【摘要】：目的：檢測兒童血液系統(tǒng)疾病患者端粒酶催化亞基（humantelomerase reverse transcriptase, hTERT）基因的突變與表達，并分析不同血液系統(tǒng)疾病與hTERT突變與表達的情況，hTERT在經臨床治療干預的兒童急性白血病患中的表達，提高對端粒酶相關疾病的認識，及加深對端粒酶與兒童血液系統(tǒng)疾病的關系的認識。 方法： 1.據(jù)文獻報道成人急性髓系白血病患者hTERT基因15號外顯子為高發(fā)突變區(qū)，本研究也選擇該區(qū)在兒童血液病患者的突變狀況：收集71例重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院血液內科住院的血液系統(tǒng)疾病確診患者，其中有47例急性白血病，23例非白血病患者（含2例再生障礙性貧血患者）；再提取患者外周血標本中全基因組DNA，PCR擴增hTERT基因的15號外顯子；利用Sanger法對PCR產物進行測序，分析測序結果。 2.檢測接受化療的兒童急性白血病患者hTERT基因表達水平收集60例我院血液內科住院的血液系統(tǒng)疾病確診患者，其中37例急性白血病患者接受臨床規(guī)范治療，23例非白血病患者，提取外周血標本中總RNA，逆轉錄為cDNA,熒光定量RT-PCR檢測hTERT基因表達水平，以GAPDH基因表達為對照。以非參數(shù)Mann-Whitney和Kruskall-Wallis檢驗分別對兩組和多組間表達水平的比較，置信水平α=0.05，用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析。 結果： 1. hTERT基因15號外顯子突變分析：2例再生障礙性貧血患者均在5號染色體1254714堿基發(fā)生C＞A雜合突變（該位點距離15號外顯子轉錄起始位點上游91bp）。而47例兒童急性白血病患者和其余21例非白血病組未發(fā)現(xiàn)該基因區(qū)域的突變。 2. hTERT基因表達分析：經臨床治療干預并達緩解的B-ALL、PreB-ALL與T-ALL組間hETRT表達水平有統(tǒng)計學差異，三組間hTERT表達水平高低為PreB-ALL＜B-ALL＜T-ALL。但白血病組與非白血病組間、AML與ALL組間、ALL中高危、中危及標危組間、初診外周血WBC≥100×109/L,50×109/L-100×109/L與＜50×109/L組間、異常核型與非異常核型組間、年齡≥10歲的ALL患者與1-10歲ALL患者組間hTERT的表達水平差異無統(tǒng)計學意義。 結論： 1.兒童急性白血病與成人AML的hTERT基因突變位點不同，成人AML患者hTERT基因高突變區(qū)在兒童急性白血病中突變率低；2例再生障礙性貧血患者有相同的hTRET基因雜合突變，該基因突變位點與端粒相關的再生障礙性貧血相關，并值得進一步研究。 2.經臨床治療干預的并達緩解的兒童急性白血病患者的hTERT基因表達水平與非白血病患者無顯著差異，僅B-ALL、PreB-ALL與T-ALL組間仍有統(tǒng)計學差異，其他臨床危險程度分級間hTERT基因表達水平無差異，hTERT表達水平可作為兒童急性白血病緩解的分子參考指標之一。
【圖文】：

XR 系統(tǒng)成像：在紫外光下進行成像，，檢測 PCR 擴增產物位于無雜帶。序大基因公司測序，測序引物為 PCR 擴增引物，測序方法為 Sa ABI 公司的 3730XL 測序儀。析hromas 軟件進行峰圖分析，然后通過 NCBI 和 UCSC s 數(shù)據(jù)庫進行序列比對。液病患者臨床及實驗室特點。

兒童急性白血病患者中，8例AML患者及38例ALL患者均無突變，成突變的 5 號染色體的 1254833 位點也未發(fā)現(xiàn)突變。非白血病的血液病患者中，2 例再生障礙性貧血患者 5 號染色體 1254基發(fā)生雜合突變，C 突變?yōu)?A（圖 2.2），該位點距離 15 號外顯子轉錄起游 91bp。2 例再生障礙性貧血患者均為男性重型再障患兒；年齡分別為和 9 歲 9 月；以嚴重的貧血和出血為主要臨床表現(xiàn)。a) Mutation locates at the 53rdsite. c) Mutation locates at the 60thsite.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R725.5

【共引文獻】

相關期刊論文 前2條

1 王紅旭;鄒琳;;端粒-端粒酶在兒童急性白血病診治中的研究進展[J];兒科藥學雜志;2012年11期

2 蔡博;高春記;;腫瘤相關抗原疫苗在急性髓細胞性白血病治療中的研究進展[J];軍醫(yī)進修學院學報;2009年06期

相關碩士學位論文 前1條

1 蔡博;異基因造血干細胞移植前后外周血NK細胞1-磷酸鞘氨醇受體5表達的變化與急性移植物抗宿主病發(fā)生的關系[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2010年

本文編號：2553159