本文關(guān)鍵詞：TNF-α調(diào)控ORMDL3基因轉(zhuǎn)錄的機制研究

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【摘要】：目的： 血清類黏蛋白1樣蛋白3(orosomucoid1-like protein3,ORMDL3)是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與哮喘關(guān)聯(lián)最有充分證據(jù)的基因,也是在兒童期起病哮喘的易感基因。腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在哮喘發(fā)病尤其是在氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性及氣道重塑中起著重要作用。本實驗的主要目的是探討TNF-α對哮喘易感基因ORMDL3啟動子活性的調(diào)控作用及其機制。 方法： 以人胚腎293(HEK-293)細胞基因組DNA為模板,采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)技術(shù)擴增出Ets-1片段,并克隆進真核載體pcDNA內(nèi),構(gòu)建含Ets-1基因的重組真核表達質(zhì)粒pcDNA-Ets-1。利用過表達、突變質(zhì)粒及RNA干擾方法測定Ets-1、p300、CREB對ORMDL3基因啟動子活性的影響。ORMDL3螢光素酶報告質(zhì)粒P1(pGL-84/+58)轉(zhuǎn)染HEK-293細胞后,加或不加TNF-α再孵育24h,利用螢光素酶活性測定實驗研究TNF-α對ORMDL3基因啟動子活性的影響。突變或干擾Ets-1、p300、CREB,加或不加TNF-α孵育后研究TNF-α是否通過其中某一個或某幾個位點對ORMDL3基因啟動子水平發(fā)揮調(diào)控作用。TNF-α處理HEK-293細胞后,利用Real time PCR及Western blot檢測TNF-α對Ets-1mRNA及蛋白水平的影響。 結(jié)果： 核酸序列分析及Western blot結(jié)果顯示正確構(gòu)建了含Ets-1基因的重組真核表達質(zhì)粒。突變Ets-1、p300、CREB結(jié)合位點以及干擾Ets-1表達均能顯著下調(diào)ORMDL3基因啟動子活性；過表達Ets-1、CREB可上調(diào)ORMDL3基因啟動子活性。TNF-α對ORMDL3基因啟動子活性具有正向調(diào)控作用,且Ets-1結(jié)合位點突變或敲低Ets-1表達可明顯降低TNF-α對ORMDL3基因啟動子活性的上調(diào)作用。TNF-α能上調(diào)Ets-1的mRNA及蛋白水平,而對p300和CREB的表達沒有顯著影響。 結(jié)論： 在HEK-293細胞中,TNF-a通過Ets-1轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點上調(diào)ORMDL3基因啟動子活性。
【關(guān)鍵詞】：ORMDL3 啟動子 TNF-α Ets-1 支氣管哮喘
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R725.6
【目錄】：

• 目錄4-5
• 英文~.寫詞簡表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-14
• 材料與方法14-27
• 結(jié)果27-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-44
• 綜述44-55
• 參考文獻49-55
• 攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的學術(shù)論文55-56
• 致謝56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黃玉;楊波;遲小華;劉麗宏;李薇;盧學春;;真核生物啟動子的研究及應(yīng)用[J];生物技術(shù)通訊;2010年02期

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本文編號：1125485