本文關(guān)鍵詞： 22q11微缺失 先天性心臟病 多重PCR FISH STR　出處：《南昌大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 采用熒光原位雜交(FISH)及多重PCR技術(shù)對先天性心臟病患兒進行22q11微缺失檢測，探討22q11微缺失與先天性心臟病的發(fā)病及表型之間的關(guān)系；比較FISH法和多重PCR技術(shù)的優(yōu)缺點。 方法： 選取200例散發(fā)先天性心臟病患兒作為實驗組和120例健康兒童作為對照組，留取全血，分別進行以下實驗： 1.標本進行預(yù)處理，制成濃度合適的細胞懸液，分裝于2個EP管中并分別標記A組、B組； 2. A組標本：采用TUPLE1/ARSA DNA探針，結(jié)合FISH技術(shù)，檢測其22q11微缺失情況； 3. B組標本：選擇覆蓋經(jīng)典缺失區(qū)域（typical deletion region，TDR）的4個短串聯(lián)重復(fù)序列多態(tài)位點（STR）：22D_4_1、22D_4_2、22D_4_3、D22S873，采用盲法，應(yīng)用多重PCR技術(shù)對標本進行擴增，通過毛細管電泳觀察峰值，檢測22q11微缺失情況。 結(jié)果： 1.FISH檢測結(jié)果顯示：在200例先天性心臟病患兒中共檢出22q11微缺失7例，檢出率為3.5%。其中，在85例室間隔缺損患兒中檢測到22q11微缺失3例，缺失率為3.5%；32例法洛氏四聯(lián)癥患兒中檢測到22q11微缺失2例，缺失率為6.3%；26例室間隔缺損合并房間隔缺損患兒中檢測到22q11微缺失2例，缺失率為7.6%。而其余先天性心臟病患兒及正常對照組兒童均未檢測出22q11微缺失。 2.多重PCR檢測結(jié)果顯示：在200例先天性心臟病患兒中共檢出22q11微缺失8例，其中7例和FISH檢測結(jié)果一致，，有1例室間隔缺損患兒STR標記分析22q11微缺失結(jié)果為陽性，而該例患兒FISH檢測結(jié)果為陰性。 3.以FISH法為金標準，對多重PCR方法進行如下評價：靈敏度為100%；特異度為99.48%；假陽性率約為0.52%；Kappa為0.929。 4.22q11微缺失與先天性心臟病關(guān)系：在實驗組中，22q11微缺失率為3.5%（7/200）；對照組中，22q11微缺失率為0%（0/120）。經(jīng)Fisher精確概率法檢驗，p=0.048（≤0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 5.22q11微缺失與先天性心臟病表型的關(guān)系：（1）根據(jù)已檢測出22q11微缺失陽性結(jié)果將實驗組分為法洛氏四聯(lián)癥組、室間隔缺損組、室間隔缺損合并房間隔缺損組，并進行統(tǒng)計學(xué)分析。經(jīng)Fisher精確概率法檢驗，p值為0.636（p＞0.05），無顯著性差異；（2）將實驗組中復(fù)合畸形患兒分為法洛氏四聯(lián)癥組（包括法洛氏四聯(lián)癥伴多發(fā)畸形）及其他復(fù)合畸形兩組，并進行統(tǒng)計學(xué)分析。經(jīng)Fisher精確概率法檢驗，p值為0.608（p＞0.05），無顯著性差異；（3）將實驗組分為圓錐動脈干畸形組、非圓錐動脈干畸形組進行比較，經(jīng)Fisher精確概率法檢驗，p值為0.311（p＞0.05），差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1.22q11微缺失與先天性心臟病發(fā)病相關(guān)。 2.22q11微缺失與非綜合征型先天性心臟病表型可能無關(guān)。 3.基于STR的多重PCR檢測方法可用于先天性心臟病患兒22q11微缺失的篩查。
[Abstract]:Objective:
22q11 microdeletion in children with congenital heart disease was detected by fluorescence in situ hybridization (FISH) and multiplex PCR technology. The relationship between 22q11 microdeletion and the incidence and phenotype of congenital heart disease was discussed. The advantages and disadvantages of FISH and multiple PCR technology were compared.
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本文編號：1521694