本文選題：先天性心臟病　切入點：CITED2　出處：《新鄉(xiāng)醫(yī)學院》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：背景先天性心臟病(congenital heart disease, CHD)是胎兒時期心臟血管發(fā)育異常所致的心血管畸形,也是小兒最常見的心臟病。其臨床后果極為嚴重,通常導致流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)、新生兒死亡,以及兒童、青少年和成人殘疾。CHD發(fā)生率在城市地區(qū)一直高居首位,在農(nóng)村地區(qū)僅次于神經(jīng)管畸形,位于第二位,給家庭和社會造成嚴重的經(jīng)濟和精神等方面的負擔。雖然目前CHD遺傳基礎的研究已取得了很多進展,但是由于CHD種類繁多、病因復雜,大多數(shù)CHD的病因尚未清楚,急需人們多層次、多水平、深入全面綜合地探討。 目的分析CHD患兒的CITED2基因編碼鏈突變的情況；檢測CHD患兒22q11微缺失的發(fā)病及分布情況,探討多重連接依賴式探針擴增技術(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)用于診斷CHD22q11微缺失的可行性。 方法以2010～2011年河南省胸科醫(yī)院及鄭州市兒童醫(yī)院收集的300例散發(fā)型CHD患兒為研究對象。300例患兒均為漢族,且均經(jīng)臨床、心臟彩超、手術確診。50例正常男童及50例正常女童作為本研究的正常對照,均無CHD病史及家族史。使用非試劑盒方法提取外周血基因組DNA,對CITED2基因進行聚合酶鏈反應并測序,測序結果與GeneBank數(shù)據(jù)庫公布的CITED2基因序列(NM006079.3)進行比較以識別基因突變。用Clustal X軟件分析突變氨基酸的保守性。 采用MLPA P250試劑盒(共48對探針)對120例CHD患兒進行22q11微缺失檢測。所有反應在PCR儀上進行：DNA樣品與48對探針雜交16h,然后用連接酶連接半探針,最后用統(tǒng)一的SALSA PCR引物對連接的半探針進行PCR擴增。使用毛細管電泳儀(CEQ8800)和與之配套的軟件(CEQ system)來分離和分析PCR產(chǎn)物。將CEQ system分析后的數(shù)據(jù)轉換為Excel格式,最后使用MRC-Holland公司提供的分析軟件Coffalyser v9.4來分析數(shù)據(jù)。10例正常兒童作為分析對照。 結果 1.300例CHD患兒中,有5例(1.67%)檢測出CITED2基因突變。其余295例(98.33%)沒有檢測出突變。新發(fā)現(xiàn)了兩種新的突變(c.481-483delAGC, c.574-579delAGCGGC)。 2.120例CHD患兒中,檢出22q11微缺失10例(8.33%),重復1例(0.83%),其余109例(90.84%)沒有檢測到缺失或重復。10例缺失中,3Mb缺失9例,2Mb缺失1例,包括室間隔缺損3例,法洛四聯(lián)癥5例,肺動脈狹窄1例,右室雙出口1例。1例重復CHD類型為肺動脈狹窄。 結論 1.在CHD患兒CITED2基因中發(fā)現(xiàn)兩種突變,兩種突變均為國際首次報道。多物種序列對比分析表明CITED2第161、192和193位氨基酸呈現(xiàn)一定的保守性,提示這兩種新突變可能通過改變SGJ區(qū)蛋白構象導致人類CHD的發(fā)生。 2.CHD患兒中存在一定比例的22q11微缺失。MLPA是一種快速、簡便且準確的檢測22q11微缺失的方法
[Abstract]:Background congenital heart disease (CHD) is a cardiovascular malformation caused by abnormal cardiac vascular development during fetal period, and is also the most common heart disease in children. Its clinical consequences are extremely serious, usually leading to miscarriage, stillbirth, stillbirth and neonatal death. And the incidence of disability in children, adolescents and adults has always been the highest in urban areas, second only to neural tube abnormalities in rural areas, Although much progress has been made in the study of the genetic basis of CHD, because of the wide variety of CHD and the complicated etiology, the etiology of most CHD remains unclear. People in urgent need of multi-level, multi-level, in-depth comprehensive discussion. Objective to analyze the mutation of CITED2 gene coding chain in children with CHD, to detect the occurrence and distribution of 22q11 microdeletion in children with CHD, and to explore the feasibility of multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) in the diagnosis of CHD22q11 microdeletion. Methods from 2010 to 2011, 300 cases of sporadic CHD were collected from Henan chest Hospital and Zhengzhou Children's Hospital. In this study, 50 normal boys and 50 normal girls had no history of CHD or family history. The genomic DNA of peripheral blood was extracted by non-kit method, and the CITED2 gene was sequenced by polymerase chain reaction (PCR). The results of sequencing were compared with the sequence of CITED2 gene (NM006079.3) published in GeneBank database to identify the mutation. The conserved amino acids of the mutation were analyzed by Clustal X software. MLPA P250 kit (48 pairs of probes) was used to detect 22q11 microdeletion in 120 cases of CHD. Finally, the connected semi-probe was amplified by PCR with a uniform SALSA PCR primer. The PCR product was separated and analyzed by capillary electrophoresis apparatus CEQ8800) and the accompanying software CEQ system. The data analyzed by CEQ system was converted into Excel format. Finally, data were analyzed using Coffalyser v9.4, an analytical software provided by MRC-Holland, to analyze 10 normal children as an analysis control. Results. Of the 1.300 cases of CHD, 5 cases (1.67) were detected CITED2 gene mutation, and the other 295 cases (98.33) were not detected. Two new mutations, c.481-483delAGC, c.574-579delCGCG, were found. 2. Of the 120 cases of CHD, 10 cases with 22q11 microdeletion were found to be 8. 33%, 1 case was repeated with 0. 83% of them, the remaining 10 cases were not detected deletion or repetition. Of 10 cases, 9 cases were missing or duplicated, 9 cases were missing 2 Mb, including 3 cases of ventricular septal defect and 5 cases of tetralogy of Fallot. The results showed that there were 3 cases of ventricular septal defect, 5 cases of tetralogy of Fallot, and 5 cases of Tetralogy of Fallot. Pulmonary artery stenosis in 1 case, double outlet of right ventricle in 1 case, repeat CHD type in 1 case. Conclusion. 1. Two mutations were found in the CITED2 gene of children with CHD, both of which were reported for the first time in the world. The comparative analysis of multiple species sequences showed that the amino acids at position 161,192 and 193 of CITED2 were conserved to some extent. These two new mutations may lead to the occurrence of human CHD by changing the conformation of SGJ domain proteins. 2.There is a certain proportion of 22q11 microdeletions in children with CHD. MLPA is a rapid, simple and accurate method for detecting 22q11 microdeletions.
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R725.4

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本文編號：1640340