骨髓注射組、鼻腔組腦組織勻漿中VEGF水平均較HIBD組明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pa0.01）。在24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)均可觀察到骨髓注射組腦組織勻漿中VEGF水平均較鼻腔組明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pa0.01）。這些提示腦組織缺氧缺血12h、24h、48h、72h可以使腦組織VEGF表達(dá)水平升高；在HIBD后12h、24h、48h、72h骨髓途徑給予VEGF均可不同程度地進(jìn)入腦組織，尤其在HIBD后24h、48h為最明顯，但于72h開(kāi)始呈下降趨勢(shì)，即說(shuō)明HIBD后12h BBB通透性明顯增加，在24h通透性最高，于48h通透性開(kāi)始下降，至72h通透性明顯降低。鼻腔組在不同時(shí)間點(diǎn)間腦組織勻漿中VEGF水平是相對(duì)穩(wěn)定的，且在各時(shí)間點(diǎn)VEGF水平都明顯高于HIBD組，這說(shuō)明在HIBD后各時(shí)間點(diǎn)經(jīng)鼻腔途徑給予VEGF均可以相對(duì)穩(wěn)定的水平進(jìn)入腦組織，并說(shuō)明本組腦組織中VEGF水平與HIBD無(wú)關(guān)，即與BBB通透性改變無(wú)關(guān)，提示鼻腔途徑給VEGF不是經(jīng)過(guò)BBB進(jìn)入腦組織，而可能是經(jīng)其它途徑，如嗅覺(jué)通路和三叉神經(jīng)通路進(jìn)入腦組織。 結(jié)論：7日齡SD大鼠HIBD后，其腦組織VEGF表達(dá)在12h開(kāi)始升高，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，于24h達(dá)高峰，至48h開(kāi)始下降，于72h明顯下降；在HIBD后2h、6h、12h、24h、48h、72h鼻腔途徑給予VEGF均可以相對(duì)穩(wěn)定的水平進(jìn)入腦組織，即提示鼻腔途徑給VEGF不是經(jīng)過(guò)BBB進(jìn)入腦組織，而可能是經(jīng)其它途徑；骨髓途徑給予VEGF在HIBD后2h、6h均不能進(jìn)入腦組織，而在12h、24h、48h、72h均可不同程度地進(jìn)入腦組織，尤其在HIBD后24h、48h為最明顯，但于72h開(kāi)始呈下降趨勢(shì)，即說(shuō)明HIBD后12h BBB通透性明顯增加，在24h通透性最高，于48h通透性開(kāi)始下降，至72h通透性明顯降低，所以HIBD后12h至72h是BBB開(kāi)放的“時(shí)間窗”。
【圖文】：

成功的重要行為學(xué)改變之一。實(shí)驗(yàn)前各組新生大鼠行為能力正常，HIBD 模型的新生大鼠出現(xiàn)不同程度的行為異常改變，表現(xiàn)為置于低氧艙后 10~15min 出躁動(dòng)不安，翻滾，活動(dòng)增多，20min 后出現(xiàn)頭部和軀體的持續(xù)顫抖，不能翻身間斷左旋，甚至抽搐等；40min 后逐漸由興奮轉(zhuǎn)為抑制，表現(xiàn)為左側(cè)臥位，四伸直，間斷性肢體顫抖，間斷性尾部翹起左旋；1h 后以抑制癥狀為主，表現(xiàn)間斷肢體肌肉顫抖甚至意識(shí)障礙如嗜睡。大鼠 HIBD 后有反應(yīng)差，吃奶減少動(dòng)作不協(xié)調(diào)等表現(xiàn)。其中夾尾尖叫者(72 只)37.5%，翻身能力差者(183 只)95.3%平衡能力異常者(178 只)92.7%，肢體抖動(dòng)者(192 只)100%，驚厥抽搐者(只)16.1%，意識(shí)障礙者(19 只)9.9%。本組資料 HIBD 術(shù)后 24 小時(shí)所有動(dòng)物走不穩(wěn)，右側(cè)肢體無(wú)力，向左側(cè)旋轉(zhuǎn)，身體晃動(dòng)不穩(wěn)，肢體抖動(dòng)。HIBD 后所有物表現(xiàn)為右側(cè)前肢及后肢均外展，提尾懸空時(shí)右前肢不能伸直或稍貼胸壁，彎向左上，行走時(shí)向左轉(zhuǎn)圈及左側(cè)傾倒，不能直線(xiàn)前行，肌張力降低。假手組無(wú)上述行為異常表現(xiàn)。（見(jiàn)圖 1~2）

鼠HIBD后1h左側(cè)傾倒右
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉麗旭,楊于嘉;高壓氧治療新生大鼠缺氧缺血性腦損傷量效及時(shí)效關(guān)系[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2001年04期

2 王社軍,杜長(zhǎng)生,唐紅,李鐘銘,馮興軍,張欣健,李永哲;大鼠腦缺血再灌注后血腦屏障通透性的改變[J];武警醫(yī)學(xué);2005年10期

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本文編號(hào)：2584615