【摘要】：目的 支氣管哮喘是兒童時(shí)期的常見呼吸道疾病。支氣管哮喘會(huì)引起反復(fù)發(fā)作的喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀,給病患帶來(lái)了極大的痛苦和沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。IL-6是參與哮喘發(fā)生的一種炎癥因子,在哮喘氣道炎癥中具有重要作用。近年研究證明：凝血酶是參與呼吸道炎癥的介質(zhì),可以介導(dǎo)前炎性轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化。本實(shí)驗(yàn)外源性給予凝血酶及凝血酶抑制劑,建立標(biāo)準(zhǔn)大鼠哮喘動(dòng)物模型。通過(guò)①ELISA法檢測(cè)各組大鼠肺泡灌洗液(BALF)中凝血酶活性；②HE染色觀察各組大鼠肺組織中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況；③免疫組化法檢測(cè)各組大鼠肺組織中白介素(IL-6)蛋白表達(dá)水平；④western blot法檢測(cè)各組大鼠肺組織中核因子-κB(Nuclear factor kappa B, NF-κB)蛋白表達(dá)情況。探討凝血酶對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥的影響,從而為支氣管哮喘氣道炎癥發(fā)生機(jī)制的探討提供新的思路。 方法 將24只成年雌性大鼠隨機(jī)分為4組,正常對(duì)照組(N組)、哮喘模型組(A組)凝血酶組(T組)、凝血酶抑制劑組(H組),每組6只。以卵蛋白(OVA)致敏并吸入激發(fā)制備大鼠哮喘模型。實(shí)驗(yàn)組(A組、T組、H組)大鼠分別于第1、8天每只大腿內(nèi)側(cè)皮下注射OVA懸液1ml (OVA10mg+氫氧化鋁200mg+0.9%生理鹽水至1ml),同時(shí)腹腔內(nèi)注射滅活百日咳桿菌懸液1ml (約6×109個(gè)菌株)作為佐劑。第15天始使用402超聲霧化器(上海四菱醫(yī)療器械廠)向置于密閉有機(jī)玻璃容器內(nèi)的大鼠霧化吸入2%卵蛋白(現(xiàn)配)每次30分鐘,每周3次,連續(xù)激發(fā)6周。每次霧化前30min,T組每只大鼠給予霧化吸入凝血酶72u、H組每只大鼠給予霧化吸入凝血酶抑制劑-水蛭素500u/kg。正常對(duì)照組所有干預(yù)均使用生理鹽水代替OVA。造模成功后,取大鼠肺組織和BALF。采用ELISA法測(cè)定BALF中凝血酶活性, HE染色觀察肺組織炎癥浸潤(rùn)情況,免疫組化方法檢測(cè)肺組織中IL-6表達(dá),western blot法測(cè)定各組大鼠肺組織中NF-κB蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果 1.一般情況觀察 實(shí)驗(yàn)組(A組、T組、H組)大鼠表現(xiàn)為毛發(fā)失去光澤,在造模激發(fā)過(guò)程中出現(xiàn)不同程度的咳嗽、打噴嚏、呼吸急促、腹肌緊張、四肢癱軟、行動(dòng)遲緩、反應(yīng)遲鈍等癥狀。正常對(duì)照組則無(wú)上述癥狀。 2.凝血酶活性 哮喘組BALF中凝血酶活性高于正常對(duì)照組(P0.05)；凝血酶組BALF中凝血酶活性高于哮喘組(P0.05)；凝血酶抑制劑組凝血酶活性低于凝血酶組(P0.05)。 3.觀察肺組織炎癥浸潤(rùn)情況 HE染色顯示正常對(duì)照組氣道無(wú)炎癥浸潤(rùn),哮喘組氣道有炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn),凝血酶組有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),較哮喘組明顯,凝血酶抑制劑組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)較凝血酶組減輕。 4.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織中IL-6的表達(dá) 正常對(duì)照組免疫組化顯示肺組織IL-6基本無(wú)表達(dá)；哮喘組IL-6表達(dá)較正常對(duì)照組增多；凝血酶組IL-6表達(dá)最多,較哮喘組高；凝血酶抑制劑組IL-6表達(dá)較凝血酶組明顯減少。 5.肺組織中NF-κB蛋白表達(dá)情況采用western blot方法對(duì)NF-κB蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示正常對(duì)照組NF-κB微弱表達(dá),哮喘組NF-κB表達(dá)較正常對(duì)照組升高,凝血酶組NF-κB表達(dá)水平最高,凝血酶抑制劑組表達(dá)水平較凝血酶組低。 結(jié)論 1.大鼠支氣管哮喘模型建立成功。 2.哮喘大鼠氣道凝血酶活性升高,凝血酶可促進(jìn)哮喘大鼠氣道炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。 3.凝血酶可促進(jìn)哮喘大鼠氣道NF-κB的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)炎性因子工L-6的表達(dá),從而參與哮喘炎癥的發(fā)生。
[Abstract]:objective
Bronchial asthma is a common respiratory disease in childhood. Asthma can cause recurrent symptoms such as wheezing, air urgency, chest tightness, or coughing, which bring great pain and heavy financial burden to the patients..IL-6 is an inflammatory factor involved in asthma and plays an important role in the airway inflammation of asthma. Thrombin, a medium for respiratory inflammation, can mediate the activation of NF- kappa B of the proinflammatory transcription factor. In this experiment, thrombin and thrombin inhibitors were given to establish a standard rat model of asthma. The activity of thrombin in alveolar lavage fluid (BALF) was detected by ELISA. (2) the lung group of rats in each group was observed by HE staining. The expression of interleukin (IL-6) protein in lung tissues of each group was detected by immunohistochemistry; (4) the expression of nuclear factor kappa B (Nuclear factor kappa B, NF- kappa B) in lung tissues of rats in each group was detected by immunohistochemical method. The effect of thrombin on airway inflammation in asthmatic rats was investigated. To explore the pathogenesis of airway inflammation in asthma provides new ideas.
Method
24 adult female rats were randomly divided into 4 groups, the normal control group (group N), the asthma model group (group A) thrombin group (group T), the thrombin inhibitor group (group H), 6 rats in each group. The rat model of asthma was prepared with ovalbumin (OVA) sensitization and inhalation excitation. The experimental group (group A, T group, H group) was subcutaneously injected with OVA suspension 1ml on the inside of each thigh on day 1,8, respectively. (OVA10mg+ aluminum hydroxide 200mg+0.9% to 1ml), and intraperitoneal injection of pertussis pertussis suspension 1ml (about 6 x 109 strains) as adjuvant. The 402 ultrasonic nebulizer (Shanghai four medical device factory) was used to atomization of rats in a closed plexiglass container for 30 minutes each time and 3 per week for fifteenth days. Every rat in group T was given inhalation of thrombin 72u for 6 weeks. Each rats in group T were given inhalation of thrombin 72u before each atomization. Each rat in group H was given inhalation of thrombin inhibitor - hirudin 500u/kg. in the normal control group. All the rats were treated with normal saline instead of OVA.. The rat lung tissue and BALF. were taken to determine the thrombin activity in BALF by ELISA method. The inflammatory infiltration of lung tissue was observed by HE staining. The expression of IL-6 in lung tissue was detected by immunohistochemical method, and the expression of NF- kappa B protein in lung tissues of each group was measured by Western blot method.
Result
1. general situation observation
The rats in the experimental group (group A, group T, group H) showed the loss of luster in the rat hair. In the process of stimulating the model, there were different degrees of cough, sneezing, shortness of breath, abdominal muscle tension, limp limbs, slow action, slow reaction and so on. The normal control group had no symptoms.
2. thrombin activity
The thrombin activity in the BALF of the asthmatic group was higher than that in the normal control group (P0.05), and the thrombin activity in the thrombin group was higher than that in the asthma group (P0.05), and the thrombin activity in the thrombin inhibitor group was lower than that of the thrombin group (P0.05).
3. observation of inflammatory infiltration of lung tissue
HE staining showed no inflammatory infiltration in the airway of the normal control group. There were inflammatory cells in the airway of the asthmatic group, and a large number of inflammatory cells were infiltrated in the thrombin group. The inflammatory cell infiltration in the thrombin inhibitor group was less obvious than that in the asthma group.
4. Detection of IL-6 expression in lung tissue by immunohistochemistry
In the normal control group, the expression of IL-6 in the lung tissue was not expressed in the normal control group; the expression of IL-6 in the asthma group was more than that in the normal control group; the expression of IL-6 in the thrombin group was most, higher than that in the asthma group, and the expression of IL-6 in the thrombin inhibitor group was significantly lower than that in the thrombin group.
The expression of NF- kappa B protein in 5. lung tissues was detected by Western blot method. The results showed that the expression of NF- kappa B in the normal control group was weak, the expression of NF- kappa B in the asthmatic group was higher than that in the normal control group. The expression level of NF- kappa B in the thrombin group was the highest, and the expression level of the thrombin inhibitor group was lower than that of the thrombin group.
conclusion
The 1. rat model of bronchial asthma was established successfully.
2. The airway thrombin activity in asthmatic rats increased, and thrombin could promote the airway inflammatory cell infiltration in asthmatic rats.
3. Thrombin can promote the expression of NF-kappa B in the airway of asthmatic rats, and then promote the expression of inflammatory factor L-6, thus participate in the occurrence of asthmatic inflammation.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R725.6

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5 徐慧;戴元榮;曾濰賢;;PTEN在支氣管哮喘大鼠氣道炎癥中的作用[J];中華哮喘雜志(電子版);2010年01期

6 蔣劍平;熊耀康;;金耳多糖對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥反應(yīng)的影響[J];中草藥;2009年10期

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4 黃蕓;歐陽(yáng)海峰;王文雅;吳碩;吳昌歸;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞參與哮喘小鼠氣道炎癥及其機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆全國(guó)哮喘學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)哮喘聯(lián)盟第三次大會(huì)論文匯編[C];2010年

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2 北京朝陽(yáng)醫(yī)院北京呼吸疾病研究所副主任醫(yī)師 逯勇;哮喘治療毋須談激素色變[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

3 本報(bào)記者 李穎;治療哮喘不要談激素色變[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

4 ;道聽途說(shuō)令我病情加重[N];健康報(bào);2009年

5 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽(yáng)醫(yī)院京西院區(qū)副主任醫(yī)師 醫(yī)學(xué)博士 林俊嶺;用完哮喘噴劑別忘漱漱口[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

6 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院呼吸科主任 胡成平　謝明霞 整理;聯(lián)合用藥治療哮喘要重視提高依從性[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

7 姚向陽(yáng);金發(fā)光：科學(xué)診治哮喘[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

8 主任醫(yī)師 胡成平;難治哮喘可聯(lián)合用藥[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2009年

9 肖長(zhǎng)莘　本報(bào)記者 楊u&;哮喘非“小喘” 急性發(fā)作可要命[N];成都日?qǐng)?bào);2008年

10 北京朝陽(yáng)醫(yī)院呼吸科 副主任醫(yī)師 逯勇　通訊員 吳玉華;正確對(duì)待激素治療哮喘[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

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3 李毅;吸煙對(duì)樹突狀細(xì)胞在哮喘免疫平衡中作用的影響及機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

4 李建保;中藥穴位敷貼治療支氣管哮喘的實(shí)驗(yàn)及臨床研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2010年

5 閆海波;CXCR3基因在哮喘小鼠氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥中的作用[D];延邊大學(xué);2012年

6 丁兆齡;砭石療法文獻(xiàn)研究及其在哮喘治療中的臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2011年

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4 郝俊青;HDM通過(guò)肺泡巨噬細(xì)胞TLR4誘導(dǎo)哮喘小鼠氣道炎癥的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2010年

5 劉丹;甲磺司特對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥及IL-5的影響[D];南華大學(xué);2010年

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10 余麗春;哮喘患兒血清VEGF和TGF-β_1水平的動(dòng)態(tài)變化及臨床意義[D];山東大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：2174882