本文關(guān)鍵詞：富硒酵母對(duì)玉米赤霉烯酮致染毒雄性小鼠生殖系統(tǒng)損傷保護(hù)作用的研究

  更多相關(guān)文章： 富硒酵母 玉米赤霉烯酮 氧化應(yīng)激損傷 生殖毒性保護(hù)

【摘要】：目的與背景：玉米赤霉烯酮(zearalenone,以下簡(jiǎn)稱ZEN),對(duì)動(dòng)物的生殖繁育影響甚大,會(huì)引起雄性動(dòng)物的睪丸萎縮及精子質(zhì)量的下降等。硒是機(jī)體重要的必需微量元素之一,能夠提高機(jī)體抗氧化損傷能力；此外硒對(duì)機(jī)體有害物質(zhì)如曲霉毒素、重金屬還具有解毒、排毒的功能。富硒酵母是經(jīng)生物工程技術(shù)研制而成的一種富含微量元素硒的生物制劑,與無機(jī)硒相比其生理活性更高及更安全。因此富硒酵母已經(jīng)成為當(dāng)前機(jī)體抗氧化損傷及解毒的研究熱點(diǎn)。但是富硒酵母對(duì)玉米赤霉烯酮致染毒雄性小鼠生殖系統(tǒng)損傷保護(hù)作用目前尚不清楚。因此本課題擬采用富硒酵母防治ZEN致染毒的雄性小鼠,探討硒對(duì)其生殖毒性的保護(hù)作用及其保護(hù)機(jī)制的研究,該研究為ZEN引起的雄性生殖毒性的預(yù)防和治療提供新的線索和思路。方法：每天富硒酵母灌胃1h后再灌胃ZEN,灌胃28d后,頸椎脫臼法處死。通過光鏡下觀察附睪和睪丸結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)變化及小鼠血清中睪酮(T)的含量,探討富硒酵母對(duì)ZEN致雄性小鼠睪丸和附睪毒性的影響；其次通過對(duì)精子形態(tài)、精子畸形率、精子濃度和精子活動(dòng)度、活動(dòng)方式的觀察和統(tǒng)計(jì)探討硒對(duì)ZEN致雄性小鼠精子毒性的影響；通過檢測(cè)睪丸抗氧化指標(biāo)SOD、MDA、GSH-Px探討富硒酵母對(duì)ZEN致雄性小鼠氧化應(yīng)激的影響；通過檢測(cè)凋亡基因相關(guān)蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)水平變化探討富硒酵母對(duì)ZEN致小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡的。結(jié)果：1.富硒酵母對(duì)ZEN致雄性小鼠睪丸和附睪毒性的影響單獨(dú)ZEN灌胃(40mg/kg)小鼠28d后,睪丸曲精小管與基底細(xì)胞分離,生精細(xì)胞與支持細(xì)胞分離,生精細(xì)胞排列稀疏紊亂,管腔內(nèi)觀察到大量稀疏的生精細(xì)胞；附睪與體重的比值顯著降低(P0.05),說明ZEN對(duì)小鼠睪丸和附睪的形態(tài)結(jié)構(gòu)具有損傷作用。每天給予0.4mg/kg富硒酵母配合ZEN灌胃小鼠28d后,睪丸及附睪中的細(xì)胞與單獨(dú)ZEN處理組相比,細(xì)胞排列較為整齊緊密,生精細(xì)胞脫落數(shù)量減少,附睪指數(shù)有明顯升高(P0.05),說明大劑量的富硒酵母能夠緩解ZEN對(duì)睪丸和附睪結(jié)構(gòu)的損傷作用。單獨(dú)灌胃40mg/kg.d ZEN 28d后小鼠血清中睪酮含量顯著下降,說明ZEN抑制小鼠血清中睪酮的合成。灌胃ZEN配合不同劑量富硒酵母解藥處理后,對(duì)小鼠血清中睪酮的合成影響不大2.富硒酵母對(duì)ZEN致雄性小鼠精子毒性的影響單獨(dú)灌胃ZEN 40mg/kg.d 28 d后,小鼠精子出現(xiàn)明顯畸形狀態(tài),精子濃度、精子活力與對(duì)照組相比有顯著的下降(P0.05),說明ZEN對(duì)精子具有較強(qiáng)的毒性作用。灌胃富硒酵母配合ZEN小鼠28d后,大劑量(0.4mg/kg)、中劑量(0.2mg/kg)富硒酵母都可明顯升高精子濃度,降低精子畸形率、提高精子活動(dòng)參數(shù)(P0.05)。試驗(yàn)結(jié)果表明灌胃0.2mg/kg、0.4mg/kg富硒酵母能夠抑制ZEN對(duì)精子的毒性作用。3.探究富硒酵母對(duì)ZEN致雄性小鼠抗氧化應(yīng)激的影響單獨(dú)灌胃0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.4mg/kg富硒酵母后,小鼠睪丸組織中抗氧化指標(biāo)GSH-Px的活性、SOD活性與對(duì)照組相比有了顯著得提高(P0.05)說明富硒酵母能夠增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。每天灌胃富硒酵母(0.4 mg/kg)1h后再灌胃ZEN (40mg/kg.d),小鼠MDA的含量相對(duì)于單獨(dú)灌胃ZEN組相比有明顯的下降(P0.05),說明灌胃ZEN配合0.4 mg/kg富硒酵母解藥處理,能有效地提高機(jī)體對(duì)ZEN的抗氧化氧化應(yīng)激反應(yīng)；而灌胃ZEN配合0.1mg/kg、0.2mg/kg富硒酵母解藥處理,機(jī)體對(duì)ZEN的抗氧化能力影響差異不顯著,說明灌胃0.1mg/kg、0.2mg/kg富硒酵母對(duì)ZEN氧化應(yīng)激毒性無顯著影響(P0.05),試驗(yàn)證明富硒酵母對(duì)緩解ZEN睪丸氧化應(yīng)激呈劑量依賴性。4.探究富硒酵母對(duì)ZEN致雄性睪丸組織細(xì)胞凋亡的影響單獨(dú)灌胃ZEN 40mg/kg.d28天后,小鼠睪丸組織中促凋亡基因Bax、Caspase-3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平顯著提高(P0.05),抗凋亡基因Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平顯著的下降(P0.05)。每天灌胃富硒酵母(0.4mg/kg) 1h后再灌胃ZEN 40(mg/kg.d),促凋亡基因Bax、Caspase-3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與單獨(dú)灌胃ZEN組相比明顯降低(P0.05),結(jié)果表明灌胃ZEN配合大劑量(0.4mg/kg)富硒酵母解藥處理,能有效地抑制ZEN引起睪丸組織細(xì)胞的凋亡；此外單獨(dú)灌胃不同劑量的富硒酵母后,Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平顯著得到提高(P0.05),說明富硒酵母能夠增強(qiáng)機(jī)體的抗凋亡能力。灌胃ZEN配合不同劑量富硒酵母解藥處理,機(jī)體的抗凋亡能力得到有效提高。
【關(guān)鍵詞】：富硒酵母 玉米赤霉烯酮 氧化應(yīng)激損傷 生殖毒性保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S859.87
【目錄】：

• 摘要9-11
• Abtrast11-14
• 前言14-20
• 1.1 玉米赤霉烯酮的概述14-15
• 1.2 硒與富硒酵母的簡(jiǎn)介15
• 1.3 氧化應(yīng)激損傷的簡(jiǎn)介15-16
• 1.4 與雄性生殖系統(tǒng)相關(guān)激素的簡(jiǎn)介16
• 1.5 研究進(jìn)展16-18
• 1.6 研究的目的和意義18-19
• 1.7 研究的主要思路19-20
• 第一章 富硒酵母對(duì)ZEN致雄性小鼠睪丸和附睪毒性的影響20-29
• 1.1 材料和方法20-22
• 1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物20
• 1.1.2 主要藥品與試劑20
• 1.1.3 主要儀器20-21
• 1.1.4 主要試劑的配置21
• 1.1.5 試驗(yàn)動(dòng)物給藥與染毒21
• 1.1.6 睪丸與附睪臟器指數(shù)檢測(cè)21
• 1.1.7 光學(xué)倒置顯微鏡觀察小鼠睪丸結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)變化21-22
• 1.1.8 放射免疫分析法(RIA)測(cè)定小鼠血清中睪酮(T)的含量22
• 1.1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析22
• 1.2 試驗(yàn)結(jié)果22-26
• 1.2.1 硒對(duì)ZEN致雄性小鼠睪丸和附睪臟器指數(shù)的影響22-24
• 1.2.2 硒對(duì)ZEN致雄性小鼠睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響24-25
• 1.2.3 硒對(duì)ZEN致雄性小鼠睪酮合成的影響25-26
• 1.3 討論26-28
• 1.4 小結(jié)28-29
• 第二章 富硒酵母對(duì)ZEN致雄性小鼠精子毒性的影響29-36
• 2.1 材料與方法29-30
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物29
• 2.1.2 主要藥品和試劑29
• 2.1.3 主要儀器29
• 2.1.4 精子畸形率的檢查29
• 2.1.5 精子濃度和精子活力的檢測(cè)29-30
• 2.1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析30
• 2.2 試驗(yàn)結(jié)果30-33
• 2.2.1 硒對(duì)ZEN致雄性小鼠精子畸形率的影響30-31
• 2.2.2 硒對(duì)ZEN致雄性小鼠精子濃度和活力的影響31-33
• 2.3 討論33-35
• 2.4 小結(jié)35-36
• 第三章 富硒酵母對(duì)ZEN致雄性小鼠抗氧化應(yīng)激的影響36-42
• 3.1 材料與方法36-38
• 3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物36
• 3.1.2 主要藥品和試劑36
• 3.1.3 主要儀器36-37
• 3.1.4 睪丸組織的取材和勻漿37
• 3.1.5 睪丸組織蛋白定量檢測(cè)37
• 3.1.6 丙二醛(MDA)含量測(cè)定37
• 3.1.7 總超氧化物歧化酶(SOD)活力測(cè)定37-38
• 3.1.8 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性檢測(cè)38
• 3.1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析38
• 3.2 試驗(yàn)結(jié)果38-40
• 3.2.1 硒對(duì)ZEN致雄性小鼠抗氧化應(yīng)激的影響38-40
• 3.3 討論40-41
• 3.4 小結(jié)41-42
• 第四章 富硒酵母對(duì)ZEN致雄性小鼠睪丸細(xì)胞凋亡的影響42-48
• 4.1 材料與方法42-45
• 4.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物42
• 4.1.2 主要藥品與試劑42
• 4.1.3 主要儀器42
• 4.1.4 主要試劑的配制42-43
• 4.1.5 樣品RNA的提取43
• 4.1.6 樣品RNA的檢測(cè)43
• 4.1.7 樣品RNA的反轉(zhuǎn)錄43
• 4.1.8 熒光定量PCR引物合成43-44
• 4.1.9 熒光定量PCR44
• 4.1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析44-45
• 4.2 試驗(yàn)結(jié)果45-46
• 4.2.1 小鼠睪丸組織Bax、Caspase-3和Bal-2 mRNA表達(dá)情況45-46
• 4.3 討論46-47
• 4.4 小結(jié)47-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 致謝53

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本文編號(hào)：980705