【摘要】：目的:探討濾泡輔助性T細(xì)胞(T follicular helper cell,Tfh)在兒童特發(fā)性腎病綜合征(idiopathic nephritic syndrom,INS)低Ig G血癥中的可能作用和機(jī)制。方法:激素敏感型INS患兒40例,其中INS初發(fā)組和INS緩解組各20例,同年齡正常對(duì)照組20例。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中循環(huán)Tfh細(xì)胞、CD19+CD27-Ig D+B細(xì)胞(初始B細(xì)胞)、CD19+CD27+Ig D+B細(xì)胞(轉(zhuǎn)化前記憶B細(xì)胞)、CD19+CD27+Ig DB細(xì)胞(轉(zhuǎn)化后記憶B細(xì)胞)、CD19+CD27+Ig D-CD38high B細(xì)胞(漿細(xì)胞)比例;Real-Time PCR檢測(cè)CD4+T細(xì)胞PI3K、AKT、m TOR、m TORC1、m TORC1、BCL-6、Blimp-1及IL-21基因表達(dá);ELISA檢測(cè)血漿IL-2、IL-21及IL-6濃度,免疫熒光吸附試驗(yàn)檢測(cè)血漿丙二醛(malondialdehyde,MDA)濃度。INS初發(fā)患兒T細(xì)胞分別在正常兒童血漿和INS患兒血漿培養(yǎng)后應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Tfh細(xì)胞比例、PCR檢測(cè)m TOR、m TORC1的表達(dá)。結(jié)果:與正常對(duì)照組相比,(1)INS初發(fā)組患兒外周血Tfh比例明顯降低(P0.05),緩解組Tfh比例無明顯差異(P0.05);(2)初發(fā)組患兒轉(zhuǎn)化后記憶B細(xì)胞和漿細(xì)胞比例明顯降低(P0.05),緩解組無明顯差異(P0.05)(3)初發(fā)組患兒Tfh細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子BCL-6表達(dá)明顯降低(P0.05),Blimp-1、PI3K、AKT、m TOR、m TORC1表達(dá)明顯增高(P0.05),緩解組無明顯差異(P0.05);m TORC2表達(dá)無明顯差異;INS初發(fā)組患兒CD4+T細(xì)胞IL-21m RNA表達(dá)明顯降低(P0.05);(4)INS初發(fā)組患兒血漿IL-2明顯降低(P0.05),IL-21、IL-6濃度呈下降趨勢(shì),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著差異(P0.05);(5)INS初發(fā)組患兒MDA濃度顯著增高(P0.05);(6)INS患兒CD4+T細(xì)胞加正常血清培養(yǎng)后INS患兒m TOR基因表達(dá)明顯降低(P0.05),Tfh細(xì)胞比例明顯增加(P0.05)。結(jié)論:(1)Tfh比例下降影響B(tài)細(xì)胞分化成熟,可能是導(dǎo)致INS患兒低IgG血癥的原因之一;(2)IL-2、IL-21等細(xì)胞因子微環(huán)境紊亂導(dǎo)致的BCL-6/Blimp-1表達(dá)失衡,高脂血癥和IL-2通過PI3K-AKT途徑引起m TOR(m TORC1)過表達(dá)等多種因素,可能是抑制INS患兒Tfh細(xì)胞分化的重要原因。
[Abstract]:Objective: to investigate the possible role and mechanism of follicular helper T cell (T follicular helper cell,Tfh in hypoglycemia of (idiopathic nephritic syndrom,INS in children with idiopathic nephrotic syndrome. Methods: 40 children with steroid-sensitive INS were enrolled in this study, including 20 cases in the first onset group of INS and 20 cases in the remission group of INS, and 20 cases in the normal control group at the same age. Circulating Tfh cells, CD19 CD27-Ig D B cells (initial B cells), CD19 CD27 Ig D B cells (pre-transformed memory B cells) and CD19 CD27 Ig DB cells (post-transformed memory B cells) were detected by flow cytometry. Ratio of CD19 CD27 Ig D-CD38high B cells (plasma cells); PI3K,AKT,m TOR,m TORC1,BCL-6,Blimp-1 and IL-21 gene expression in CD4 T cells were detected by Real-Time PCR. ELISA was used to detect plasma IL-2,IL-21 and IL-6, and immunofluorescence adsorption assay was used to detect plasma malondialdehyde (malondialdehyde,). The concentration of MDA. The percentage of Tfh cells was detected by flow cytometry and the expression of m TOR,m TORC1 was detected by PCR after the T cells were cultured in normal children's plasma and INS children's plasma respectively. Results: compared with normal control group, (1) the proportion of peripheral blood Tfh in INS group was significantly lower than that in control group (P0.05), but there was no significant difference in Tfh ratio in remission group (P0.05). (2) the ratio of memory B cells and plasma cells decreased significantly in the primary group (P0.05), but there was no significant difference in the remission group (P0.05). (3) the expression of transcription factor BCL-6 of Tfh cells in the primary group was significantly decreased (P0.05). The expression of Blimp-1,PI3K,AKT,m TOR,m TORC1 was significantly increased (P0.05), but there was no significant difference in remission group (P0.05). There was no significant difference in the expression of m TORC2, and the expression of IL-21m RNA in CD4 T cells was significantly decreased in the primary INS group (P0.05). (4) the plasma IL-2 decreased significantly (P0.05) and the concentration of IL-21,IL-6 decreased (P0.05) in the primary INS group. There was no significant difference between the two groups (P0.05); (5). The MDA concentration in the primary INS group was significantly higher (P0.05). (6) the expression of m TOR gene in INS children was significantly decreased after CD4 T cells were cultured with normal serum (P0.05) and the proportion of), Tfh cells was significantly increased (P0.05). Conclusion: (1) the decrease of Tfh ratio affects the differentiation and maturation of B cells, which may be one of the causes of hypoIgG in children with INS. (2) the imbalance of BCL-6/Blimp-1 expression caused by microenvironmental disturbance of cytokines such as IL-2,IL-21, hyperlipidemia and overexpression of m TOR (m TORC1 induced by IL-2 via PI3K-AKT pathway, and so on. It may be an important reason to inhibit the differentiation of Tfh cells in children with INS.
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R726.9

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本文編號(hào)：2410186