本文關(guān)鍵詞：多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRPs）基因家族在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病中的表達(dá)模式及其臨床意義

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【摘要】：本論文包括三個部分：（一）多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRPs）基因家族6個家族成員（MRP1-6）基因熒光定量RT-PCR的優(yōu)化；（二）兒童急性淋巴細(xì)胞白血病MRP1的表達(dá)及意義；（三）兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病MRP2-6的表達(dá)及意義。 第一部分多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRPs）基因家族熒光定量RT-PCR的優(yōu)化 目的：通過定量PCR技術(shù)檢測MRP1-6基因mRNA在白血病細(xì)胞株中的表達(dá)水平，優(yōu)化熒光定量RT-PCR的條件，鑒定引物的特異性，為研究MRP1-6基因在兒童急性淋巴細(xì)胞性細(xì)胞白血�。╝cute lymphoblastic leukemia, ALL）中的表達(dá)及意義提供基礎(chǔ)。 方法：培養(yǎng)和收集3株白血病細(xì)胞株為模板，提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，優(yōu)化實時定量RT-PCR條件，通過測定MRP1-6基因在各個細(xì)胞株中的表達(dá)水平和溶解曲線分析，鑒定MRP1-6基因引物的特異性。 結(jié)果：MRP1-6基因引物具有特異性，通過優(yōu)化熒光定量RT-PCR條件為研究MRPs在兒童ALL中的表達(dá)奠定了基礎(chǔ)。 第二部分兒童急性淋巴細(xì)胞白血病MRP1基因的表達(dá)及臨床意義 目的：多藥耐藥相關(guān)蛋白基因（multidrug resistance associated protein-1，MRP1）在多種腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤多藥耐藥具有密切相關(guān)性。通過定量PCR檢測兒童急性淋巴細(xì)胞細(xì)胞白血�。╝cute lymphoblastic leukemia，ALL）MRP1基因mRNA的表達(dá)水平，分析其在兒童ALL中的表達(dá)特點及臨床意義。 方法：收集2013年期間在蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院診斷和治療的ALL患兒146例（初診=67例，完全緩解=70例，復(fù)發(fā)=9例），10例特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathicthrombocytopenic purpura，ITP）患兒骨髓為對照。應(yīng)用定量RT-PCR方法檢測MRP1基因的表達(dá)水平，利用SPSS18統(tǒng)計學(xué)軟件，分析MRP1基因表達(dá)水平與兒童ALL臨床預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性。 結(jié)果：(1)初診組和復(fù)發(fā)組MRP1的中位表達(dá)水平分別為5.82和8.49，明顯高于完全緩解組（1.99），P值均＜0.05；其中復(fù)發(fā)組表達(dá)水平最高。(2) MRP1的表達(dá)水平與ALL危險程度具有密切相關(guān)性，低危組表達(dá)水平最低、中危組居中、高危組最高，，中位數(shù)依次為4.28、5.62和7.56，中危組與標(biāo)危組、高危組與標(biāo)危組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P值分別為0.015、0.007。(3)以中位表達(dá)水平為界將初診患兒分為高、低表達(dá)量兩組，高表達(dá)組（n=34例）第7天強(qiáng)的松預(yù)處理敏感率為70.6%，而低表達(dá)組（n=33例）敏感率為90.9%，P=0.035；第33天骨髓完全緩解率高表達(dá)組為64.7%，低表達(dá)組為87.9%，P=0.026；第15天骨髓完全緩解率高表達(dá)組為68.8%，低表達(dá)組為69.7%，P=0.664。（4）初診T-ALL組（n=10例）MRP1的表達(dá)水平高于B-ALL組（n=57例），中位數(shù)分別為7.71和5.18，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.007）。（5）單因素分析顯示MRP1mRNA表達(dá)水平與患兒性別、年齡、初診時白細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白、血小板計數(shù)、外周血涂片幼稚細(xì)胞比例及骨髓涂片幼稚細(xì)胞比例無相關(guān)性。 結(jié)論：在兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病中，MRP1的表達(dá)與免疫分型、治療反應(yīng)、危險程度及疾病復(fù)發(fā)密切相關(guān)，是ALL預(yù)后差的有效指標(biāo)。 第三部分兒童急性淋巴細(xì)胞白血病MRP2-6的表達(dá)及臨床意義 目的：MRP2-6基因在多種腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤多藥耐藥具有密切相關(guān)性，目前有關(guān)它們在兒童ALL中的表達(dá)及意義國內(nèi)鮮見報道，使用熒光定量PCR檢測MRP2-6mRNA在兒童ALL中的表達(dá)水平，分析其在兒童ALL中的表達(dá)特點及臨床預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性。 方法：于2013年收集在蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院診斷和治療的ALL患兒133例（初診=56例，完全緩解=68例，復(fù)發(fā)=9例），10例特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathicthrombocytopenic purpura，ITP）患兒骨髓為對照。應(yīng)用定量RT-PCR方法檢測MRP2-6基因的表達(dá)水平，利用SPSS18統(tǒng)計學(xué)軟件，分析它們在兒童ALL預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性。 結(jié)果：(1)初診組MRP2基因的中位表達(dá)水平最高（2.99），復(fù)發(fā)組次之（1.18）完全緩解組最低（1.17），但各組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P值分別為0.065和0.763；完全緩解組MRP3基因的中位表達(dá)水平為2.09，高于初診組、復(fù)發(fā)組，后兩者中位表達(dá)水平分別為0.52和0.38，且初診組與完全緩解組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P值＜0.001；MRP4在初診組和復(fù)發(fā)組的中位表達(dá)水平分別為2.46和5.47，均高于完全緩解組（1.64），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P值分別為0.039、0.029，以復(fù)發(fā)組表達(dá)水平最高；MRP5的在兒童ALL中的表達(dá)模式與MRP4相似，其中位表達(dá)水平在初診組和復(fù)發(fā)組分別為1.60和3.84，高于完全緩解組（0.91），且差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P值分別為0.003、0.002，以復(fù)發(fā)組表達(dá)水平最高； MRP6的中位表達(dá)水平在復(fù)發(fā)組最高，為2.0，高于初診組、完全緩解組，后二者分別為0.56和1.13，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(2)最終危險程度分級顯示MRP2和MRP5的表達(dá)在中危組最高，分別為4.62和1.71，但與低危組、高危組比較沒有統(tǒng)計學(xué)意義；MRP4的中位表達(dá)水平以高危組最高，但與中危組、低危組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。（3）以MRP2-6mRNA中位表達(dá)水平為界，將初診ALL患兒分為高、低表達(dá)組，分析它們在3個治療反應(yīng)評估點（第7天、15天和33天）的表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)沒有統(tǒng)計學(xué)意義。且與免疫分型沒有相關(guān)性。（4）單因素分析顯示MRP2與初診時血小板計數(shù)呈負(fù)相關(guān)、MRP4與性別具有有關(guān)性。 結(jié)論：在兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病中，MRP2-6mRNA的表達(dá)水平具有不同的表達(dá)模式，其中MRP4和MRP5mRNA的表達(dá)水平在疾病復(fù)發(fā)時最高。
【關(guān)鍵詞】：多藥耐藥相關(guān)蛋白基因家族（MRPs 基因） 引物 熒光定量 RT-PCR（qRT-PCR） 白血病細(xì)胞株 兒童 急性淋巴細(xì)胞白血病 MRP1基因 定量RT-PCR 治療反應(yīng) 兒童 急性淋巴細(xì)胞白血病 MRP2-6基因 定量RT-PCR 復(fù)發(fā)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-13
• 前言13-16
• 參考文獻(xiàn)14-16
• 第一部分 多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRPs）基因家族熒光定量 RT-PCR 的優(yōu)化16-23
• 一、材料和方法16-20
• 二、結(jié)果20-21
• 三、討論21-22
• 參考文獻(xiàn)22-23
• 第二部分 兒童急性淋巴細(xì)胞白血病 MRP1 的表達(dá)及臨床意義23-36
• 一、材料和方法23-27
• 二、結(jié)果27-30
• 三、討論30-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 第三部分 兒童急性淋巴細(xì)胞白血病 MRP2-6 的表達(dá)模式及其臨床意義36-51
• 一、材料和方法36
• 二、結(jié)果36-46
• 三、討論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 綜述51-73
• 參考文獻(xiàn)61-73
• 英漢雙解縮略詞表73-74
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文74-75
• 致謝75-76

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1000098