本文關鍵詞：抑制KGFR表達對高氧暴露下A549細胞功能影響的研究

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【摘要】：第一部分篩選KGFR沉默序列及對KGFR沉默A549細胞在高氧暴露下功能的初步研究 【目的】篩選有效的KGFR沉默序列，并研究高氧暴露下KGFR沉默的A549細胞的變化。 【方法】體外傳代培養(yǎng)A549細胞，轉染si-KGFR序列及si-NT序列，48h后收集細胞總RNA及總蛋白，，使用實時熒光定量PCR法檢測KGFR mRNA的表達；用Western blot法檢測KGFR蛋白表達的水平。對有效序列細胞通以950ml/L高氧，對照組轉染置于同一室內空氣中，觀察兩組細胞形態(tài)變化，用MTT法檢測細胞活性的變化。 【結果】①序列特異性si-KGFR可抑制KGFR的表達，si-KGFR-001、si-KGFR-002、si-KGFR-0033組KGFR mRNA表達均受到抑制，si-KGFR-002組抑制效率最高。②與常氧對照組相比，si-KGFR-002轉染細胞對高氧的耐受性降低，細胞形態(tài)不良，細胞活力降低(p0.005)。 【結論】KGFR沉默下的A549細胞對高氧耐受性降低，表現(xiàn)為細胞形態(tài)不良與細胞活性降低。 第二部分高氧暴露下抑制KGFR表達對A549細胞的抗氧化功能的研究 【目的】研究抑制A549細胞KGFR表達后對高氧暴露A549細胞抗氧化性的影響，以及外源性給予α-硫辛酸（LA），角化上皮生長因子（KGF）后對細胞的影響。 【方法】體外傳代培養(yǎng)人肺腺癌A549細胞，隨機分為四組：Ⅰ單純高氧組；Ⅱ高氧+si-KGFR組；Ⅲ高氧+si-KGFR+LA組；Ⅳ高氧+si-KGFR+KGF組。各組通以950ml/L氧氣，分別于培養(yǎng)24h、48h、72h后收集細胞，Western blot法檢測各組KGFR蛋白表達的水平，采用流式細胞術檢測各組A549細胞內活性氧水平及細胞凋亡水平；WST法檢測細胞內錳型超氧化物歧化酶活性。 【結果】與高氧對照組相比，①KGFR沉默細胞胞內ROS水平較單純高氧細胞內ROS水平高(p0.005)。②外源性LA、KGF可以減輕KGFR沉默細胞內ROS的產生(p0.05)。③高氧暴露所致的A549細胞死亡以早期凋亡為主，而高氧暴露對KGFR沉默細胞的致死效應更為顯著(p0.005)。④外源性LA、KGF可以部分減輕高氧暴露對KGFR沉默細胞的致死效應(p0.005)。⑤高氧暴露使KGFR沉默細胞錳型超氧化物歧化酶活性降低，但各組間酶活性變化無統(tǒng)計學意義。⑥外源性LA、KGF可以提高高氧暴露下KGFR沉默細胞KGFR的表達(p0.05)。 【結論】抑制KGFR表達可高氧暴露下A549細胞內ROS水平升高，細胞凋亡數(shù)量增加；外源性給予LA、KGF可部分減輕KGFR抑制所致效應。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R722.1

【參考文獻】

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1 常立文;;新生兒支氣管肺發(fā)育不良的診治[J];中國實用兒科雜志;2007年04期

本文編號：1289616