本文關(guān)鍵詞：鎘對小鼠組織和早期胚胎DNA甲基化的影響

  更多相關(guān)文章： 小鼠模型 鎘 組織 早期胚胎 DNA甲基化 基因印記

【摘要】：隨著現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展,鎘污染帶來的環(huán)境健康問題近年來備受人們的關(guān)注,其中鎘的組織和生殖毒性及對胚胎發(fā)育的影響已成為研究的熱點,但鎘毒性的分子機理尚不明確。慢性鎘中毒是由于長期食用含鎘超標(biāo)的食物,以及長期飲用鎘污染的水源而引發(fā)的一種全身性的疾病。本研究采用小鼠自由飲用含氯化鎘的水(64mg/L)復(fù)制動物模型,研究鎘對小鼠肝臟、腎臟、卵巢以及早期胚胎基因組DNA甲基化和印跡基因DNA甲基化的影響,從表觀遺傳的角度探究鎘的毒性。1.鎘對組織中DNMTs和MTs的基因表達(dá)水平的影響為研究鎘對組織中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)基因和金屬硫蛋白(MTs)基因表達(dá)水平的影響,雌性小鼠連續(xù)35d自由飲用氯化鎘(64mg/L)水后,應(yīng)用RT-PCR分析肝臟、腎臟和卵巢中Dnmtlo、Dnmtls、Dnmt3a、Dnmt3b、MT-I、 MT-Ⅱ的mRNA水平。結(jié)果顯示,鎘處理能夠使得肝臟中Dnmtls和Dnmt3b的基因表達(dá)水平顯著升高(p0.05)；盡管MTs基因表達(dá)水平也升高,但差異不顯著。而鎘對腎臟和卵巢中DNMTs的基因表達(dá)水平?jīng)]有顯著影響；鎘對腎臟和卵巢中MTs的基因表達(dá)水平也影響較小。結(jié)果表明鎘對DNMTs和MTs的基因表達(dá)水平的影響主要存在與肝臟中；而在腎臟和卵巢中,鎘對其沒有顯著影響。2.鎘對小鼠肝臟、腎臟和卵巢中DNA甲基化的影響雌性小鼠連續(xù)35d自由飲用含氯化鎘的(64mg/L)水復(fù)制鎘暴露動物模型,采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)和偏重亞硫酸氫鹽測序法(BSP)分析肝臟、腎臟和卵巢中基因組DNA甲基化水平以及LINE1、H19和MT基因DNA甲基化水平,探究鎘暴露對小鼠組織基因組DNA甲基化及LINE1、H19和MT基因DNA甲基化的影響。結(jié)果顯示,鎘暴露會使組織基因組DNA甲基化水平發(fā)生改變,其中肝臟和腎臟DNA甲基化水平較對照組升高,但差異不顯著(p0.05)；而卵巢DNA甲基化水平則發(fā)生下降,但差異不顯著(p0.05)。LINE1和MT的DNA甲基化水平并沒有發(fā)生顯著變化,其中LINE1基因在組織中維持較高水平的DNA甲基化,而MT基因基本沒有發(fā)生甲基化；鎘暴露會使肝臟中H19甲基化水平顯著下降(p0.05),對照組和鎘處理組分別為39.11%±2.67%和29.74%%±3.05%；而在腎臟中鎘暴露則會使H19甲基化水平顯著上升(p0.05)對照組和鎘處理組分別為28.2%±3.23和45.24%±2.98%；鎘處理能夠上調(diào)小鼠卵巢中H19基因甲基化水平,但差異不顯著(p0.05),對照組和鎘處理組分別為34.67%±3.97%和42.08%±2.37%。結(jié)果說明雌鼠連續(xù)飲用含鎘水35d不會直接影響肝臟、腎臟和卵巢中基因組DNA甲基化水平以及LINE1基因和MT基因的DNA甲基化水平,但對H19的DNA甲基化影響存在位點特異性。3.鎘對早期胚胎中DNA甲基化的影響為了解攝入鎘對早期胚胎中DNA甲基化的影響,懷孕雌鼠連續(xù)2d自由飲用含氯化鎘(64mg/L)水后,采用BSP和結(jié)合偏重亞硫酸氫鹽的限制性酶切分析(COBRA)檢測早期胚胎中印跡基因Peg和H19以及逆轉(zhuǎn)座子LINE1的DNA甲基化水平。結(jié)果表明,鎘處理后,早期胚胎中H19的DNA甲基化水平顯著下降到15.44%±1.58%,而對照組為48.97%±1.66%,酶切結(jié)果也進(jìn)一步證實了測序所得的結(jié)果；Peg3在對照組和鎘處理組均沒有發(fā)生甲基化,LINE1的DNA甲基化在對照組和鎘處理組分別為34.85%±1.79%和39.39%±1.52%,差異不顯著(p0.05)。結(jié)果表明孕鼠攝入鎘會直接導(dǎo)致胚胎中父本印跡基因H19的DNA甲基化異常,但并沒有對母本印跡基因Peg3和逆轉(zhuǎn)座子LINE1的DNA甲基化產(chǎn)生顯著性影響。4.全文結(jié)論鎘暴露能夠影響小鼠早期胚胎中DNA甲基化模式,早期鎘暴露能影響小鼠肝臟和腎臟中DNA甲基化模式,但是對卵巢中DNA甲基化模式的影響較小。
【關(guān)鍵詞】：小鼠模型 鎘 組織 早期胚胎 DNA甲基化 基因印記
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.3
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 縮略語表9-10
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述10-24
• 第一章 DNA甲基化研究進(jìn)展10-18
• 1 DNA甲基化的形成機制10-11
• 2 DNA甲基化在胚胎發(fā)育過程中的作用11-13
• 3 DNA去甲基化機制13-15
• 4 DNA甲基化抑制基因轉(zhuǎn)錄的機制15-16
• 5 環(huán)境因素對DNA甲基化的影響16-17
• 6 DNA甲基化與癌癥17
• 7 結(jié)語與展望17-18
• 第二章 鎘中毒研究進(jìn)展18-24
• 1 概述18-19
• 2 鎘中毒的研究進(jìn)展19-22
• 2.1 鎘對肝臟的毒性損傷19
• 2.2 鎘對腎臟的毒性損傷19-21
• 2.3 鎘對生殖系統(tǒng)的影響21-22
• 2.4 鎘對DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的影響22
• 3 本研究目的和意義22-24
• 第二篇 試驗研究24-57
• 第一章 鎘對組織中DMMs和MTs的基因表達(dá)水平的影響24-31
• 1 材料和方法24-27
• 1.1 實驗材料24-25
• 1.2 實驗方法25-27
• 2 結(jié)果27-29
• 2.1 鎘對肝臟中DNMTs和MTs的影響28
• 2.2 鎘對腎臟中DNMTs和MTs的影響28-29
• 2.3 鎘對卵巢中DNMTs和MTs的影響29
• 3 討論29-31
• 第二章 鎘對小鼠肝臟、腎臟和卵巢中DNA甲基化的影響31-46
• 1 材料和方法31-36
• 1.1 材料31-32
• 1.2 實驗方法32-36
• 2 結(jié)果36-44
• 2.1 鎘對基因組DNA甲基化的影響36-37
• 2.2 鎘對肝臟中DNA甲基化的影響37-40
• 2.3 鎘對腎臟中DNA甲基化的影響40-42
• 2.4 鎘對卵巢中DNA甲基化的影響42-44
• 3. 討論44-46
• 第三章 鎘對早期胚胎中DNA甲基化的影響46-57
• 1 材料和方法46-50
• 1.1 材料46-47
• 1.2 方法47-50
• 2 結(jié)果50-55
• 2.1 鎘對早期胚胎中DNA甲基化的影響52-55
• 2.2 酶切結(jié)果分析55
• 3 討論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-69
• 全文結(jié)論69-70
• 致謝70-71

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙艷麗,劉國琴;一種快速提取小麥DNA的方法[J];鄭州工程學(xué)院學(xué)報;2002年03期

2 彭司華,樊龍江,彭小寧,莊樹林,杜維,陳良標(biāo);Splicing-site recognition of rice (Oryza sativa L.)DNA sequences[J];Journal of Zhejiang University Science;2003年05期

3 周麗;李飛;魏剛;;動物DNA提取方法概述[J];畜牧與獸醫(yī);2008年03期

4 林忠平;劉紅軍;吳石君;馬誠;趙玉錦;王玉秀;;從植物材料中分離DNA[J];Journal of Integrative Plant Biology;1979年01期

5 陳翠霞，，于元杰，王洪剛;棉花DNA的快速提純[J];山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;1996年03期

6 郭成亮,程東升,鄭德勝;RFLPs IN INTERNAL TRANSCRIBED SPACERS OF RIBOSOMAL DNA FROM THREE SPECIES OF TILITIA[J];Journal of Northeast Forestry University;1996年01期

7 ;The Study of Relativity between the DNA Conformation and the Canceration[J];Journal of Northeast Agricultural University(English Edition);1997年02期

8 唐加文;;品牌DNA簡說[J];中國農(nóng)資;2013年35期

9 劉厚淳,段發(fā)平;DNA芯片技術(shù)及其在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用[J];世界農(nóng)業(yè);2000年12期

10 楊瑞馥;從土壤中分離DNA的研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2000年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議暨浙江省計劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨生殖健康講習(xí)班論文匯編[C];2011年

3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點致動下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2008年

5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測外周血中游離DNA的應(yīng)用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2009年

7 周紅;鄭江;王良喜;丁國富;魯永玲;潘文東;羅平;肖光夏;;CpG DNA誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)綜合征的作用及其機制研究[A];全國燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會論文匯編[C];2004年

8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會論文摘要[C];2005年

9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國電化學(xué)會議論文摘要集（下集）[C];2005年

10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會2006年年會暨循環(huán)經(jīng)濟(jì)專家論壇論文集[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報記者 袁滿;平安：把“領(lǐng)先”作為DNA[N];經(jīng)濟(jì)觀察報;2006年

2 舒放;編織一個DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2006年

3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日報;2004年

5 本報記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日報;2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應(yīng)用DNA技術(shù)一年偵破案件1887起[N];人民公安報;2011年

7 本報記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日報;2011年

8 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報;2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測導(dǎo)致疾病的基因損傷[N];科技日報;2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日報;2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 唐陽;基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年

2 池晴佳;DNA動力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 胡璐璐;哺乳動物DNA去甲基化過程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴(kuò)增的DNA自組裝技術(shù)的研究[D];南京大學(xué);2014年

5 黃學(xué)鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 隋江東;APE1促進(jìn)DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護(hù)中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細(xì)胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年

8 王璐;哺乳動物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)中的作用及機制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運動學(xué)建模及誤差實時校正方法[D];沈陽理工大學(xué);2014年

2 聞金燕;水溶性羧基和吡啶基咔咯大環(huán)與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

3 江懌雨;水溶性羧酸卟啉及其配合物與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

4 高志森;比較外周游離循環(huán)腫瘤DNA與癌胚抗原監(jiān)測非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)前后腫瘤負(fù)荷變化的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 丁浩;血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對肺癌診斷價值的研究[D];河北大學(xué);2015年

6 王鵬;基于碳點@氧化石墨烯復(fù)合材料DNA生物傳感器的構(gòu)建及用于PML/RARα基因檢測[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李海青;轉(zhuǎn)堿篷和鹽角草總DNA的耐鹽紫花苜蓿的選育[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

8 李婷婷;小鼠DNA模式識別重要受體的分子結(jié)構(gòu)特征及其功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 劉瑞斯;抗癌藥物奧沙利鉑與DNA相互作用的原子力顯微鏡觀察研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 熊忠;芳香二肽與一價金屬離子間相互作用及DNA切割活性的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

本文編號：968700