本文關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型Rep蛋白多聚體形成的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)研究

  更多相關(guān)文章： 豬圓環(huán)病毒(PCV) Rep 多聚化 復(fù)制率 海腎熒光素酶活性 解旋酶活性

【摘要】：豬圓環(huán)病毒(PCV)屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridae),圓環(huán)病毒屬(Circovirus),是已知最小的動(dòng)物病毒。其于20世紀(jì)70年代在培養(yǎng)的PK-15細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),隨后在加拿大大量爆發(fā)稱為斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的豬體內(nèi)檢測(cè)到了PCV。后將具有致病性的PCV命名為PCV2,而將無(wú)致病力的PCV命名為PCV1。目前PCV2感染已經(jīng)蔓延至世界各地養(yǎng)豬場(chǎng),給世界各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失�，F(xiàn)階段對(duì)于PCV2復(fù)制相關(guān)蛋白R(shí)ep參與病毒滾環(huán)復(fù)制的機(jī)制研究還不夠深入,比如Rep蛋白是否以多聚體形式行使在滾環(huán)復(fù)制中的功能、Rep蛋白間相互作用的關(guān)鍵性位點(diǎn)等許多關(guān)鍵性問(wèn)題還未闡釋清楚。因此探究Rep蛋白間相互作用的關(guān)鍵位點(diǎn)以及解析Rep全長(zhǎng)蛋白的空間結(jié)構(gòu)能夠?yàn)榘l(fā)現(xiàn)PCV Rep蛋白新的功能結(jié)構(gòu)域、進(jìn)一步闡釋滾環(huán)復(fù)制機(jī)制從而開(kāi)發(fā)針對(duì)PCV2高效疫苗和治療新藥物奠定更為扎實(shí)的基礎(chǔ)。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果,推測(cè)Rep蛋白第107位半胱氨酸、第35位亮氨酸及第37位異亮氨酸可能對(duì)Rep蛋白二聚體的形成具有關(guān)鍵作用。本研究通過(guò)突變Rep蛋白第107位半胱氨酸、第35位亮氨酸以及第37位異亮氨酸在真核及原核表達(dá)系統(tǒng)中檢測(cè)突變體對(duì)蛋白多聚化的影響,在PCV2復(fù)制子上驗(yàn)證突變對(duì)復(fù)制子復(fù)制率、海腎熒光素酶活性的影響以及突變對(duì)蛋白解旋酶活性的影響,并嘗試對(duì)Rep全長(zhǎng)蛋白進(jìn)行晶體的初步篩選。研究的內(nèi)容及結(jié)果如下:(1)PCV2 Rep融合蛋白的表達(dá)純化以及融合標(biāo)簽的切除將擴(kuò)增出的PCV2 Rep基因連接至pET28a-SUMO原核表達(dá)載體后轉(zhuǎn)化至BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá),利用Ni2+親和層析成功純化出SUMO-Rep融合蛋白。將純化出的SUMO-Rep融合蛋白用SUMO蛋白酶于4℃條件切割2 h能夠完全去除SUMO標(biāo)簽。(2)Rep全長(zhǎng)蛋白及其突變體的多聚化檢測(cè)成功構(gòu)建pcDNA3.1-Rep、pcDNA3.1-Rep-C107A、pcDNA3.1-Rep-L35A-I37AC107A真核表達(dá)質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行非還原SDS-PAGE,結(jié)果表明在非還原變性條件下真核表達(dá)的野生型及突變體蛋白均未見(jiàn)二聚體及更高聚體形式而僅見(jiàn)蛋白單體形式。將原核表達(dá)純化后去除SUMO標(biāo)簽的野生型以及C107A、L35A-I37A-C107A突變體Rep蛋白用分子篩驗(yàn)證蛋白多聚化。結(jié)果表明PCV2 Rep全長(zhǎng)蛋白C107A突變體的多聚化與野生型蛋白相似,而L35A-I37A-C107A突變體蛋白的多聚化受到影響。說(shuō)明第107位半胱氨酸并不是Rep全長(zhǎng)蛋白形成分子間二硫鍵從而形成多聚體的關(guān)鍵性位點(diǎn),而第35位亮氨酸、第37位異亮氨酸參與了Rep全長(zhǎng)蛋白間的相互作用。(3)基于Rep基因復(fù)制子突變體的構(gòu)建以及復(fù)制子復(fù)制率、海腎熒光素酶活性的檢測(cè)根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建PCV2復(fù)制子的流程,成功構(gòu)建Rep基因C107A以及L35AI37A-C107A復(fù)制子突變體。將復(fù)制子突變體轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞后采用Realtime-PCR方法檢測(cè)復(fù)制子復(fù)制率,用Renilla Luciferase Assay System試劑盒檢測(cè)海腎熒光素酶活性。結(jié)果表明C107A突變體復(fù)制子的復(fù)制率及海腎熒光素酶活性較野生型復(fù)制子高,而L35A-I37A-C107A突變體復(fù)制子復(fù)制率及海腎熒光素酶活性較野生型嚴(yán)重降低,與非復(fù)制子的復(fù)制率及海腎熒光素酶活性相當(dāng)。(4)Rep全長(zhǎng)蛋白突變體解旋酶活性的檢測(cè)通過(guò)非變性聚丙烯酰氨凝膠電泳檢測(cè)Rep全長(zhǎng)蛋白及其突變體解旋酶活性。結(jié)果表明C107A突變體蛋白以及L35A-I37A-C107A突變體蛋白的解旋酶活性與野生型Rep蛋白的解旋酶活性相比并無(wú)明顯差異。(5)PCV2 Rep全長(zhǎng)蛋白晶體的初步篩選將切除SUMO標(biāo)簽的Rep蛋白通過(guò)分子篩進(jìn)一步純化并濃縮后,采用座滴擴(kuò)散的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的5個(gè)晶體篩選試劑盒共480種條件進(jìn)行了初步篩選。但遺憾的是經(jīng)過(guò)嘗試各種條件仍無(wú)法生長(zhǎng)出蛋白晶體。
【關(guān)鍵詞】：豬圓環(huán)病毒(PCV) Rep 多聚化 復(fù)制率 海腎熒光素酶活性 解旋酶活性
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.651
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 縮略語(yǔ)表（ABBREVIATION）11-12
• 第1章 文獻(xiàn)綜述12-22
• 1.1 豬圓環(huán)病毒概述12-14
• 1.2 豬圓環(huán)病毒的基因組結(jié)構(gòu)及其理化特性14-15
• 1.3 豬圓環(huán)病毒的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物15
• 1.4 豬圓環(huán)病毒編碼的開(kāi)放閱讀框（ORF）15-19
• 1.5 滾環(huán)復(fù)制過(guò)程機(jī)制19-20
• 1.6 其他病毒Rep蛋白多聚體研究進(jìn)展20-22
• 第2章 研究目的與意義22-23
• 第3章 材料與方法23-43
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料23-27
• 3.1.1 菌種、質(zhì)粒和細(xì)胞23
• 3.1.2 主要藥品及試劑（盒）23-24
• 3.1.3 主要培養(yǎng)基及抗生素和誘導(dǎo)劑的配制24
• 3.1.4 緩沖液24-26
• 3.1.4.1 50×TAE緩沖液24
• 3.1.4.2 0.8%瓊脂糖凝膠24
• 3.1.4.3 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）緩沖液24-25
• 3.1.4.4 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（Native-PAGE）緩沖液25
• 3.1.4.5 蛋白純化緩沖液及其他相關(guān)緩沖液25-26
• 3.1.4.6 Western-blot緩沖液的配制26
• 3.1.4.7 解旋反應(yīng)相關(guān)緩沖液的配制26
• 3.1.5 引物設(shè)計(jì)26-27
• 3.1.6 熒光底物27
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法27-43
• 3.2.1 目的基因的擴(kuò)增27
• 3.2.2 目的片段的回收27-28
• 3.2.3 目的片段的連接28
• 3.2.4 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備28-29
• 3.2.5 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化29
• 3.2.6 質(zhì)粒的提取與酶切鑒定29-32
• 3.2.6.1 質(zhì)粒的少量提取29-30
• 3.2.6.2 質(zhì)粒的大量提取30-32
• 3.2.6.3 質(zhì)粒的酶切鑒定32
• 3.2.7 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定32-33
• 3.2.7.1 質(zhì)粒的雙酶切與回收32
• 3.2.7.2 目的片段與表達(dá)載體的連接與轉(zhuǎn)化32-33
• 3.2.7.3 重組質(zhì)粒的提取與酶切鑒定33
• 3.2.7.4 重組表達(dá)菌株的構(gòu)建33
• 3.2.8 重組菌的表達(dá)與鑒定33-36
• 3.2.8.1 重組蛋白在E.coli中可溶性表達(dá)33-34
• 3.2.8.2 SDS-PAGE檢測(cè)34
• 3.2.8.3 Western blot鑒定34-35
• 3.2.8.4 重組蛋白的表達(dá)35
• 3.2.8.5 可溶性蛋白的純化及鑒定35-36
• 3.2.9 BCA法測(cè)定蛋白濃度36-37
• 3.2.10 利用凝膠過(guò)濾層析（分子篩）純化蛋白質(zhì)37-38
• 3.2.11 Rep蛋白解旋酶活性的測(cè)定38
• 3.2.12 細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代、凍存38-39
• 3.2.12.1 細(xì)胞的復(fù)蘇38
• 3.2.12.2 細(xì)胞的傳代38-39
• 3.2.12.3 細(xì)胞的凍存39
• 3.2.13 細(xì)胞轉(zhuǎn)染39
• 3.2.14 海腎熒光素酶活性檢測(cè)39-40
• 3.2.15 細(xì)胞總DNA的提取40-41
• 3.2.16 熒光定量PCR41
• 3.2.17 間接免疫熒光（IFA）41-42
• 3.2.18 蛋白質(zhì)結(jié)晶條件的篩選42-43
• 第4章 結(jié)果與分析43-61
• 4.1 PCV2 Rep基因的擴(kuò)增43
• 4.2 重組質(zhì)粒pET28a-SUMO-Rep的雙酶切鑒定43-44
• 4.3 SUMO-Rep融合蛋白的純化及Western blot驗(yàn)證44-45
• 4.4 SUMO-Rep融合蛋白SUMO標(biāo)簽的去除及Rep蛋白的純化45-47
• 4.5 Rep蛋白突變體對(duì)蛋白多聚化的影響47-52
• 4.5.1 Rep突變體真核及原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建47-49
• 4.5.2 Rep蛋白突變體在真核細(xì)胞中對(duì)蛋白多聚化的影響49-50
• 4.5.3 Rep蛋白突變體對(duì)原核表達(dá)的蛋白多聚化的影響50-52
• 4.6 Rep突變體對(duì)復(fù)制子復(fù)制的影響52-58
• 4.6.1 PCV2復(fù)制子突變體的構(gòu)建52-57
• 4.6.1.1 含有 2A序列的Rep基因突變體的構(gòu)建52-54
• 4.6.1.2 pcDNA3.1-Rluc-Rep突變體質(zhì)粒的構(gòu)建54-55
• 4.6.1.3 ori-PCMV-Rluc-Rep突變體片段的擴(kuò)增55-56
• 4.6.1.4 pT-ori-ORF1復(fù)制子突變體的構(gòu)建56-57
• 4.6.2 Rep突變體對(duì)復(fù)制子復(fù)制率的影響57-58
• 4.6.3 Rep突變體對(duì)復(fù)制子海腎熒光素酶活性的影響58
• 4.7 Rep突變體對(duì)蛋白解旋酶活性的影響58-60
• 4.8 Rep蛋白晶體的初步篩選60-61
• 第5章 討論與結(jié)論61-64
• 5.1 討論61-63
• 5.2 結(jié)論63-64
• 參考文獻(xiàn)64-75
• 致謝75

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 龔振華,尹燕博,沈廣;豬圓環(huán)病毒:一種新發(fā)現(xiàn)的病原[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2000年S1期

2 王麗榮;;豬圓環(huán)病毒的病原學(xué)與診斷[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年06期

3 孫艷明;趙德明;;豬圓環(huán)病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2006年07期

4 IGORMOROZOV,李凱年;豬圓環(huán)病毒及臨床意義[J];國(guó)外畜牧科技;1999年05期

5 馮衛(wèi);陳沫;楊曉容;聶克艷;陳靜;姜萍;楊林;劉海;顏艷;王海;;基于文獻(xiàn)計(jì)量法分析我國(guó)豬圓環(huán)病毒的研究現(xiàn)狀[J];農(nóng)技服務(wù);2013年12期

6 王志軍;郭慧娟;李秀麗;董樹(shù)仁;鄢明華;;豬圓環(huán)病毒病原學(xué)研究進(jìn)展[J];天津農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年08期

7 ;獸藥新產(chǎn)品——豬圓環(huán)病毒疫苗[J];科技致富向?qū)?2010年28期

8 段麗麗,文心田,曹三杰,馬曉平;豬圓環(huán)病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2005年06期

9 丁昌春;鄭新勇;楊世興;;豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2006年08期

10 王慧杰;喬宏興;;豬圓環(huán)病毒河南株的分離鑒定[J];中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào);2007年09期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王東方;安春霞;劉光輝;閆若潛;吳志明;;豬圓環(huán)病毒1、2型多重PCR診斷方法建立及應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

2 馮麗麗;張改平;張麗萍;朱禮倩;李嬌;楊蘇珍;席俊;;豬圓環(huán)病毒致病機(jī)理的研究進(jìn)展[A];河南省畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨2008年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

3 黃立平;劉長(zhǎng)明;危艷武;陸月華;郭龍軍;溫士剛;武嘉男;吳洪麗;;檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型血清中和抗體阻斷ELISA方法的建立及應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

4 程榮華;劉云志;孫健;呼延含蓉;趙欣;邵洪澤;張麗媛;楊金生;;淺談豬圓環(huán)病毒研究現(xiàn)況[A];低碳經(jīng)濟(jì)與科學(xué)發(fā)展——吉林省第六屆科學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2010年

5 王鑫;葉賀佳;李敏;仇微紅;孫招金;梁昭平;;豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

6 郎洪武;趙德明;王力;張廣川;程君生;宋立;;豬圓環(huán)病毒分離、鑒定及豬斷奶多系統(tǒng)衰弱綜合征[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十一次獸醫(yī)病理學(xué)、第十次動(dòng)物病理生理學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

7 郎洪武;趙德明;王力;張廣川;程君生;宋立;;豬圓環(huán)病毒分離、鑒定及豬斷奶多系統(tǒng)衰弱綜合征[A];第四屆中國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

8 蘆銀華;談國(guó)蕾;陳德勝;陳溥言;;豬圓環(huán)病毒、豬繁殖和呼吸綜合征病毒快速檢測(cè)方法的研究[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第五屆理事會(huì)第二次全體會(huì)議暨防檢疫專業(yè)委員會(huì)第7次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2002年

9 萬(wàn)遂如;;豬圓環(huán)病毒感染[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2003年

10 萬(wàn)遂如;;豬圓環(huán)病毒感染的防治[A];現(xiàn)代化養(yǎng)豬企業(yè)經(jīng)營(yíng)管理研討會(huì)論文集[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 臨城縣畜牧辦公室 張榮連;豬圓環(huán)病毒與肺炎混感的診治[N];河北科技報(bào);2014年

2 江蘇省農(nóng)科院獸醫(yī)所 俞正玉 林繼煌;豬圓環(huán)病毒感染[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2004年

3 李凱年 譯;日本韓國(guó)發(fā)現(xiàn)豬圓環(huán)病毒感染[N];中國(guó)畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

4 記者 尹江勇;“豬圓環(huán)病毒疫苗”技術(shù)實(shí)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)化[N];河南日?qǐng)?bào);2010年

5 張曉鵬　記者 李麗云;國(guó)內(nèi)首創(chuàng)“豬圓環(huán)病毒新一代疫苗”研制成功[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

6 記者 孟山　李松戰(zhàn);豬圓環(huán)病毒疫苗在洛研制成功[N];洛陽(yáng)日?qǐng)?bào);2010年

7 記者 喬地　通訊員 聞亞麗;“豬圓環(huán)病毒”疫苗批準(zhǔn)上市[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

8 邢臺(tái)市獸醫(yī)院 邢蘭君 楊立帆;豬圓環(huán)病毒與附紅細(xì)胞體混感怎么辦[N];河北科技報(bào);2014年

9 張曉鵬;“豬圓環(huán)病毒疫苗”全國(guó)推廣[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2010年

10 本報(bào)記者 喬地　通訊員 馬焱 鄭世孝;科技創(chuàng)新,走在富民強(qiáng)國(guó)的路上[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周瑩珊;豬圓環(huán)病毒2型感染誘導(dǎo)PK-15細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與凋亡的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

2 時(shí)建立;豬圓環(huán)病毒2型糖基化位點(diǎn)突變對(duì)病毒復(fù)制能力和致病性的影響及抗體膠體金檢測(cè)方法的建立[D];山東師范大學(xué);2016年

3 蘆銀華;華東地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)調(diào)查及其感染性核酸的構(gòu)建[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

4 司興奎;豬圓環(huán)病毒2型感染對(duì)豬免疫功能影響的細(xì)胞與分子機(jī)制[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 曲連東;豬圓環(huán)病毒2型地方株的分離鑒定和診斷方法的建立及應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 華利忠;豬圓環(huán)病毒2型誘導(dǎo)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡途徑的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 溫立斌;豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

8 董林;豬圓環(huán)病毒2型診斷試劑盒的研制與應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2014年

9 朱善元;江蘇部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的檢測(cè)及其免疫接種試驗(yàn)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

10 潘群興;豬圓環(huán)病毒2型感染分子診斷與防制的相關(guān)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳冬杰;豬圓環(huán)病毒2型與豬鼻支原體共感染協(xié)同致病性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 李麗;豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因的表達(dá)及抗體ELISA方法的建立[D];中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2011年

3 侯成才;豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白基因在畢赤酵母中的表達(dá)與復(fù)合水佐劑的研制[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 陳福旺;豬瘟病毒感染報(bào)告細(xì)胞系和豬圓環(huán)病毒2型敏感細(xì)胞系的建立[D];吉林大學(xué);2016年

5 陳靈艷;豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白ORF2的原核表達(dá)系統(tǒng)的研究[D];福州大學(xué);2014年

6 張廣芳;豬圓環(huán)病毒2型ORF3基因的原核表達(dá)與間接ELISA檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

7 胡瑞麗;基于LAMP和熒光定量PCR技術(shù)的豬圓環(huán)病毒2型和豬細(xì)小病毒檢測(cè)試劑盒的研制[D];上海師范大學(xué);2016年

8 杜文娟;表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）Cap蛋白重組偽狂犬病病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性鑒定[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

9 劉杏;豬圓環(huán)病毒2型和豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查及基因進(jìn)化分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

10 呂陽(yáng);豬圓環(huán)病毒2型Rep蛋白多聚體形成的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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