本文關鍵詞：miRNA-708在兒童普通急性淋巴細胞性白血病中的表達及調控機制的研究

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【摘要】：背景急性淋巴細胞性白血病(ALL)是最常見的兒童惡性血液腫瘤,約占兒童急性白血病的75%-80%。多數(shù)ALL患者通過規(guī)范治療可以達到長期無病生存,然而仍有一部分ALL患兒,特別是高危型患兒,復發(fā)或難以達到緩解。微小RNA (miRNA)與白血病的發(fā)生、發(fā)展、臨床表現(xiàn)和預后有密切聯(lián)系,在其發(fā)生中起促癌或抑癌的作用,在靶向分子治療和預后評價方面具有良好的應用前景。 目的檢測兒童普通急性淋巴細胞性白血病(common-ALL)中niRNA的差異性表達,進一步研究差異性表達的miRNA-708調控的靶基因。 方法研究對象為34例普通急性淋巴細胞性白血病患兒及5例行骨骼矯正手術并排除腫瘤和血液系統(tǒng)疾病患兒的骨髓樣本,采用中國兒童血液病研究組2008(CCLG-2008)方案對其進行治療及臨床危險度分型。 1.應用miRNA微陣列基因芯片技術篩選common-ALL患兒樣本中miRNA的差異性表達,應用莖環(huán)實時定量聚合酶鏈反應(stem-loop RT-PCR)技術驗證差異性表達的miRNA。 2.應用生物信息學方法預測miRNA-708調控的靶基因,利用雙報告基因檢測技術鑒定miRNA-708調控的靶基因,通過實時定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)和蛋白質印跡(Western blot)等方法在淋巴細胞和白血病細胞中進一步驗證miRNA-708是否調控靶基因的表達。 3.利用基因點突變和雙報告基因檢測技術驗證miRNA-708與CNTFR的結合位點。 結果 1. miRNA微陣列芯片結果示：同正常對照組相比,在兒童普通急性淋巴細胞性白血病樣本中檢測的2006個niRNA中,miR-708、miR-210、miR-181b、 miR-345、miR-324-5p、miR-125b、miR-324-3p和miR-106b表達顯著上調;miR-23、miR-27a和miR-23b表達顯著下調。莖環(huán)實時定量PCR進一步驗證示,miR-708、miR-210和miR-181b表達量為16.886±16.854、5.710±4.652及9.789±1.178,與正常對照組(1.872±0.339、1.276±0.531及1.005±0.080)相比表達均上調,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。miR-27a和miR-345表達量為0.524±0.085及0.675±0.086,與正常對照組(1.123±0.066及1.204±0.143)相比均下調,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。miR-708和miR-181b在高危組中表達水平為44.990±6.379和12.980±1.889,高于中危組和標危組(P0.05)。 2.通過生物信息學技術預測miR-708的靶基因,篩選出CNTFR、NNAT和GNG12三個預測靶基因進行驗證。雙報告基因檢測結果示：轉染miR-708模擬物(miR-708mimics)的人胚胎腎239細胞中CNTFR、NNAT和GNG12的表達水平均下降,而轉染miR-708抑制劑其表達升高。在普通急性淋巴細胞白血病樣本中,CNTFR、NNAT的mRNA表達水平較對照組相比顯著下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在Jurkat細胞中,同陰性對照組相比,轉染miR-708mimics組CNTFR、NNAT和GNG12蛋白水平均有不同程度的下降,而轉染]miR-708抑制劑(miR-708inhibitor)組CNTFR、NNAT和GNG12蛋白水平表達有不同程度的升高。 3.通過點突變技術和雙報告基因檢測驗證結合位點,結果示：miR-708與CNTFR的結合區(qū)域位于CNTFR mRNA3'-UTR端394～400bp。 結論miRNAs的差異性表達在兒童普通型急性淋巴細胞性白血病發(fā)生發(fā)展過程中及其不同的臨床分型的發(fā)生機制中存在重要的作用,其中niRNA-708是高危型common-ALL重要的調控因子。miRNA-708在白血病細胞中通過結合靶基因CNTFR、NNAT和GNG12的3'-UTR端,降低靶基因的表達水平。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R733.71

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：1252340